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bone metabolism markers，BMD，BV/TV，Tb.N，Tb.Th，Conn.D，mRNA and protein expression of OPG were increased
        significantly in administration groups；Tb.Sp，SMI，mRNA and protein expression of RANKL were decreased significantly，in a
        dose-dependent manner among curcumin groups（P＜0.05 or P＜0.01）. CONCLUSIONS：Curcumin can improve the level of bone
        metabolism，increase BMD，improve the trabecular microstructure and inhibit bone absorption in ovariectomized osteoporosis
        model rats. Its mechanism may be related to the regulation of OPG/RANKL signaling pathway.
        KEYWORDS     Osteoporosis；Curcumin；Bone metabolism balance；OPG/RANKL signaling pathway；Rats


            骨质疏松症（Osteoporosis，OP）是临床常见疾病，该                 号：E201906）、Ⅰ型前胶原氨基端前肽（PINP）ELISA 检
        病的发生多与骨质退变、骨量减少以及骨微结构改变有                            测试剂盒（批号：E201905）、骨钙素（OC）ELISA 检测试
        关，可降低骨载荷承受力、增加骨脆性，从而引起患者慢                           剂盒（批号：E201901）均购自北京方程生物科技有限公
        性疼痛并且增加骨折风险 。因此，临床评价多从患者                            司；PCR 扩增引物由上海英骏生物技术有限公司设计、
                               [1]
        骨量、骨代谢标志物等指标入手。有研究发现，OP的发                           合 成（引 物 序 列 见 表 1）；RNA 抽 提 试 剂 盒（批 号 ：
        生是免疫系统、神经系统、内分泌系统等多系统共同作                            DP419）、BCA 蛋白测定试剂盒（批号：PICPI23222）、
        用的结果 。近年来有学者指出，骨保护素（OPG）/核因                         SYBR Green PCR 试剂盒（含 SYBR Pri mix 等试剂，批
                 [2]
        子κB受体活化因子配体（RANKL）信号通路对破骨细胞                         号：K0223）均购自美国Thermo Fisher Scientific公司；逆
                                          [3]
        形成、分化和吸收具有重要的调节作用 。姜黄素可从                            转录试剂盒（美国Fermentas公司，批号：K1622）；上样缓
        姜科、天南星科等植物的根茎中分离得到的一种天然活                            冲液（中国医药集团有限公司，批号：K0223）；0.9％氯化
        性成分，具有改善骨微结构、促进成骨细胞生成的作                             钠溶液（国药集团化学试剂有限公司，批号：20190001；
        用 [4-5] 。基于此，本研究通过切除雌性大鼠双侧卵巢的方                      作生理盐水用）；其余试剂均为分析纯或实验室常用规
        法建立去势OP动物模型，并给予姜黄素进行干预，观察                           格，水为去离子水。
        该化合物对大鼠 OPG/RANKL 信号通路以及骨代谢平                                       表1   PCR引物序列
        衡的影响，旨在为姜黄素临床治疗OP提供实验依据。                                       Tab 1  PCR primer sequence
        1 材料                                                基因            引物序列                   扩增片段长度，bps
        1.1  仪器                                             OPG    上游：5′-CACAGAGCAGCTCCGCATCTTG-3′   183
                                                                   下游：5′-AAGTGCTTGAGTGCGTACATCAGG-3′
            Benchmark Plus 型酶标仪（美国 Bio-Rad 公司）；In-
                                                            RANKL  上游：5′-ATATCGTTGGATCACAGCACATCAGAG-3′  126
        veon 型实验动物微型计算机断层扫描（CT）影像系统                                下游：5′-TGTCGGTGGCATTAATAGTGAGATGAG-3′
        （德国 Siemens 公司）；DXA 型骨密度（BMD）仪（徐州品                  GAPDH  上游：5′-AGTTCAACGGCACAGTCAAGG-3′    121
                                                                   下游：5′-ACATACTCAGCACCAGCATCAC-3′
        源医疗科技有限公司）；Tannon-5200 型成像系统（上海
        天能科技有限公司）；ABI 7300 型荧光定量聚合酶链式                       1.3  动物
        反应（PCR）仪（美国ABI公司）；TG-16M型离心机（上海                         SPF 级 Wistar 大鼠 90 只，雌性，23 周龄，体质量
        卢湘仪离心机仪器有限公司）。                                     （180±20）g，由华中科技大学实验动物中心提供，动物
        1.2  药品与试剂                                          生产合格证号：SCXK（鄂）2016-0009。所有大鼠均适应
            姜黄素对照品（国药集团化学试剂有限公司，批号：                         性喂养1周后开始实验。本研究试验过程及操作均遵守
        F20160703，纯度：99.8％）；戊酸雌二醇片（阳性对照，德                   国家健康与医学研究委员会（NHNRC）的动物道德准
        国Bayer公司，批号：JYHB1901034，规格：1 mg）；山羊抗                则，并经华中科技大学动物实验伦理委员会审核批准。
        兔 OPG 抗体（批号：bs-0431R-1）、大鼠源 RANKL 抗体                2 方法
        （批号：bs-0747R-1）、大鼠源 GAPDH 抗体（批号：bs-                 2.1 分组与造模
        00542R-1）均购自博奥森（北京）生物技术有限公司；小                           将 Wistar 大鼠随机分为空白组（A 组）、模型组（B
        鼠抗人β-actin 单克隆抗体（美国 Abcam 公司，批号：                    组）、雌二醇组（C 组）和姜黄素低、中、高剂量组（D～F
        Ab179696）；辣根过氧化物酶标记的山羊抗兔免疫球蛋                        组），每组15只。除A组不作任何处理外，其余各组大鼠
        白G二抗（上海长岛生物技术有限公司，批号：D-3004）；                       均参照文献去卵巢法         [6-7] 建立 OP 模型：腹腔注射戊巴比
        ECL 显色试剂盒（批号：R1600）、RIPA 组织/细胞快速裂                   妥钠（30 mg/kg）进行麻醉后，以俯卧位固定，于大鼠背部
        解液（批号：BYL40836）均购自基尔顿生物科技（上海）                       脊柱两侧切口，在无菌条件下摘除其双侧卵巢，以BMD
                                                                                                         [8]
        有限公司；骨特异性碱性磷酸酶（BALP）酶联免疫吸附                          明显降低、骨小梁微结构受损严重判定模型复制成功 。
        试验（ELISA）检测试剂盒（批号：E201902）、核心结合因                    2.2 给药
        子α1（CBF-α1）ELISA 检测试剂盒（批号：E201906）、Ⅰ                    手术3个月后，A、B组大鼠均灌胃等体积生理盐水，
        型胶原交联羧基末端肽（CTX-Ⅰ）ELISA检测试剂盒（批                       C组大鼠灌胃戊酸雌二醇[50 μg/（kg·d），以水为溶剂；剂


        ·2120 ·  China Pharmacy 2020 Vol. 31 No. 17                                 中国药房    2020年第31卷第17期
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