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组灌胃等体积0.6％CMC-Na溶液，每日1次，连续4周。 泼。与模型组比较，水飞蓟宾胶囊组和HBOA各剂量组
2.2 标本采集、形态观察与脏器指数检测 大鼠精神状态均有改善。
给药期间，每日观察各组大鼠的一般情况，包括精 3.2 HBOA对NAFLD模型大鼠体质量的影响
神状态、饮食、活动状况等。末次给药当晚禁食10 h、不 与空白对照组比较，模型组大鼠体质量增量显著升
禁水，于次日清晨，称取大鼠体质量，与实验前体质量比 高（P＜0.01）。与模型组比较，各给药组大鼠体质量增
较，计算体质量增量；腹腔注射10％水合氯醛（3 mL/kg） 量均显著降低，且HBOA高剂量组显著低于HBOA低剂
麻醉，于腹主动脉取血后，迅速剖离肝、肾、脾，经冰冷生 量组（P＜0.05 或 P＜0.01）。各组大鼠体质量测定结果
理盐水漂洗除去血迹，吸掉表面液体后，观察形态，称取 见表1。
湿质量，计算相应脏器指数，脏器指数＝脏器湿质量 表1 各组大鼠体质量测定结果（x±±s）
（g）/ 体质量（g）×100％。全血经静置后，以 3 500 r/min Tab 1 Determination results of body weight of rats in
离心 15 min，取上清液；每只大鼠均于左叶相同部位切 each group（x±±s）
取约1 cm×1 cm×1 cm的组织，固定在4％多聚甲醛溶液 体质量，g
组别 n 剂量， 体质量增量，g
中。上述样本均于－80 ℃环境下分装保存。 mg/kg 实验前 实验后
2.3 肝组织中AST、ALT、TC、TG、NEFA含量检测 空白对照组 8 127.62±6.63 440.62±22.27 313.00±22.26
模型组 8 128.38±6.93 552.88±37.51 424.50±38.23 ＊＊
采用 ELISA 检测，按试剂盒说明书方法操作：取各
水飞蓟宾胶囊组 8 26.25 129.25±7.87 442.25±42.87 313.00±42.58 ##
组大鼠肝组织适量，用生理盐水作为匀浆介质，按照1∶9 HBOA高剂量组 8 100.00 128.87±5.77 433.00±28.46 304.12±30.25 ##Δ
（g/mL）的比例制备肝组织匀浆液，于 4 ℃条件下以 HBOA中剂量组 8 50.00 125.25±6.84 468.38±51.58 343.12±52.99 ##
3 000 r/min离心10 min，取上清液，使用酶标仪检测AST、 HBOA低剂量组 8 25.00 128.50±5.56 483.87±64.03 355.38±64.39 ##
＊＊
##
ALT、TC、TG、NEFA含量。 注：与空白对照组比较， P＜0.01；与模型组比较，P＜0.01；与
Δ
2.4 血清中SOD、GSH-Px活性及MDA含量检测 HBOA低剂量组比较，P＜0.05
Note：vs. blank control group， P＜0.01；vs. model group， P＜
＊ ＊
##
采用 ELISA 法检测，按试剂盒说明书方法操作：取
Δ
0.01；vs. HBOA low-dose group，P＜0.05
各组大鼠血清适量，使用酶标仪检测SOD、GSH-Px活性
3.3 HBOA对NAFLD模型大鼠脏器的影响
及MDA含量。 空白对照组大鼠肝脏为红褐色，表面光滑，边缘锐
2.5 肝组织中PPARα蛋白表达检测
利，形态正常；模型组大鼠肝脏为灰黄色，表面触之伴有
利用免疫组织化学法检测，按照抗体及免疫组化试
油腻感，边缘较钝且肿大，有花斑块形成，部分可见少量
剂盒说明书方法操作：取肝组织适量，经石蜡包埋后，切
白色脂肪沉积；各给药组大鼠肝脏色泽逐渐恢复正常，
成厚度为 5 μm 的切片，先将切片置于二甲苯中进行脱
上述肝脂变程度得到明显改善。与空白对照组比较，模
蜡，再依次用 100％、95％、80％、60％乙醇进行水化；然
型组大鼠肝指数显著增加（P＜0.01）。与模型组比较，
后进行抗原修复、内源性过氧化物酶灭活、10％山羊血
各给药组大鼠肝指数均显著降低（P＜0.05或P＜0.01），
清封闭，滴加PPARα一抗（稀释比例1 ∶ 400），4 ℃孵育过 HBOA 各剂量组肝指数组间比较差异均无统计学意义
夜；次日用磷酸盐缓冲液（PBS，pH 7.4～7.6）清洗 3 次，
（P＞0.05）。此外，各组大鼠肾、脾脏色泽、形态均无明
每次 1 min，滴加对应生物素标记的抗兔/鼠辣根过氧化
显变化，肾指数和脾指数组间比较差异均无统计学意义
物酶标记聚合物，37 ℃孵育30 min后，PBS清洗3次，每
（P＞0.05）。各组大鼠脏器指数测定结果见表2。
次1 min；滴加DAB工作液显色，用水清洗后，经苏木精
表2 各组大鼠脏器指数测定结果（x±±s，％％）
复染 2 min，乙醇脱水，置于二甲苯中透明 2 次，每次 10
min，干燥后，用中性树脂封片，置于光学显微镜下拍照 Tab 2 Determination results of organ indexes of rats
in each group（x±±s，％％）
（棕黄色区域表示阳性），每张照片随机拍摄5个视野（×
组别 n 剂量，mg/kg 肝指数 肾指数 脾指数
200），利用 Image Pro plus 6.0 软件进行分析，以组化图
空白对照组 8 2.36±0.07 0.61±0.04 0.18±0.02
中的累积光密度值占总区域的比值表示 PPARα蛋白的 模型组 8 2.92±0.29 ＊＊ 0.53±0.02 0.16±0.02
表达水平。 水飞蓟宾胶囊组 8 26.25 2.37±0.21 ## 0.61±0.03 0.18±0.02
2.6 统计学方法 HBOA高剂量组 8 100.00 2.42±0.21 ## 0.58±0.05 0.19±0.07
HBOA中剂量组 8 50.00 2.56±0.32 ## 0.57±0.06 0.17±0.03
采用SPSS 23.0软件对数据进行统计分析。计量资
HBOA低剂量组 8 25.00 2.60±0.36 # 0.56±0.08 0.16±0.02
料用 x±s 表示，多组间比较采用单因素方差分析，两两
＊＊
#
注：与空白对照组比较， P＜0.01；与模型组比较，P＜0.05，P＜
##
比较采用 LSD 检验（方差齐）或 Dunnett’s T3 检验（方差 0.01
不齐）。P＜0.05为差异有统计学意义。 Note：vs. blank control group， ＊ ＊ P＜0.01；vs. model group，P＜
#
3 结果 0.05，P＜0.01
##
3.1 HBOA对NAFLD模型大鼠一般情况的影响 3.4 HBOA对NAFLD模型大鼠肝组织中AST、ALT含
空白对照组大鼠毛色光泽，食欲旺盛，精神状态良 量的影响
好。模型组大鼠毛色乏黄且暗淡，精神萎靡，懒动，不活 与空白对照组比较，模型组大鼠肝组织中 AST、
中国药房 2020年第31卷第16期 China Pharmacy 2020 Vol. 31 No. 16 ·1957 ·