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3.6 小鼠 TA 中 ROCK1/PTEN/Akt 信号通路相关蛋白 4 讨论
表达水平测定结果 肌肉萎缩是伴随着CKD的治疗同步发生的一种并
与假手术组比较，模型组小鼠TA中ROCK1蛋白表 发症。有研究表明，超过半数的血液透析 CKD 患者存
达水平、p-PTEN/PTEN 比值显著升高（P＜0.05），PI3K 在PEW状态 。而肌肉萎缩是CKD患者PEW的主要表
[9]
蛋白表达水平、p-Akt/Akt比值显著降低（P＜0.05）；与模 现形式，也可作为预测 CKD 患者预后的重要指标之
型组比较，四君子汤中、高剂量组和复方α-酮酸片组小 一。CKD-PEW 患者大多会缺乏必需氨基酸，复方α-酮
鼠 TA 中 ROCK1 蛋白表达水平、p-PTEN/PTEN 比值显 酸片不仅可以直接补充必需氨基酸，并且可与体内的氨
著降低（P＜0.05），PI3K 蛋白表达水平、p-Akt/Akt 比值 基结合生成必需氨基酸，使体内蛋白质合成代谢增加，
显著升高（P＜0.05）；与四君子汤低剂量组比较，四君子 改善营养状况 ，故本研究选用复方α-酮酸片作为阳性
[10]
汤中、高剂量组和复方α-酮酸片组小鼠TA中ROCK1蛋 对照药。四君子汤具有补气、益气健脾之功效，杜红莲
白表达水平、p-PTEN/PTEN 比值显著降低（P＜0.05）， 等 的研究结果证实了四君子汤能够改善脾肾两虚型
[11]
PI3K 蛋 白 表 达 水 平 、p-Akt/Akt 比 值 显 著 升 高（P＜ CKD 患者的肾功能。为了探讨四君子汤对 CKD 患者
0.05）；四君子汤中、高剂量组和复方α-酮酸片组之间小 PEW的作用，本课题组通过5/6肾切除法构建CKD小鼠
鼠 TA 中上述指标差异均无统计学意义（P＞0.05）。各 模型，同时根据CKD患者PEW的临床特点，给予4％酪
组小鼠TA中ROCK1/PTEN/Akt信号通路相关蛋白表达 蛋白饮食建立了 CKD-PEW 小鼠模型 。结果显示，四
[12]
电泳图见图3，蛋白表达水平测定结果见表7。 君子汤给药14 d后，CKD-PEW模型小鼠体质量和TA湿

ROCK1 160 kDa 质量减轻、TA横截面积减小的情况有不同程度改善，且
四君子汤还能够升高模型小鼠 TA 蛋白合成代谢、降低
PTEN 54 kDa
其蛋白分解代谢，这说明四君子汤对 CKD-PEW 模型小
鼠的骨骼肌萎缩具有一定的缓解作用。
p-PTEN 54 kDa
CKD-PEW引起的代谢性酸中毒、胰岛素抵抗、炎症
PI3K 110 kDa
反应、血管紧张素Ⅱ分泌增多等因素均可激活 Cas-
pase-3 及泛素蛋白酶体系统（Ubiquitin proteasome sys-
Akt 60 kDa
tem，UPS），导 致 肌 肉 萎 缩 [13] 。 有 研 究 表 明 ，在
p-Akt 60 kDa CKD-PEW 模型大鼠中骨骼肌严重萎缩，同时肌纤维中
促凋亡基因 Bax、Caspase-3 表达上调，而抗凋亡基因
β-actin 37 kDa
Bcl-2 表达显著下调，说明线粒体凋亡途径在骨骼肌蛋
假手术组 模型组 四君子汤 四君子汤 四君子汤 复方α-酮
低剂量组 中剂量组 高剂量组 酸片组 白能量消耗过程中具有重要作用 。本研究结果显示，
[14]
图3 各组小鼠TA中ROCK1/PTEN/Akt信号通路相关 给予四君子汤治疗 14 d 后，CKD-PEW 模型小鼠 TA 中
蛋白表达电泳图 Bax/Bcl-2 比值和 Caspase-3 mRNA 表达水平显著降低，
Fig 3 Electrophoretograms of ROCK1/PTEN/Akt sig- 说明四君子汤可抑制骨骼肌细胞凋亡，从而缓解肌肉萎
naling pathway-related proteins expression in 缩。在 CKD 中，P13K/Akt 信号通路受损是引起骨骼肌
TA of mice in each group 蛋白质丢失的主要原因。该信号通路受损后继发 UPS
表7 各组小鼠TA中ROCK1/PTEN/Akt信号通路相关 激活，继而引起 Atrogin-1 和 MuRF-1 的表达升高，这是
蛋白表达水平测定结果（x±±s，n＝5） 骨骼肌萎缩的经典机制 [15-16] 。因此，骨骼肌组织中的
Tab 7 Protein expressions of ROCK1/PTEN/Akt sig- Atrogin-1和MuRF-1的表达量可作为衡量肌肉蛋白质分
naling pathway-related proteins in TA of mice 解代谢情况的生物学标志 。本研究结果显示，四君子
[17]
in each group（x±±s，n＝5） 汤治疗 14 d 后，CKD-PEW 模型小鼠 TA 中 Atrogin-1 和
组别 ROCK1/β-actin p-PTEN/PTEN PI3K/β-actin p-Akt/Akt MuRF-1 的蛋白表达水平均显著降低，说明四君子汤可
假手术组 1.00±0.08 1.00±0.11 1.00±0.15 1.00±0.09 通过抑制 UPS 的激活来减轻 CKD-PEW 小鼠的骨骼肌
模型组 2.35±0.21 ＊ 1.98±0.15 ＊ 0.38±0.09 ＊ 0.36±0.07 ＊
四君子汤低剂量组 2.19±0.18 2.05±0.28 0.46±0.09 0.37±0.13 萎缩。
四君子汤中剂量组 1.69±0.21 #Δ 1.58±0.09 #Δ 0.62±0.04 #Δ 0.64±0.09 #Δ Caspase-3也是参与蛋白降解的蛋白酶，可切割肌球
四君子汤高剂量组 1.79±0.16 #Δ 1.57±0.16 #Δ 0.80±0.12 #Δ 0.57±0.06 #Δ 蛋白和肌原纤维蛋白，并切割特定的19S蛋白酶体亚基，
复方α-酮酸片组 1.44±0.12 #Δ 1.46±0.07 #Δ 0.77±0.10 #Δ 0.71±0.13 #Δ
加速 26S 蛋白酶体的降解，而且 Caspase-3 能够切除
＊
#
注：与假手术组比较，P＜0.05；与模型组比较，P＜0.05；与四君 [18]
Δ
子汤低剂量组比较，P＜0.05 ROCK1 的 C 端半胱氨酸结构域而使其活化 。活化的
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Note：vs. sham operation group， P＜0.05；vs. model group，P＜ ROCK1能够增强PTEN磷酸化，而活化的PTEN又可抑
＊
0.05；vs. Sijunzi decoction low-dose group，P＜0.05 制 PI3K/Akt 的活性，从而促进蛋白降解，引起肌肉萎
Δ
中国药房 2020年第31卷第19期 China Pharmacy 2020 Vol. 31 No. 19 ·2363 ·