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protein expression of SIRT1，p-Akt，p-GSK3β and β-catenin in hippocampus were detected 24 h after last medication. RESULTS：
Compared with Sham group，cerebral tissue water content，EB content，the number of apoptotic cells in cerebral cortex as well as
the levels of IL-1β and TNF-α in cerebral tissue were increased significantly（P＜0.05），while the protein expression of SIRT1，
p-Akt，p-GSK3β and β-catenin in hippocampus were decreased significantly（P＜0.05）. Compared with CLP group，cerebral tissue
water content，EB content，the number of apoptotic cells in cerebral cortex as well as the levels of IL-1β and TNF-α in cerebral
tissue were decreased significantly in CLP+Dex group（P＜0.05），while the protein expression of SIRT1，p-Akt，p-GSK3β and
β-catenin in hippocampus were increased significantly（P＜0.05）. Sirtinol could significantly reverse the above-mentioned cerebral
protection and factor regulation effects of Dex（P＜0.05）. CONCLUSIONS：Dex can protect the cerebral tissue of sepsis model
rats，which may play an anti-inflammatory and anti-apoptotic role by activating SIRT1/Akt/GSK3β/β-catenin signaling pathway，so
as to reduce cerebral edema，protect blood-brain barrier and reduce cerebral injury.
KEYWORDS Dexmedetomidine； Sepsis； Cerebral injury； Brain protection effect； SIRT1/Akt/GSK3 β/β-catenin signaling
pathway；Inflammation reaction；Mechanism；Rats

脓毒症是各种感染、重度烧创伤、休克及外科大手 1.2 药物与试剂
术后临床重症患者的严重并发症之一，是感染诱发的全 注射用 Dex（扬子江药业集团有限公司，批号：
身炎症反应综合征 。脓毒症伴脑功能障碍是脓毒症患 20041631，规格：2 mL∶0.2 mg）；SIRT1抑制剂Sirtinol（美
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者死亡率上升的重要原因 。右美托咪定（Dexmedeto- 国Selleck公司，批号：S280401，纯度：＞97％）；戊巴比妥
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midine，Dex）是一种新型高选择性α2 受体激动剂，其可 钠（国药集团化学试剂有限公司，批号：20090505）；磷酸
通过血脑屏障，具有镇静、镇痛等作用且不引起呼吸抑 盐 缓 冲 液（PBS，碧 云 天 生 物 技 术 有 限 公 司 ，批 号 ：
制，已被广泛应用于术前镇静用药、术中全身麻醉辅助 CO221A）；伊文思蓝（EB，批号：C195555）、原位末端标
[3]
用药、术后镇痛等领域 。研究表明，Dex对脓毒血症模 记（TUNEL）细胞凋亡检测试剂盒（批号：T2190-50T）、
型大鼠有保护作用，但其发挥保护作用的具体机制目前 丙烯酰胺（批号：A8080-Amrecso）、过硫酸铵（批号：
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尚不完全清楚 。沉默信息调节因子 1（Silent informa- A8090）、二甲基甲酰胺（批号：D4670）、Triton-X100（批
tion regulator 1，SIRT1）是一种具有组蛋白脱乙酰化酶活 号：T8200）、BCA 试剂盒（批号：PC0020）、二甲基亚砜
性的转录调节因子，已有研究报道，SIRT1的激活在脑缺 （DMSO，批号：D8370）均购自北京索莱宝科技有限公
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血再灌注损伤 、蛛网膜下腔出血 、脓毒症脑病 等多种 司；鼠白细胞介素1β（IL-1β）酶联免疫吸附测定（ELISA）
脑部疾病中发挥了明确的脑保护作用。SIRT1过表达可 检 测 试 剂 盒（批 号 ：ab197742）、鼠 肿 瘤 坏 死 因 子 α
以增加蛋白激酶 B（Akt）的活性 ，而 Akt 是维持细胞存 （TNF-α）ELISA 检测试剂盒（批号：ab208348）均购自美
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活的关键激酶。且有研究表明，糖原合酶激酶 3（GSK3 国 Abcam 公司；PVDF 膜（北京沃比森科技有限公司）；
β）/β连环蛋白（β-catenin）通路受 Akt 的调控 。然而， 兔p-Akt多克隆抗体（批号：4060）、兔p-GSK3β多克隆抗
[9]
Dex 对脓毒症脑保护作用是否通过 SIRT1/Akt/GSK3β/ 体（批号：9323）、兔β-catenin多克隆抗体（批号：9582）均
β-catenin 通路发挥作用目前尚不明确。Sirtinol 是一种 购自美国 Cell Signaling Technology 公司；兔 SIRT1 多克
高效的去乙酰化酶（Sirtuin）抑制剂，Grozinger CM 等 [10] 隆抗体（批号：ab189494）、兔神经元核抗原（NeuN）多克
发现在体外细胞中 Sirtinol 能够抑制 SIRT1 的表达。因 隆抗体（批号：ab177487）、内参β-actin（批号：ab8226）均
此，本研究旨在通过考察Dex及Sirtinol的干预对脓毒症 购自美国Abcam公司；绿色荧光二抗（美国Thermo Fish-
模型大鼠脑损伤中 SIRT1/Akt/GSK3β/β-catenin 信号通 er Scientific 公司，批号：A32731）；辣根过氧化物酶标记
路的影响，来探讨Dex对脓毒症模型大鼠脑保护的作用 山羊抗兔免疫球蛋白 G（IgG）二抗（北京中杉金桥生物
机制，为临床用药提供参考。 技术公司，批号：ZB-2301）。
1 材料 1.3 动物
1.1 仪器 健康雄性SD大鼠80只，体质量250～300 g，购自北
68526 型立体定位仪（深圳瑞沃德生命科技有限公 京华阜康生物科技股份有限公司[动物生产许可证号：
司）；KDS100型注射泵（美国KD Scientific公司）；701RN SCXK（京）2019-0008]。动物由华北理工大学中心实验
型微量注射器（瑞士 Hamilton 公司）；4-15C 型常温离心 室进行专人饲养，饲养条件为安静、通风、清洁、昼夜室
机（美国 Sigma 公司）；CM1900 型冰冻切片机（德国 Lei- 温22～25 ℃、相对湿度40％～55％、自然光线12 h/12 h
ca 公司）；RL157252 型免疫荧光显微镜（河北润创科技 昼夜交替照明。大鼠实验前分笼饲养1周，以适应环境。
开发有限公司）；Tissuelyser-192 型组织匀浆仪（上海净 2 方法
信实业发展有限公司）；H·SWX-600BS 型恒温水浴箱 2.1 分组、造模与给药
（济宁市翰业机械设备有限公司）；125-0143 型酶标仪、 将 80 只大鼠随机分为假手术组（Sham 组）、脓毒症
12003153型凝胶成像仪（美国Bio-Rad公司）。 组（CLP 组）、CLP+Dex 组（10 μg/kg Dex）、CLP+Dex+

·2622 · China Pharmacy 2020 Vol. 31 No. 21 中国药房 2020年第31卷第21期