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们产生了较大的健康危害，故抗缺氧药物的研发具有重                            2 方法
        要意义 。                                               2.1 分组与给药
              [3]
            已有研究显示，虽然多种物质[如谷胱甘肽抗氧化                              将 800 只 ICR 小鼠随机分为 5 组，每组 160 只，分别
        酶、超氧化物歧化酶（SOD）等]在机体中均具有抗氧化                          为空白对照组，芫参颗粒低、中、高剂量组（10、20、40
        和抗缺氧的作用 ，但相关的上市制剂却严重缺乏。芫                            g/kg，给药剂量根据预实验结果确定）和红景天口服液组
                       [4]
        参颗粒是采用藏药秘方制备而成，是以手掌参、芫根、西                          （阳性对照，2 mL/kg） 。空白对照组小鼠灌胃生理盐
                                                                               [9]
        洋参 3 味药材为主要成分，此 3 味药材在西藏地区作为                        水，其余各给药组小鼠灌胃相应药物，每天给药1次，连
        膳食补充已有较为广泛的应用。其中，芫根具有提升胃                            续给药30 d。
        阳的作用，藏医认为胃是“三因”平衡的基础，其对藏医                           2.2 小鼠常压耐缺氧实验
                                            [5]
        中“三因”紊乱引起的疾病具有预防作用 ；手掌参具有                               分别于给药后第 1、3、7、14、30 天，每组分别随机取
        增力生精、温肾暖肾的作用，是藏医中治疗肾虚的首选                            8只小鼠进行常压耐缺氧实验。于各时间点给药1 h后，
        草药，藏医认为人体疲劳的主要原因与肾虚有关，因此                            将小鼠分别置于 500 mL 用凡士林密封的广口瓶中（瓶
                                     [6]
        手掌参是方中抗疲劳的主要药物 ；西洋参具有补气养                            内预先放置10 g钠石灰以吸收二氧化碳和水），每瓶放1
        阴、清热生津的作用，藏医中肺属于气的贮藏，肺虚与疲                           只小鼠，从加盖后立即开始计时，直至小鼠最后一次呼
               [7]
        劳有关 。根据组方组成及民间应用可知，芫参颗粒具                            吸为止（通过观察小鼠头部起伏以及大小便失禁情况判
        有抗疲劳、预防“三因”紊乱的功效，且制剂工艺简单、副                          断），观察并记录小鼠的常压耐缺氧存活时间。
        作用小、组方药材资源丰富，是具有较高研发价值的藏                            2.3 小鼠减压耐缺氧实验
        药方剂之一 。本研究拟对芫参颗粒的抗氧化和抗缺氧                                分别于给药后第 1、3、7、14、30 天时，每组分别随机
                  [8]
        功能进行评价，为扩大其临床应用提供实验依据。                              取 8 只小鼠进行减压耐缺氧实验。于各时间点给药 1 h
        1 材料                                                后，将小鼠分别置于2 L干燥器中（瓶内预先放置10 g钠

        1.1  仪器                                             石灰以吸收二氧化碳和水），干燥器通过橡胶管连接于
            FA2004型电子天平（上海花潮电器有限公司）；JT-C                    抽气泵和玻璃平衡瓶，以抽气泵抽气至玻璃瓶内压力为
        型电子匀浆机（漯河市金田试验设备研究所）；Vor-                           200 mmHg（1 mmHg＝0.133 kPa）时，将干燥器盖盖紧并
        tex-Genie2型漩涡混合器（美国SI公司）；TG16MW型台                   打开气阀，使干燥器和玻璃瓶气压平衡。然后，从关闭
        式高速实验室离心机（湖南赫西仪器装备有限公司）；                            气阀后立即开始计时，直至小鼠最后一次呼吸为止，观
        V-1200 型可见分光光度计（南京卓恒科学仪器有限公                         察并记录小鼠的减压耐缺氧存活时间。
        司）；FYL-YS-150L型恒温孵育箱（北京福意电器有限公                      2.4  小鼠心肌、脑组织中MDA、SOD含量测定
        司）。                                                     分别于给药后第 1、3、7、14、30 天，每组分别随机取
        1.2  药品与试剂                                          8 只小鼠进行心肌、脑组织中 MDA 和 SOD 含量测定。
            芫参颗粒（西藏白克药材开发有限公司，批号：                           于各时间点给药1 h后，取小鼠以脱颈法处死，然后立即
        190505，规格：10 g/袋）；红景天口服液（西藏藏药集团股                    用锋利剪刀断头，迅速取心肌、脑组织，用冰冷生理盐水
        份有限公司，批号：170530，规格：10 mL/支）；钠石灰（天                   洗净，滤纸拭干，称质量，然后以生理盐水制成10％组织
        津市福晨化学仪器厂，批号：20171009）；30％H2O2溶液                    匀浆液。分别采用 TBA 比色法和黄嘌呤氧化酶法检测
        （廊坊鹏彩精细化工有限公司，批号：20180716）；丙二醛                      心、脑组织中 MDA、SOD 含量，具体操作均按照相应试
        （MDA）检测试剂盒（批号：180603）、SOD 检测试剂盒                     剂盒说明书进行。
        （批号：180215）购自南京建成生物工程研究所；其余试                        2.5 小鼠红细胞溶血情况测定
        剂均为分析纯，水为去离子水。                                          分别于给药后第 1、3、7、14、30 天，每组分别随机取
        1.3 动物                                              8只小鼠进行红细胞溶血实验。于各时间点给药1 h后，
            800 只清洁级 ICR 小鼠，雌雄各半，体质量 25～30                  将小鼠断头取血，采用生理盐水洗涤红细胞，并其制成
        g，由陆军军医大学实验动物中心提供，实验动物使用许                           5％的红细胞悬液。分别取红细胞悬液1 mL，加入30％
        可证号：SYXK（渝）2017-0002。小鼠饲养环境温度为                      H2O2溶液使 H2O2的终浓度为 2 mmol/L，在 37 ℃下孵育
        20～25 ℃、相对湿度为50％～60％，每周更换垫料并对                       1 h 后，以 5 000 r/min 常温离心 15 min。取上清液，用生
        笼具洗涤、消毒 1 次，每日照明 10～14 h，于每日下午加                     理盐水稀释 20 倍后，采用可见分光光度计测定 415 nm
        满料块及饮水。实验期间严格遵守动物实验的伦理                              波长处的吸光度值，以吸光度值的大小反映红细胞的溶
        要求。                                                 血率，其值越大，代表溶血率越高。


        ·2372 ·  China Pharmacy 2020 Vol. 31 No. 19                                 中国药房    2020年第31卷第19期
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