Page 39 - 2020年21期
P. 39

cells.
        KEYWORDS    Cell-penetrating peptide；Paclitaxel；Micelles；Artesunate；Human gastric cancer BGC-823 cells；Targeting effects；
        Anti-tumor effect


                                                  [1]
            胃癌是消化道肿瘤中发病率最高的恶性肿瘤 。目                         甲醇等试剂均为分析纯，水为娃哈哈牌纯净水。
        前，化疗是胃癌的主要治疗方式，但化疗后残余的癌细                           1.3 细胞
        胞会通过侵袭作用导致肿瘤转移，且化疗药物会增加机                               人胃癌 BGC-823 细胞购自中国医学科学院基础医
                                      [2]
        体的毒副反应，导致患者预后较差 。紫杉醇（PTX）具                         学研究所。
        有较高抗癌活性，在临床用于多种癌症的治疗，但溶解                           2 方法与结果
        性低、生物利用度差、无选择性分布是限制其临床应用                           2.1 胶束的制备
                  [3]
        的主要原因 。提高PTX的靶向性以降低其毒副作用并                              按照文献方法 ，精密称取 DSPE-PEG2000-PFV 1.5
                                                                            [12]
        抑制肿瘤细胞转移显得尤为重要。细胞穿膜肽（简称                            mg、ART 2 mg、Soluplus 60 mg、TPGS1000 12 mg、PTX 0.5
       “PFV”）具有细胞穿透能力强的特点，并且能增加药物                          mg于50 mL圆底烧瓶中，加5 mL三氯甲烷使溶解，然后
        在肿瘤部位的蓄积 。青蒿琥酯（ART）具有抑制肿瘤血                         在40 ℃水浴下减压旋转蒸发除去三氯甲烷。待烧瓶底
                        [4]
        管新生、抑制肿瘤侵袭转移、增敏抗肿瘤化疗药物的作                           部形成一层均匀白色膜时，加入磷酸盐缓冲液（PBS，
        用 [5-7] 。胶束具有粒径小和对机体毒性低等优点，可增加                     pH 7.4）5 mL，在35 ℃水浴下振摇11 min，再以微孔滤膜
        化疗药物的溶解度并提高化疗药物对肿瘤的被动靶向                            （0.22 μm）滤过 2 次，随后将滤过的胶束溶液转移至 5
        性 [8-11] 。为提高PTX的肿瘤靶向性及其对肿瘤细胞侵袭                    mL量瓶中，以PBS定容至刻度，即得PFV修饰PTX/ART
        和转移的抑制作用，本课题组前期优化工艺后采用薄膜                           共载靶向胶束。同时，按照上述方法制备空白胶束（空
        水化法制备了 PFV 修饰 PTX/ART 共载靶向胶束，其中                    白对照）、PTX胶束、ART胶束和PTX/ART胶束，其中空
        PFV用来提高细胞对药物的摄取能力，PTX作为化疗药                         白胶束只添加处方量的 Soluplus 和 TPGS1000，PTX 胶束
                                            [12]
        物，ART用来抑制肿瘤细胞的侵袭和转移 。本研究在                          只添加处方量的 Soluplus、TPGS1000和 PTX，ART 胶束只
        前期研究基础上，对所制胶束进行表征后并进一步考察                           添加处方量的 Soluplus、TPGS1000和 ART，PTX/ART 胶束
        PFV 修饰 PTX/ART 共载靶向胶束的体外抗肿瘤作用，                     只添加处方量的Soluplus、TPGS1000、ART和PTX。
        为胶束包载PTX的靶向给药和ART抑制肿瘤细胞侵袭                          2.2  胶束的表征
        和转移的相关制剂开发提供参考。                                        按照本课题组前期建立的方法 测定胶束的包封
                                                                                           [12]
        1 材料                                               率，采用激光散射粒径测定仪和透射电镜分别测定胶束
        1.1  仪器                                            的粒径、多分散性指数（PDI）、Zeta电位并观察其形态学
            FA1004 型电子天平（上海越平科学仪器有限公                       特征，每个试验重复 3 次。结果显示，载药胶束中 PTX
        司）；SG3300H型超声波清洗机（上海冠特超声仪器有限                       和 ART 的包封率均大于 90％；5 种胶束的粒径在 47～
        公司）；RE52CS 型旋转蒸发器（上海亚荣生化仪器厂）；                      51 nm之间，其中PFV修饰PTX/ART共载靶向胶束的粒
        DZKW-S-4 型恒温水浴锅（上海医疗器械公司医疗器械                       径分布具有良好的集中性且高度集中在 51 nm 左右；5
        五厂）；HBS-1096A型酶标仪（南京德铁实验设备有限公                      种胶束的PDI均小于0.20，Zeta电位均呈电中性；外观形
        司）；JEM-1200EX 型透射电镜（日本 Tokyo 公司）；Ac-               态为圆球形。胶束的包封率、粒径、PDI 和 Zeta 电位测
        curi C型流式细胞仪（美国Becton Dickinson公司）；ZS90            定结果见表1；PFV修饰PTX/ART共载靶向胶束的透射
        型激光散射粒径测定仪（英国Malvern公司）；WJ-80B-Ⅱ                   电镜图见图1（其余胶束图略）。
        型细胞培养箱（上海新苗医疗器械制造有限公司）；                            表1    不同胶束的包封率、粒径、PDI和Zeta电位测定结
        SW-CJ-1D型超净台（上海沪净医疗器械有限公司）。
                                                                 果（x±±s，n＝3）
        1.2 药品与试剂
                                                           Tab 1   The encapsulation efficiency，particle size，
            PTX原料药（批号：MB1178，纯度：≥99％）、ART原
                                                                   PDI and Zeta potential of different micelles
        料药（批号：J0101A，纯度：≥98％）、TPGS1000 （批号：
                                                                  （x±±s，n＝3）
        MB2036）、胰蛋白酶、磺基罗丹明 B（SRB）、青链霉素双                                         包封率，％
        抗均购自大连美仑生物技术有限公司；RPMI 1640培养                       样品                 PTX   ART   粒径，nm  PDI  Zeta电位，
                                                                                                       mV
        基、胎牛血清（美国Gibco公司）；Soluplus两亲性接枝共                   PFV修饰PTX/ART共载靶向胶束 91.32±1.27 90.03±1.81 51.30±3.95 0.19±0.01 0.21±0.02
                                                           PTX/ART胶束        92.14±1.76 91.38±1.51 49.43±3.21 0.19±0.01 0.19±0.02
        聚物（德国BASF公司）；二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙
                                                           ART胶束               0   92.16±1.38 47.21±2.26 0.18±0.01 0.17±0.01
        二醇 2000-PFV（DSPE-PEG2000-PFV）修饰胶束的靶向材料             PTX胶束            94.02±1.21  0  48.21±2.10 0.18±0.01 0.18±0.01
        由辽宁中医药大学药学院药剂实验室合成；三氯甲烷、                           空白胶束                0     0   47.28±3.62 0.18±0.02 0.17±0.01


        中国药房    2020年第31卷第21期                                             China Pharmacy 2020 Vol. 31 No. 21  ·2593 ·
   34   35   36   37   38   39   40   41   42   43   44