Page 40 - 2020年21期
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时，对细胞的毒性作用最强，因此在后续试验中均设定
                                                            胶束中PTX的浓度为10 μmol/L。结果见图2。
                                                                                空白对照
                                                                                ART胶束
                                                                                PTX胶束
                                                                                PTX/ART胶束
                                                                                PFV修饰PTX/ART共载靶向胶束
                                                                     120
                                                                     ％  90
                                                                     细胞存活率，  60    ＊
                                                                      30
                                                                                       ＊
                                                                                           ＊
                                                                                              ＊
                                                                      0                           ＊
         图1 PFV修饰PTX/ART共载靶向胶束的透射电镜图                                       1/64  1/32  1/16  1/8  1/4  1/2  1
                                                                              各给药胶束与处方浓度的稀释比例
        Fig 1 TEM images of PFV-modified PTX/ART co-                              A.细胞存活率
               loaded targeting micelles                              4
        2.3 细胞培养                                                      3
            将 BGC-823 细胞接种到含 1％青链霉素和 10％胎                            IC50，mol/L  μ  2
        牛血清的RPMI 1640培养基中，在37 ℃、5％ CO2条件下                             1                       ＊
        培养（下同）。第 2 天换液，隔天传代，采用 4～6 代细胞                                0
        进行细胞试验。                                                           PTX胶束   PTX/ART胶束  PFV修饰PTX/ART共载靶向胶束
                                                                                   B. IC50
        2.4 胶束对BGC-823细胞的毒性作用考察                                注：PFV修饰PTX/ART共载靶向胶束与其他胶束比较，P＜0.05
                                                                                                    ＊
            采用SRB法测定胶束的细胞毒性作用。按“2.1”项                          Note： PFV-modified PTX/ART co-loaded targeted micelles vs.
                                                                      ＊
        下方法分别制备空白胶束（空白对照）、PTX 胶束、ART                        other micelles，P＜0.05
        胶束、PTX/ART 胶束和 PFV 修饰 PTX/ART 共载靶向胶                      图2   不同胶束对BGC-823细胞的毒性作用
        束，各含药胶束中PTX浓度均为10 μmol/L，ART浓度均                     Fig 2  Toxicity effect of different micelles to BGC-823
        为100 μmol/L。采用二倍稀释法，以PBS（pH＝7.4）为稀                        cells
        释溶剂，使各胶束的药物浓度分别为处方浓度的 1/2、                          2.5  BGC-823细胞对胶束的摄取情况考察
        1/4、1/8、1/16、1/32、1/64，作为系列稀释倍数样品进行试                    以香豆素作为荧光探针考察细胞对胶束的摄取情
        验。将对数生长期的细胞接种至 96 孔板中（1.5×10                   4    况。以香豆素代替PTX，按“2.1”项下方法制备香豆素胶
        个/孔），分为不同稀释倍数的胶束给药组，先用不含药的                          束、香豆素/ART胶束、PFV修饰香豆素/ART共载靶向胶
                                                                                       [3]
        培养基培养 24 h 后，吸弃培养基，然后加入相应的含药                        束（香豆素的含量均为2 μmol/L ，其余药物和辅料的用
        培养基[180 μL/孔，其中胶束给药量均为20 μL/孔]，继续                   量不变），并同时制备空白胶束作为空白对照。取对数
        培养 48 h。然后以 10％三氯乙酸固定细胞，加入 0.4％                     生长期BGC-823细胞接种至6孔板中（2.5×10 个/孔），分
                                                                                                  5
        SRB 染料染色 22 min，再加入 Tris 碱液溶解混合后的染                  为不同胶束给药组，先用不含药的培养基培养 24 h 后，
        料染色25 min。最后，采用酶标仪测定各孔在540 nm波                      弃培养基，然后加入新鲜含药培养基[180 μL/孔，其中胶
        长下的吸光度（OD）值，并计算细胞存活率：[细胞存活率                         束给药量均为 20 μL/孔（含药胶束中 ART 浓度均为 100
        （％）＝给药组 OD 值/空白对照组 OD 值×100％]。试验                    μmol/L）]，继续培养 3 h。然后以 PBS 洗板，以 0.25％胰
        重复3次。采用GraphPad 6.0软件计算不同胶束对细胞                      蛋白酶消化细胞后加入 0.5 mL PBS。采用流式细胞仪
        的半数抑制浓度（IC50 ）。采用 SPSS 18.0 统计软件进行                  测定各组细胞荧光强度，该值越大，说明细胞对胶束的
        数据分析，数据以 x±s 表示，多组间比较采用单因素方                         摄取越多。
        差分析，组间两两比较采用 LSD-t 检验，P＜0.05 表示差                        结果显示，空白对照组、香豆素胶束组、香豆素/ART
        异有统计学意义。                                            胶束组、PFV修饰香豆素/ART共载靶向胶束组细胞的荧
                                                                                         4
                                                                                                          6
            结果显示，空白胶束对细胞无明显毒性作用，PTX                         光强度分别为（2.18±0.09）×10 、（2.49±0.24）×10 、
        胶束、PTX/ART 胶束和 PFV 修饰 PTX/ART 共载靶向胶                （2.64±0.09）×10 、（3.42±0.31）×10 ；其中，PFV 修饰香
                                                                                           6
                                                                          6
        束对细胞的 IC50 分别为（3.09±0.22）、（1.93±0.24）、              豆素/ART 共载靶向胶束的荧光强度最大，且显著大于
        （1.11±0.15）μmol/L（均以 PTX 计，下同），且 PFV 修饰             其他各胶束样品（P＜0.05），表明 PFV 修饰后可提高药
        PTX/ART 共载靶向胶束对细胞的 IC50显著低于 PTX 胶                   物的靶向性，结果见图3。
        束和PTX/ART胶束（P＜0.05）。当胶束浓度为处方浓度                      2.6 胶束对BGC-823细胞的靶向性考察
        的 1/16～1（即 PTX 浓度为 0.63～10 μmol/L）时，PFV 修               以香豆素作为荧光探针考察胶束的靶向性。以香
        饰PTX/ART共载靶向胶束组细胞的存活率较其他各组                          豆素代替 PTX，按“2.1”项下方法制备香豆素胶束、香豆
        均显著降低（P＜0.05）；当胶束中 PTX 浓度为 10 μmol/L                素/ART胶束、PFV修饰香豆素/ART共载靶向胶束；同法


        ·2594 ·  China Pharmacy 2020 Vol. 31 No. 21                                 中国药房    2020年第31卷第21期
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