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鼻咽癌（Nasopharyngeal cancer）是一种在我国南部 公司，批号：15E27C60）；Transwell 小室（美国 Corning 公
地区高发的头颈部恶性肿瘤，在广东省的发病率很高， 司，批号：30419069）；Matrigel 胶（美国 BD 公司，批号：
故也被称为“广东癌”。目前，针对鼻咽癌的主要治疗手 354263）；RIPA 裂解液、蛋白酶抑制剂 PMSF（武汉赛维
段为放疗，但放疗后患者的总生存率仍低于 50％，且大 尔生物技术有限公司，批号：G2002-100、G2008-01D）；
部分患者在治疗后3～5年内会出现复发、化疗耐受等情 十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）试
况 [1-2] ，因此迫切需要挖掘新的治疗鼻咽癌的药物。 剂盒、二喹啉甲酸（BCA）定量试剂盒（大连美仑生物技
酪氨酸蛋白激酶（Met）也称为c-Met，是一种受体酪 术有限公司，批号：MA0388-08F、MA0082-02C）；兔源
氨酸激酶，在上皮细胞中广泛表达。在生理作用下，Met Met 多克隆抗体、鼠源 PI3K 单克隆抗体、兔源 Akt 多克
通过调控多个酪氨酸激酶[如磷脂酰肌醇-3-激酶（PI3K） 隆抗体、兔源 Bcl-2 多克隆抗体、兔源 N-cadherin 多克隆
和Rac家族GTP酶 1（RAC-1）]的磷酸化，进而调节细胞 抗体、鼠源β-肌动蛋白（β-actin）单克隆抗体（武汉三鹰生
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的增殖、迁移和分化等各项生物学功能 。在鼻咽癌患 物技术公司，批号：25869、60225、10176、12789、22018、
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者中，Met 表达升高，且与患者的不良预后相关 。此 60008）；兔源磷酸化 PI3K（p-PI3K）多克隆抗体、兔源磷
外，PI3K/蛋白激酶B（Akt）信号通路在鼻咽癌中呈异常 酸化 Akt（p-Akt）多克隆抗体（美国 CST 公司，批号：
活化，可通过调控 B 淋巴细胞瘤 2（Bcl-2）等增殖相关因 17366、4060）；辣根过氧化物酶（HRP）标记的山羊抗兔
子和 N-钙黏蛋白（N-cadherin）等迁移相关因子的表达， 二抗、HRP 标记的山羊抗鼠二抗（武汉爱博泰克生物科
促进鼻咽癌的进展；而Met可以通过促进PI3K的磷酸化 技有限公司，批号：AS014、AS003）；ECL高敏曝光液（武
从而激活PI3K/Akt信号通路 [5-6] 。多项研究表明，通过基 汉聚能慧达生物有限公司，批号：36222ES60）；二甲基亚
因工程或药理学手段抑制Met的表达或活性，能够抑制 砜（DMSO）等其余试剂均为分析纯或实验室常用规格，
鼻咽癌细胞的增殖和转移。例如人工合成的 Met 抑制 水为双蒸水。
剂PF-2341066能够显著抑制鼻咽癌细胞的增殖，并与常 1.3 细胞
规化疗药物顺铂有协同作用 ；再如利用慢病毒过表达 人鼻咽癌细胞 HONE-1 由贵州省肿瘤医院肿瘤科
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miR-34c抑制Met的表达，能够抑制鼻咽癌的侵袭性 。 馈赠。
中药是我国重要的资源宝库，五味子甲素是中药五 2 方法
味子中的有效成分之一。本课题组早期研究发现，五味 2.1 细胞培养
子甲素能够抑制多种肿瘤细胞（如肝癌和胰腺癌细胞 将 HONE-1 细胞用含 10％FBS 的 DMEM 高糖培养
等）的增殖和迁移 [9-10] 。然而，五味子甲素对鼻咽癌细胞 基在37 ℃、5％CO2的培养箱中培养，当细胞生长融合达
增殖、迁移和侵袭的影响及作用机制仍不清楚。因此， 85％时，用0.25％胰蛋白酶溶液进行消化、传代，取对数
本研究旨在探讨五味子甲素对人鼻咽癌细胞 HONE-1 生长期细胞用于后续研究。
增殖、迁移和侵袭的影响以及其分子机制，为临床治疗 2.2 CCK-8 试验检测五味子甲醇对细胞增殖能力的
鼻咽癌提供理论依据。 影响
1 材料 将细胞用 0.25％胰蛋白酶溶液消化后，以 1 000
1.1 仪器 r/min 离心 5 min，收集细胞，用含 10％FBS 的 DMEM 高
SW-CJ-1F（D）型单人工作台（苏州苏净安泰生物公 糖培养基重悬，制备成密度为2×10 个/mL的细胞悬液，
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司）；BPN-80RNP 型二氧化碳培养箱（上海一恒科学仪 按 100 μL/孔接种至 96 孔板。将细胞分为空白对照组
器有限公司）；Multiskan GO型多功能酶标仪（美国Ther- （含 0.4％DMSO）和五味子甲素不同浓度组（10、20、40
mo Fisher Scientific公司）；SZX16型倒置光学显微镜（日 μmol/L，含4％DMSO），每组设置6个复孔。同时设置不
本 Olympus 公司）；DYCZ-24K 型电泳仪、DYCZ-40D 型 加细胞和药物的调零孔。将各组细胞置于 37 ℃、5％
转膜仪（北京六一生物科技有限公司）；GelDoc XR+型 CO2的培养箱中培养过夜，然后加入相应药物，继续培养
凝胶成像仪（美国Bio-Rad公司）。 24、48 h。吸弃培养基，按 100 μL/孔的量加入 CCK-8 溶
1.2 药品与试剂 液（将CCK-8试剂与DMEM高糖培养基以体积比1∶9混
五味子甲素对照品（美国 Med Chem Express 公司， 合），继续培养2 h后，采用多功能酶标仪在450 nm波长
批号：HY-N0693，纯度：＞98％）；DMEM 高糖细胞培养 处测量每孔的吸光度（OD）值，并计算各组细胞的相对
基、胎牛血清（FBS）（美国 Gibco 公司，批号：8120103、 增殖率[细胞相对增殖率（％）＝（五味子甲素给药组OD
SA211.02）；0.25％胰蛋白酶溶液（美国Multicell公司，批 值－调零孔 OD 值）/（空白对照组 OD 值－调零孔 OD
号：325043032）；CCK-8试剂（武汉博士德生物工程有限 值）×100％]。试验重复3次。
中国药房 2020年第31卷第19期 China Pharmacy 2020 Vol. 31 No. 19 ·2377 ·
