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质多、异染色质少；细胞质基质少，有较多线粒体，且线 Per2 mRNA 表达水平显著升高（P＜0.01）；异虎耳草素
粒体多肿胀、嵴断裂、固缩，游离核糖体、粗面内质网、高 高剂量组大鼠松果体中 Clock、Bmal1、Per1、Cry1、Cry2
尔基体、溶酶体较多，有较少脂滴。阳性对照组大鼠松 mRNA表达水平显著升高（P＜0.05或P＜0.01）；异虎耳
果体的线粒体肿胀、嵴断裂、固缩情况略减轻。与模型 草素中剂量组大鼠松果体中 Clock、Bmal1、Per1、Cry1、
对照组比较，异虎耳草素高、中剂量组大鼠松果体的线 Cry2 mRNA 表达水平显著升高（P＜0.05 或 P＜0.01），
粒体肿胀情况明显减轻，嵴断裂、固缩情况明显减少；异 Per3 mRNA 表达水平显著降低（P＜0.05）；异虎耳草素
虎耳草素低剂量组松果体的线粒体肿胀略减轻，嵴断 低剂量组大鼠松果体中Clock、Bmal1、Per2、Cry2 mRNA
裂、固缩略减少。各组大鼠松果体细胞超微结构显微图 表达水平显著升高（P＜0.05），Per3 mRNA 表达水平显
见图2。 著降低（P＜0.05）。各组大鼠松果体中生物钟基因
mRNA表达水平测定结果见表4。
4 讨论
松果体为实质性器官，主要由松果体细胞和神经胶
质细胞构成，也称为明细胞和暗细胞，其中明细胞占
[12]
90％以上 。松果体是机体生物钟节律的重要组成部
分，主要合成、分泌褪黑素，但褪黑素合成后并不储存于
A.空白对照组 B.模型对照组
松果体细胞中，而是被迅速分泌到周围血液中，因此血
液中褪黑素水平可以准确反映松果体合成、分泌褪黑素
的能力 。
[13]
目前，国内外针对松果体病理损伤的研究均较少。
PCPA 多用于制备失眠模型，其是通过抑制色氨酸氢化
酶合成来减少5-羟色胺生成，从而导致睡眠-觉醒周期紊
C.阳性对照组 D.异虎耳草素高剂量组
[14]
乱 。本课题组在前期采用PCPA腹腔注射致失眠模型
研究中发现，PCPA 对松果体组织病理及超微结构有损
伤，且会降低血清中褪黑素水平，从而引起昼夜节律失
调，但其损伤机制尚不清楚。外源性适量补充褪黑素可
[15]
促进褪黑素分泌，改善机体的失眠 。因此，本研究选
择褪黑素为阳性对照药。检测结果显示，褪黑素可缩短
E.异虎耳草素中剂量组 F.异虎耳草素低剂量组
PCPA 致松果体损伤模型大鼠的入睡潜伏期、延长其睡
图2 各组大鼠松果体细胞超微结构透射电镜图（×30 000）
Fig 2 Projection electron micrographs of ultrastructure 眠持续时间、提高其血清褪黑素水平，但褪黑素对松果
of pineal gland of rats in each group（×30 000） 体结构损伤改善不明显；异虎耳草素可显著缩短大鼠的
入睡潜伏期、延长其睡眠持续时间，有效改善其受损松
3.6 大鼠松果体生物钟基因表达测定结果
果体细胞排列紊乱、数目减少、空泡变性及线粒体肿胀、
与空白对照组比较，模型对照组大鼠松果体中 嵴断裂、固缩等情况。
Bmal1、Per1 mRNA 表达水平显著降低（P＜0.05），Per3 在哺乳动物中，昼夜节律钟机制由细胞自主转录-
mRNA 表达水平显著升高（P＜0.05）。与模型对照组比 翻译反馈回路组成，在细胞质中mClock和mBmal1的产
较，阳性对照组大鼠松果体中 Clock、Per1、Per3、Cry1、 物蛋白形成异二聚体，作用于 mPer 和 mCry 启动子的
Cry2 mRNA 表达水平显著降低（P＜0.05 或 P＜0.01）， E-box 区，启动 mPer 和 mCry 的转录过程，为正反馈环
表4 各组大鼠松果体生物钟基因mRNA表达水平测定结果（x±±s，n＝5）
Tab 4 mRNA expression levels of biologic block gene in pineal gland of rats in each group（x±±s，n＝5）
组别 剂量，mg/kg Clock Bmal1 Per1 Per2 Per3 Cry1 Cry2
空白对照组 1.12±0.09 1.84±0.09 1.54±0.04 0.77±0.01 0.49±0.02 0.96±0.06 0.94±0.13
模型对照组 1.00±0.01 1.00±0.04 ＊ 1.00±0.02 ＊ 1.00±0.02 1.00±0.03 ＊ 1.00±0.10 1.00±0.03
阳性对照组 10 0.23±0.00 ## 0.84±0.02 0.27±0.01 ## 4.70±0.06 ## 0.13±0.01 ## 0.27±0.02 # 0.39±0.02 ##
异虎耳草素高剂量组 3 1.95±0.02 ## 3.30±0.05 ## 1.53±0.04 # 0.83±0.01 0.95±0.09 2.09±0.02 # 1.57±0.01 #
异虎耳草素中剂量组 1.5 1.87±0.00 ## 2.93±0.04 ## 1.78±0.06 # 1.22±0.04 0.55±0.01 # 1.82±0.03 # 1.43±0.02 #
异虎耳草素低剂量组 0.75 1.34±0.03 # 2.21±0.11 # 0.74±0.09 1.84±0.03 # 0.51±0.01 # 1.29±0.07 1.27±0.02 #
注：与空白对照组比较，P＜0.05；与模型对照组比较，P＜0.05，P＜0.01
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Note：vs. blank control group，P＜0.05；vs. model control group，P＜0.05，P＜0.01
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中国药房 2020年第31卷第17期 China Pharmacy 2020 Vol. 31 No. 17 ·2085 ·