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protein expression of SIRT1,p-Akt,p-GSK3β and β-catenin in hippocampus were detected 24 h after last medication. RESULTS:
        Compared with Sham group,cerebral tissue water content,EB content,the number of apoptotic cells in cerebral cortex as well as
        the levels of IL-1β and TNF-α in cerebral tissue were increased significantly(P<0.05),while the protein expression of SIRT1,
        p-Akt,p-GSK3β and β-catenin in hippocampus were decreased significantly(P<0.05). Compared with CLP group,cerebral tissue
        water content,EB content,the number of apoptotic cells in cerebral cortex as well as the levels of IL-1β and TNF-α in cerebral
        tissue were decreased significantly in CLP+Dex group(P<0.05),while the protein expression of SIRT1,p-Akt,p-GSK3β and
        β-catenin in hippocampus were increased significantly(P<0.05). Sirtinol could significantly reverse the above-mentioned cerebral
        protection and factor regulation effects of Dex(P<0.05). CONCLUSIONS:Dex can protect the cerebral tissue of sepsis model
        rats,which may play an anti-inflammatory and anti-apoptotic role by activating SIRT1/Akt/GSK3β/β-catenin signaling pathway,so
        as to reduce cerebral edema,protect blood-brain barrier and reduce cerebral injury.
        KEYWORDS     Dexmedetomidine; Sepsis; Cerebral injury; Brain protection effect; SIRT1/Akt/GSK3 β/β-catenin signaling
        pathway;Inflammation reaction;Mechanism;Rats


            脓毒症是各种感染、重度烧创伤、休克及外科大手                          1.2 药物与试剂
        术后临床重症患者的严重并发症之一,是感染诱发的全                                注射用 Dex(扬子江药业集团有限公司,批号:
        身炎症反应综合征 。脓毒症伴脑功能障碍是脓毒症患                            20041631,规格:2 mL∶0.2 mg);SIRT1抑制剂Sirtinol(美
                         [1]
        者死亡率上升的重要原因 。右美托咪定(Dexmedeto-                       国Selleck公司,批号:S280401,纯度:>97%);戊巴比妥
                               [2]
        midine,Dex)是一种新型高选择性α2 受体激动剂,其可                     钠(国药集团化学试剂有限公司,批号:20090505);磷酸
        通过血脑屏障,具有镇静、镇痛等作用且不引起呼吸抑                            盐 缓 冲 液(PBS,碧 云 天 生 物 技 术 有 限 公 司 ,批 号 :
        制,已被广泛应用于术前镇静用药、术中全身麻醉辅助                            CO221A);伊文思蓝(EB,批号:C195555)、原位末端标
                            [3]
        用药、术后镇痛等领域 。研究表明,Dex对脓毒血症模                          记(TUNEL)细胞凋亡检测试剂盒(批号:T2190-50T)、
        型大鼠有保护作用,但其发挥保护作用的具体机制目前                            丙烯酰胺(批号:A8080-Amrecso)、过硫酸铵(批号:
                     [4]
        尚不完全清楚 。沉默信息调节因子 1(Silent informa-                  A8090)、二甲基甲酰胺(批号:D4670)、Triton-X100(批
        tion regulator 1,SIRT1)是一种具有组蛋白脱乙酰化酶活               号:T8200)、BCA 试剂盒(批号:PC0020)、二甲基亚砜
        性的转录调节因子,已有研究报道,SIRT1的激活在脑缺                        (DMSO,批号:D8370)均购自北京索莱宝科技有限公
                                     [6]
                    [5]
                                                 [7]
        血再灌注损伤 、蛛网膜下腔出血 、脓毒症脑病 等多种                          司;鼠白细胞介素1β(IL-1β)酶联免疫吸附测定(ELISA)
        脑部疾病中发挥了明确的脑保护作用。SIRT1过表达可                          检 测 试 剂 盒(批 号 :ab197742)、鼠 肿 瘤 坏 死 因 子 α
        以增加蛋白激酶 B(Akt)的活性 ,而 Akt 是维持细胞存                    (TNF-α)ELISA 检测试剂盒(批号:ab208348)均购自美
                                    [8]
        活的关键激酶。且有研究表明,糖原合酶激酶 3(GSK3                         国 Abcam 公司;PVDF 膜(北京沃比森科技有限公司);
        β)/β连环蛋白(β-catenin)通路受 Akt 的调控 。然而,                 兔p-Akt多克隆抗体(批号:4060)、兔p-GSK3β多克隆抗
                                               [9]
        Dex 对脓毒症脑保护作用是否通过 SIRT1/Akt/GSK3β/                  体(批号:9323)、兔β-catenin多克隆抗体(批号:9582)均
        β-catenin 通路发挥作用目前尚不明确。Sirtinol 是一种                 购自美国 Cell Signaling Technology 公司;兔 SIRT1 多克
        高效的去乙酰化酶(Sirtuin)抑制剂,Grozinger CM 等           [10]  隆抗体(批号:ab189494)、兔神经元核抗原(NeuN)多克
        发现在体外细胞中 Sirtinol 能够抑制 SIRT1 的表达。因                  隆抗体(批号:ab177487)、内参β-actin(批号:ab8226)均
        此,本研究旨在通过考察Dex及Sirtinol的干预对脓毒症                      购自美国Abcam公司;绿色荧光二抗(美国Thermo Fish-
        模型大鼠脑损伤中 SIRT1/Akt/GSK3β/β-catenin 信号通              er Scientific 公司,批号:A32731);辣根过氧化物酶标记
        路的影响,来探讨Dex对脓毒症模型大鼠脑保护的作用                           山羊抗兔免疫球蛋白 G(IgG)二抗(北京中杉金桥生物
        机制,为临床用药提供参考。                                       技术公司,批号:ZB-2301)。
        1 材料                                                1.3 动物
        1.1 仪器                                                  健康雄性SD大鼠80只,体质量250~300 g,购自北
            68526 型立体定位仪(深圳瑞沃德生命科技有限公                       京华阜康生物科技股份有限公司[动物生产许可证号:
        司);KDS100型注射泵(美国KD Scientific公司);701RN              SCXK(京)2019-0008]。动物由华北理工大学中心实验
        型微量注射器(瑞士 Hamilton 公司);4-15C 型常温离心                  室进行专人饲养,饲养条件为安静、通风、清洁、昼夜室
        机(美国 Sigma 公司);CM1900 型冰冻切片机(德国 Lei-                温22~25 ℃、相对湿度40%~55%、自然光线12 h/12 h
        ca 公司);RL157252 型免疫荧光显微镜(河北润创科技                     昼夜交替照明。大鼠实验前分笼饲养1周,以适应环境。
        开发有限公司);Tissuelyser-192 型组织匀浆仪(上海净                  2 方法
        信实业发展有限公司);H·SWX-600BS 型恒温水浴箱                       2.1 分组、造模与给药
        (济宁市翰业机械设备有限公司);125-0143 型酶标仪、                          将 80 只大鼠随机分为假手术组(Sham 组)、脓毒症
        12003153型凝胶成像仪(美国Bio-Rad公司)。                        组(CLP 组)、CLP+Dex 组(10 μg/kg Dex)、CLP+Dex+


        ·2622 ·  China Pharmacy 2020 Vol. 31 No. 21                                 中国药房    2020年第31卷第21期
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