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ABSTRACT OBJECTIVE：To study the effects of stilbene glucoside（TSG）on the proliferation and estrogen receptor（ER）of
human breast cancer T-47D cells，and to explore its estrogen-like effect and potential mechanism. METHODS：Taking ER positive
human breast cancer T-47D cells as subjects，using β-estradiol（β-E2，1×10 －8 mol/L）as positive control，CCK-8 assay was used to
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detect the cell proliferation after treated with different concentrations of TSG（1×10 ，1×10 ，1×10 ，1×10 ，1×10 －4 mol/L）for
24，48，72 h；the cell proliferation rate was calculated. Western blotting assay and RT-PCR methods were adopted to detect the
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protein and mRNA expression of ER-α and ER-β in cells after treated with low，medium and high concentrations of TSG（1×10 ，
1 × 10 － 6 ，1 × 10 － 4 mol/L）for 48 h. RESULTS：After treated with different concentrations of TSG for 24，48，72 h，the cell
proliferation rate of each administration group at each time point（except for β-E2 group at 48 h）increased significantly，compared
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with blank group；those of TSG groups（1×10 ，1×10 ，1×10 －7 mol/L）were significantly higher than β-E2 group（P＜0.05 or
P＜0.01）. After treated with low，medium and high concentrations of TSG for 48 h，protein and mRNA expression of ER-α and
ER-β in cells were increased significantly，compared with blank group（P＜0.05 or P＜0.01）；protein expression of ER-β in TSG
low concentration group，mRNA expression of ER-α in TSG groups as well as mRNA expression of ER-β in TSG low and high
concentration groups were significantly higher than β-E2 group（P＜0.05 or P＜0.01）. CONCLUSIONS：TSG can induce the in
vitro proliferation of T-47D cells and exert estrogen-like effects by promoting protein and mRNA expression of ER-α and ER-β，
which is stronger than that of β-E2 at a certain concentration.
KEYWORDS Stilbene glucoside；Phytoestrogen；Human breast cancer T-47D cells；Cell proliferation；Estrogen receptor

二苯乙烯苷化学名为2，3，5，4′-四羟基二苯乙烯葡 J17O8Z45941，纯度：99.9％）；β-雌二醇对照品（β-E2，阳
萄 糖 苷（2，3，5，4′-tetrahydroxystilbene-2-Ο-β-D-gluco- 性对照，北京索莱宝科技有限公司，批号：521C022，纯
side，以下简称“TSG”），易溶于水，是中药制首乌的主要 度：≥98.0％）；DMEM 高糖培养液、无酚红 DMEM 高糖
活性成分，且其含量是制首乌质量控制的专属性指 培 养 液 、胰 蛋 白 酶（美 国 Gibco 公 司 ，批 号 分 别 为
标 。制首乌为蓼科植物何首乌 Polygonum multiflorum 8118240、2003881、1967534）；胎牛血清（FBS）、活性炭-
[1]
Thunb.干燥块根的炮制加工品，具有补肝肾、益精血、壮 葡聚糖苷处理的胎牛血清（CDT-FBS，以色列 Biological
筋骨、乌须发之效 。现代药理研究表明，制首乌及其活 Industries 公司，批号分别为 1829596、1742900）；兔源β-
[1]
性成分 TSG 具有抗衰老、防治骨质疏松、改善血管性痴 肌动蛋白（β-actin）、ER-α抗体（美国CST公司，批号分别
呆等作用 [2-3] 。本课题组前期发现，制首乌具有植物雌激 为 4、6）；兔 源 ER-β 抗 体（美 国 Abcam 公 司 ，批 号 ：
素样作用，其水煎剂可调节去卵巢大鼠的生殖轴，亦能 GR3211677-6）；辣根过氧化物酶标记的山羊抗兔免疫球
抑制雷公藤多苷对大鼠生殖功能的破环，且制首乌含药 蛋白G（H+L）二抗（美国Jackson Immuno Research公司，
血清可促进人乳腺癌T-47D细胞的增殖 [4-6] ；且前期体内 批号：139799）；青-链霉素双抗、CCK-8 试剂盒、细胞裂
实验还发现，TSG 能增加性未成熟小鼠的子宫系数，调 解液、十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-
节性激素水平，增强子宫雌激素受体（ER-α、ER-β）的表 PAGE）凝胶配制试剂盒、BCA 蛋白浓度测定试剂盒、
[7]
达，亦提示TSG具有雌激素样活性 。基于此，本课题组 ECL 化学发光试剂盒、快速封闭液（上海碧云天生物技
拟研究TSG对雌激素受体阳性[ER（+）]人乳腺癌T-47D 术有限公司，批号分别为091818180923、013018181008、
细胞增殖及其 ER 表达的影响，以进一步探讨 TSG 的雌 082018180910、081518180916、103018181030、0710181-
激素样作用及分子机制，为制首乌植物雌激素样作用的 80906、110818181108）；TRNzol Universal 总 RNA 提取
物质基础研究和临床应用提供实验依据，为雌激素依赖 试剂、FastKing一步法逆转录聚合酶链式反应（RT-PCR）
性肿瘤（如乳腺癌、子宫内膜癌）患者的治疗提供参考。 试剂盒[天根生化科技（北京）有限公司，批号分别为
1 材料 R6917、Q6214]；PCR 引物（序列及扩增片段长度见表 1）
1.1 仪器 由生工生物工程（上海）股份有限公司设计、合成；二甲
Eclipse TS100 型倒置显微镜（日本 Nikon 公司）； 基亚砜（DMSO）等试剂均为分析纯，水为双蒸水。
Synergy 2 型荧光/吸收光酶标仪（美国 BioTek 公司）； 表1 PCR引物序列及扩增片段长度
BB15型CO2培养箱（美国Thermo Fisher Scientific公司）； Tab 1 PCR primer sequence and amplified segment
Mini-PROTEAN Tetra 型电泳槽、ChemicDoc Touch 型超 length
高灵敏化学发光成像系统、C1000 Touch Thermal Cycler 基因 引物序列 扩增片段长度，bp
型聚合酶链反应（PCR）仪（美国 Bio-Rad 公司）；Nano- ER-α 上游：5′-GACATGAGAGCTGCCAACCT-3′ 421
Photometer型超微量分光光度计（德国Implen公司）；Mi- 下游：5′-AGATCTCCACCATGCCCTCT-3′
ER-β 上游：5′-AGCTGGGCCAAGAAGATTCC-3′ 501
crofuge 20R型高速冷冻离心机（美国Beckman 公司）。
下游：5′-GAGCAGATGTTCCATGCCCT-3′
1.2 药品与试剂 β-actin 上游：5′-GTGCTATCCCTGTACGCCTC-3′ 530
TSG 对照品（上海源叶生物科技有限公司，批号： 下游：5′-TTCTGCATCCTGTCGGCAAT-3′

·2316 · China Pharmacy 2020 Vol. 31 No. 19 中国药房 2020年第31卷第19期