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protein expression of SIRT1,p-Akt,p-GSK3β and β-catenin in hippocampus were detected 24 h after last medication. RESULTS:
Compared with Sham group,cerebral tissue water content,EB content,the number of apoptotic cells in cerebral cortex as well as
the levels of IL-1β and TNF-α in cerebral tissue were increased significantly(P<0.05),while the protein expression of SIRT1,
p-Akt,p-GSK3β and β-catenin in hippocampus were decreased significantly(P<0.05). Compared with CLP group,cerebral tissue
water content,EB content,the number of apoptotic cells in cerebral cortex as well as the levels of IL-1β and TNF-α in cerebral
tissue were decreased significantly in CLP+Dex group(P<0.05),while the protein expression of SIRT1,p-Akt,p-GSK3β and
β-catenin in hippocampus were increased significantly(P<0.05). Sirtinol could significantly reverse the above-mentioned cerebral
protection and factor regulation effects of Dex(P<0.05). CONCLUSIONS:Dex can protect the cerebral tissue of sepsis model
rats,which may play an anti-inflammatory and anti-apoptotic role by activating SIRT1/Akt/GSK3β/β-catenin signaling pathway,so
as to reduce cerebral edema,protect blood-brain barrier and reduce cerebral injury.
KEYWORDS Dexmedetomidine; Sepsis; Cerebral injury; Brain protection effect; SIRT1/Akt/GSK3 β/β-catenin signaling
pathway;Inflammation reaction;Mechanism;Rats
脓毒症是各种感染、重度烧创伤、休克及外科大手 1.2 药物与试剂
术后临床重症患者的严重并发症之一,是感染诱发的全 注射用 Dex(扬子江药业集团有限公司,批号:
身炎症反应综合征 。脓毒症伴脑功能障碍是脓毒症患 20041631,规格:2 mL∶0.2 mg);SIRT1抑制剂Sirtinol(美
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者死亡率上升的重要原因 。右美托咪定(Dexmedeto- 国Selleck公司,批号:S280401,纯度:>97%);戊巴比妥
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midine,Dex)是一种新型高选择性α2 受体激动剂,其可 钠(国药集团化学试剂有限公司,批号:20090505);磷酸
通过血脑屏障,具有镇静、镇痛等作用且不引起呼吸抑 盐 缓 冲 液(PBS,碧 云 天 生 物 技 术 有 限 公 司 ,批 号 :
制,已被广泛应用于术前镇静用药、术中全身麻醉辅助 CO221A);伊文思蓝(EB,批号:C195555)、原位末端标
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用药、术后镇痛等领域 。研究表明,Dex对脓毒血症模 记(TUNEL)细胞凋亡检测试剂盒(批号:T2190-50T)、
型大鼠有保护作用,但其发挥保护作用的具体机制目前 丙烯酰胺(批号:A8080-Amrecso)、过硫酸铵(批号:
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尚不完全清楚 。沉默信息调节因子 1(Silent informa- A8090)、二甲基甲酰胺(批号:D4670)、Triton-X100(批
tion regulator 1,SIRT1)是一种具有组蛋白脱乙酰化酶活 号:T8200)、BCA 试剂盒(批号:PC0020)、二甲基亚砜
性的转录调节因子,已有研究报道,SIRT1的激活在脑缺 (DMSO,批号:D8370)均购自北京索莱宝科技有限公
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血再灌注损伤 、蛛网膜下腔出血 、脓毒症脑病 等多种 司;鼠白细胞介素1β(IL-1β)酶联免疫吸附测定(ELISA)
脑部疾病中发挥了明确的脑保护作用。SIRT1过表达可 检 测 试 剂 盒(批 号 :ab197742)、鼠 肿 瘤 坏 死 因 子 α
以增加蛋白激酶 B(Akt)的活性 ,而 Akt 是维持细胞存 (TNF-α)ELISA 检测试剂盒(批号:ab208348)均购自美
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活的关键激酶。且有研究表明,糖原合酶激酶 3(GSK3 国 Abcam 公司;PVDF 膜(北京沃比森科技有限公司);
β)/β连环蛋白(β-catenin)通路受 Akt 的调控 。然而, 兔p-Akt多克隆抗体(批号:4060)、兔p-GSK3β多克隆抗
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Dex 对脓毒症脑保护作用是否通过 SIRT1/Akt/GSK3β/ 体(批号:9323)、兔β-catenin多克隆抗体(批号:9582)均
β-catenin 通路发挥作用目前尚不明确。Sirtinol 是一种 购自美国 Cell Signaling Technology 公司;兔 SIRT1 多克
高效的去乙酰化酶(Sirtuin)抑制剂,Grozinger CM 等 [10] 隆抗体(批号:ab189494)、兔神经元核抗原(NeuN)多克
发现在体外细胞中 Sirtinol 能够抑制 SIRT1 的表达。因 隆抗体(批号:ab177487)、内参β-actin(批号:ab8226)均
此,本研究旨在通过考察Dex及Sirtinol的干预对脓毒症 购自美国Abcam公司;绿色荧光二抗(美国Thermo Fish-
模型大鼠脑损伤中 SIRT1/Akt/GSK3β/β-catenin 信号通 er Scientific 公司,批号:A32731);辣根过氧化物酶标记
路的影响,来探讨Dex对脓毒症模型大鼠脑保护的作用 山羊抗兔免疫球蛋白 G(IgG)二抗(北京中杉金桥生物
机制,为临床用药提供参考。 技术公司,批号:ZB-2301)。
1 材料 1.3 动物
1.1 仪器 健康雄性SD大鼠80只,体质量250~300 g,购自北
68526 型立体定位仪(深圳瑞沃德生命科技有限公 京华阜康生物科技股份有限公司[动物生产许可证号:
司);KDS100型注射泵(美国KD Scientific公司);701RN SCXK(京)2019-0008]。动物由华北理工大学中心实验
型微量注射器(瑞士 Hamilton 公司);4-15C 型常温离心 室进行专人饲养,饲养条件为安静、通风、清洁、昼夜室
机(美国 Sigma 公司);CM1900 型冰冻切片机(德国 Lei- 温22~25 ℃、相对湿度40%~55%、自然光线12 h/12 h
ca 公司);RL157252 型免疫荧光显微镜(河北润创科技 昼夜交替照明。大鼠实验前分笼饲养1周,以适应环境。
开发有限公司);Tissuelyser-192 型组织匀浆仪(上海净 2 方法
信实业发展有限公司);H·SWX-600BS 型恒温水浴箱 2.1 分组、造模与给药
(济宁市翰业机械设备有限公司);125-0143 型酶标仪、 将 80 只大鼠随机分为假手术组(Sham 组)、脓毒症
12003153型凝胶成像仪(美国Bio-Rad公司)。 组(CLP 组)、CLP+Dex 组(10 μg/kg Dex)、CLP+Dex+
·2622 · China Pharmacy 2020 Vol. 31 No. 21 中国药房 2020年第31卷第21期