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2 方法                                                态良好。造模8周后（给药前），模型组和各给药组小鼠
        2.1 分组、造模与给药                                        均可见流涕、频繁挠鼻、喷嚏，鼻腔内有少量黄色分泌
            所有小鼠适应性喂养 1 周后，按随机数字表法分为                        物，脱毛严重；正常组和假手术组小鼠均未见鼻部异常，
        7组，即正常组、假手术组、模型组、化学药对照组和鼻渊                          皮毛光滑。经药物干预 14 d 后，鼻渊舒低、高剂量组小
        舒低、中、高剂量组，每组20只。除正常组外，其余各组                          鼠偶尔有喷嚏；鼻渊舒中剂量组和化学药对照组小鼠无
                           [10]
        小鼠均参考文献方法 开放上颌窦：腹腔注射10％水合                           喷嚏、挠鼻，鼻腔未见明显分泌物，脱毛处有新生毛发；
        氯醛溶液麻醉并消毒后，于小鼠鼻背正中处作长约 3                            模型组小鼠上述症状均未见改善。在实验期间，模型组
        mm的横行切口，钝性分离皮下组织，暴露鼻背上颌窦腔                           和鼻渊舒低、高剂量组各 2 只，鼻渊舒中剂量组 1 只，假
        骨质，在左右两侧用打磨机各打磨1个直径约1 mm的小                          手术组、化学药对照组各3只（共计13只小鼠）因手术损
        孔。模型组和各给药组于此窦腔植入含肺炎链球菌菌                             伤或肺部感染死亡。
                                        3
        液的医用膨胀海绵（将大小约 1 mm 的海绵置于 6×10                  8    3.2 小鼠鼻窦黏膜病理学变化
        CFU/mL菌液中浸泡至饱和，菌液由含10％绵羊血清的                             正常组和假手术组小鼠鼻窦黏膜上皮及纤毛完整，
        Luria Broth液体培养基配制）后，常规缝合；假手术组不                     黏膜下层偶见少量淋巴和杯状细胞。模型组小鼠鼻窦
        填充带菌海绵；正常组小鼠不作任何处理。                                 黏膜严重缺损、纤毛脱落，黏膜下层腺体增生，可见淋巴
            自造模后第8周开始，正常组、假手术组和模型组小                         细胞浸润，提示CRS模型复制成功。鼻渊舒低剂量组小
        鼠均灌胃生理盐水0.2 mL，化学药对照组小鼠灌胃克拉                         鼠鼻窦黏膜病理表现与模型组相似；鼻渊舒高剂量组和
        霉素 103 mg/kg（以生理盐水为溶剂，剂量设置参考已有                      化学药对照组小鼠部分鼻窦黏膜有坏死脱落，部分黏膜
            [11]
        文献 并进行换算 而得），鼻渊舒低、中、高剂量组小鼠                          下层存在淋巴细胞等炎症细胞浸润和腺体增生，但较模
                        [12]
        均灌胃鼻渊舒口服液3.1、6.2、12.4 mL/kg（剂量设置参考
                                                            型组减轻；鼻渊舒中剂量组小鼠鼻窦黏膜与正常组相
                [3]
                            [12]
        已有文献 并进行换算 而得），每日1次，连续14 d。                         似，黏膜及纤毛较完整，黏膜下层淋巴细胞少见，详见
        2.2  小鼠鼻部症状和一般情况观察
                                                            图1。
            每日观察各组小鼠喷嚏、挠鼻、鼻腔分泌物等鼻部
                                                            3.3  小鼠鼻窦黏膜中 IFN-γ、B7-H1、PD-1 mRNA 表达
        症状和皮毛、活跃状态等一般情况。                                    变化
        2.3  小鼠鼻窦黏膜病理学观察
                                                                与正常组比较，假手术组小鼠鼻窦黏膜中 IFN-γ、
            末次给药后，将各组小鼠麻醉、处死，取鼻窦黏膜组
                                                            B7-H1、PD-1 mRNA的相对表达量差异均无统计学意义
        织适量，于10％中性甲醛溶液中固定24 h后，常规脱水、
                                                           （P＞0.05）；模型组小鼠上述因子 mRNA 的相对表达量
        透明、包埋、切片（厚度约5 μm），行HE染色，置于病理显
                                                            均显著升高（P＜0.01）。与模型组比较，化学药对照组
        微图像分析系统下观察鼻窦黏膜上皮细胞排列及淋巴
        细胞等炎症细胞浸润等情况。                                       和鼻渊舒中、高剂量组小鼠鼻窦黏膜中 IFN-γ、B7-H1
        2.4  小鼠鼻窦黏膜中 IFN-γ、B7-H1、PD-1 mRNA 表达               mRNA以及各给药组PD-1 mRNA的相对表达量均显著
                                                            降低；鼻渊舒中、高剂量组IFN-γ、B7-H1、PD-1 mRNA的
        情况检测
            另取“2.3”项下各组小鼠鼻窦黏膜组织适量，用                         相对表达量均显著低于低剂量组，鼻渊舒高剂量组
                                                            IFN-γ mRNA的相对表达量显著高于中剂量组。鼻渊舒
        TRIzol 试剂提取总 RNA，经 1％琼脂糖凝胶电泳鉴定
                                                            低、高剂量组IFN-γ mRNA，低剂量组B7-H1 mRNA和各
        RNA完整性、超微量分光光度计测定RNA浓度后，以总
        RNA为模板反转录为cDNA，再参考实时荧光定量PCR                         剂量组PD-1 mRNA的相对表达量均显著高于化学药对
        试剂盒说明书进行 PCR 扩增。反应体系（共 25 μL）：                      照组（P＜0.05或P＜0.01）；鼻渊舒中剂量组上述指标与
        cDNA 模板 2 μL，TB GreenPremix Ex TaqⅡ 12.5 μL，10      化学药对照组比较差异均无统计学意义（P＞0.05），详
        μmol/L 正/反向引物各 1 μL，灭菌水 8.5 μL。反应条件：                见表2。
        94 ℃预变性 120 s；94 ℃变性 20 s，56 ℃退火 20 s，60 ℃          4 讨论
        延伸30 s，共45个循环。以β-肌动蛋白（β-actin）为内参，                      CRS 是由多种因素导致的鼻腔及鼻窦黏膜慢性持
                                                                                            [1]
        采用 2  － Δ Δ Ct  法以 FTC-3000 v4.0 软件计算各目标基因          续性炎症，患者治疗后的复发率较高 。鼻渊舒口服液
        mRNA的相对表达量。上述试验重复3次。                                由辛荑、薄荷、苍耳子、白芷、黄芪、黄芩、栀子等药材组
        2.5 统计学方法                                           成，具疏风清热、祛湿通窍等功效，且临床研究指出其单
            采用SPSS 22.0软件对数据进行统计分析。计量资                      用或与其他药物联用均对CRS具有较好的疗效，但具体
        料以 x±s 表示，组间比较采用单因素方差分析。P＜                          作用机制尚未阐明        [2-3] 。目前，在西医治疗方面，克拉霉
        0.05为差异有统计学意义。                                      素因其具有与皮质类固醇相似的抑制炎症细胞因子表
        3 结果                                                达的作用，且不会引起免疫抑制，同时还能提高 CRS 患
        3.1  小鼠鼻部症状和一般情况                                    者的内镜和电子计算机断层扫描（CT）评分，现已成为临
            造模前各组小鼠鼻部未见异常，皮毛光滑，精神状                          床治疗 CRS 的推荐用药        [13-14] 。基于此，本研究选用克拉


        ·2078 ·  China Pharmacy 2020 Vol. 31 No. 17                                 中国药房    2020年第31卷第17期
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