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自动化设备有限公司）；TG16-WS型高速台式离心机（湖                       13.5 mg/mL 的溶液（以干地黄原药材量计，相当于含鲜
        南湘仪实验室仪器开发有限公司）；BSA224S-CW 型电                      地黄药材70 mg/mL）。
        子天平[赛多利斯科学仪器（北京）有限公司]。                             2.1.3  熟地黄样品溶液的制备            按照前期研究优选的
        1.2 药品与试剂                                          熟地黄特色炮制方法 制备熟地黄样品（简称“熟地
                                                                               [6]
            鲜地黄药材于2018年12月购于河南省焦作市武陟                       黄”）。取蒸晒 5 次达到炮制终点的熟地黄，按“2.1.2”项
        县，经河南中医药大学药学院董诚明教授鉴定为玄参科                           下方法制备成含熟地黄原药材13.5 mg/mL的溶液（相当
        植物地黄（R. glutinosa Libosch.）的块根。D-半乳糖（上             于含鲜地黄药材70 mg/mL）。
        海源叶生物科技有限公司，批号：S11050）；维生素 C 片                     2.1.4  鲜地黄多糖样品溶液的制备               取鲜地黄 300 g，
       （华中药业股份有限公司，批号：20190308，规格：100 mg/                  剪成粒度为2～4 mm的碎末，加30倍量水，在50 ℃下超
        片）；总抗氧化能力（T-AOC）试剂盒（血清试剂盒批号：                       声（功率：500 W，频率：40 kHz）60 min，过滤，浓缩至400
        CK-E31087，脏器试剂盒批号：ml022376）、超氧化物歧                  mL，加无水乙醇调溶液的醇体积分数为 80％，静置 24
        化酶（SOD）试剂盒（血清试剂盒批号：CK-E34817，脏器                    h，过滤，收集滤液；沉淀用无水乙醇洗涤后，用水溶解，
                                                                       [19]
        试剂盒批号：ml059817）、过氧化氢酶（CAT）试剂盒（血                    采用Sevag法 除蛋白，得鲜地黄多糖溶液（多糖得率为
        清 试 剂 盒 批 号 ：CK-E35798，脏 器 试 剂 盒 批 号 ：             7.5％，总多糖含量为3％）。将溶液浓缩至300 mL，用离
        ml037079）；丙二醛（MDA）试剂盒（血清试剂盒批号：                     心管按每管28 mL分管后，置于－80 ℃冰箱中保存。临
        CK-E30239，脏器试剂盒批号：ml022446）均由上海酶联                  用时分批取出，室温融化，每管加水稀释至200 mL，制备
        生物科技有限公司提供；0.9％氯化钠注射液（河南科伦                         成140 mg/mL的溶液（以鲜地黄原药材量计）。
        药业有限公司，批号：C119060201-1，规格：250 mL∶ 2.25             2.1.5  熟地黄多糖样品溶液的制备               取特色炮制终点
        g）；无水乙醇（天津市富宇精细化工有限公司，批号：                          的熟地黄 300 g，按照“2.1.4”项下方法制备熟地黄多糖
        20190115，分析纯）；其余试剂均为分析纯，试验用水为                      样品溶液（多糖得率为23.5％，总多糖含量为14％）。将
        蒸馏水。                                               溶液浓缩至 600 mL，用离心管按每管 27 mL 分管后，置
        1.3  动物                                            于－80 ℃冰箱中保存。临用时每管加水稀释至 500
            健康Wistar大鼠96只，SPF级，雌雄各半，8周龄，雌                  mL，制备成27 mg/mL的溶液（以熟地黄原药材量计）。
        性大鼠体质量为（220±10）g、雄性大鼠为（320±10）g，                   2.1.6  阳性对照溶液的制备           取维生素C片，研磨成细
        购自河南朋悦实验动物繁育有限公司，生产合格证号：                           粉，加水配制成10 mg/mL的溶液，临用时现配。
        SCXK（鲁）2019-0003，使用合格证号：SYXK（豫）2015-               2.2  动物分组与给药
        0005。大鼠在温度（25±2）℃、相对湿度（50±10）％的                        取大鼠96只随机分为8组，即空白组、模型组、阳性
        环境下适应性饲养1周后进行实验，实验操作严格按照                           对照组、鲜地黄组、干地黄组、熟地黄组、鲜地黄多糖组
       《实验动物管理条例》和有关动物研究指导原则的要求                            和熟地黄多糖组，每组12只（雌雄各半）。除空白组注射
        及规则进行。                                             等量生理盐水外，其余各组大鼠均于颈背部皮下注射D-
        2 方法                                               半乳糖[125 mg/（kg·d）]复制亚急性衰老模型 。于造模
                                                                                                 [20]
        2.1  药液的制备                                         同时，空白组和模型组大鼠灌胃水，阳性对照组大鼠灌胃
        2.1.1  鲜地黄样品溶液的制备           取鲜地黄210 g，加210         维生素C水溶液[100 mg/（kg·d），依据临床用量，按人和
        mL 水打汁，8 层纱布过滤，收集汁液；药渣用水洗 2 次、                     大鼠间体表面积折算而得，并通过前期预实验确定剂
        每次 200 mL，收集洗脱液，与汁液合并。将合并液浓缩                       量]，鲜地黄组大鼠灌胃鲜地黄样品溶液[700 mg/（kg·d），
        至600 mL，用离心管按每管30 mL分管后，置于－80 ℃                    根据临床上鲜地黄最大用量30 g计算，并按人和大鼠间
        冰箱中保存。临用前分批取出，室温融化，每 30 mL 浓                       体表面积折算后确定剂量]，干地黄组大鼠灌胃干地黄
        缩液用水稀释至150 mL，制备成70 mg/mL的溶液（以鲜                    样品溶液[135 mg/（kg·d）]，熟地黄组大鼠灌胃熟地黄样
        地黄原药材量计算）。                                         品溶液[135 mg/（kg·d）]，鲜地黄多糖组大鼠灌胃鲜地黄
        2.1.2  干地黄样品溶液的制备            取特色炮制过程中鲜             多糖样品溶液[1 400 mg/（kg·d），以鲜地黄药材计]，熟地
        地黄经第1次蒸晒、炮制程度相当于干地黄的样品（简称                          黄多糖组大鼠灌胃熟地黄多糖样品溶液[270 mg/（kg·d），
        为“干地黄”）135 g（每 5.2 kg 鲜地黄可得到 1 kg 干地               以熟地黄药材计]（干地黄组、熟地黄组、鲜地黄多糖组
        黄），加 8 倍量水（mL/g，下同）浸泡 30 min，再煎煮 30                和熟地黄多糖组的给药剂量均是根据鲜地黄组的用量，
        min，过滤；药渣再加倍 8 倍量水煎煮 20 min，过滤，并合                  按照各样品相对鲜地黄的得率折算后得到）。每天给药
        并滤液。将合并液浓缩至 500 mL，用离心管按每管 30                      1次，连续给药56 d。给药期间，每周测定1次大鼠体质
        mL分管后，置于－80 ℃冰箱中保存。临用前分批取出，                        量，随体质量变化调整其造模及灌胃给药量。因鲜地黄
        室温融化，每 30 mL 浓缩液用水稀释至 600 mL，制备成                   组和鲜地黄多糖组各有1只雄性大鼠死亡，故每组最终


        中国药房    2020年第31卷第17期                                             China Pharmacy 2020 Vol. 31 No. 17  ·2089 ·
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