Page 35 - 202016

吡格列酮对高糖诱导的大鼠肾小管上皮细胞-间充质细胞转分化

的影响及机制研究 Δ

1，2
1，2
1，2
1，2 #
孙 兰 1，2＊ ，张 帆 ，石明隽 ，田平平 ，郭 兵 （1.贵州医科大学基础医学院病理生理学教研室，贵阳
550025；2.贵州省常见慢性疾病发病机制及药物研究重点实验室，贵阳 550025）
中图分类号 R965.1 文献标志码 A 文章编号 1001-0408（2020）16-1949-06
DOI 10.6039/j.issn.1001-0408.2020.16.06
摘 要 目的：探讨吡格列酮（PIO）对高糖诱导的大鼠肾小管上皮细胞-间充质细胞转分化（EMT）的影响及可能机制，为防治糖尿
病肾病提供理论依据及新靶点。方法：将大鼠肾小管细胞NRK-52E随机分为对照组（5.5 mmol/L葡萄糖）、高糖组（30 mmol/L葡
萄糖）、PIO干预组（30 mmol/L葡萄糖+5.0 μmol/L PIO）、GW9662干预组（30 mmol/L葡萄糖+5.0 μmol/L PIO+5.0 μmol/L特异性拮
抗剂GW9662）。前3组细胞分别在培养6、12、24、48 h时进行动态检测，GW9662干预组细胞在培养48 h时进行检测。采用Real-
time PCR 法检测细胞中第 10 号染色体缺失的磷酸酶和张力蛋白同源基因（PTEN）、过氧化物酶体增殖物激活受体γ（PPARγ）
mRNA的表达水平；采用Western blotting法检测细胞中PTEN、PPARγ、α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、上皮钙黏素（E-cadherin）的表
达以及磷脂酰肌醇-3-激酶（PI3K）/蛋白激酶B（AKT）信号通路的变化。结果：随培养时间的延长，与正常组比较，高糖组细胞中
PPARγ、PTEN mRNA及蛋白（除PPARγ 6 h外）表达水平均显著降低，α-SMA、p-AKT （Thr308） 蛋白表达水平均显著升高，E-cadherin蛋
白表达水平显著降低（P＜0.05），且呈时间依赖趋势；与高糖组比较，PIO 组细胞中 PPARγ（除 6 h 时的蛋白表达外）、PTEN 的
mRNA及蛋白表达水平均显著升高，α-SMA、p-AKT （Thr308）
（除6 h外）蛋白表达水平均显著降低，E-cadherin蛋白表达水平显著增高
（P＜0.05），且呈时间依赖趋势。与高糖组比较，GW9662干预组细胞PTEN、PPARγ mRNA及蛋白表达水平，α-SMA、E-cadherin、
p-AKT （Thr308） 蛋白表达水平的差异均无统计学意义，PIO的作用效应被PPARγ拮抗剂GW9662阻断。结论：在高糖条件下PIO可能
是通过激活PPARγ而实现对PTEN表达的调控，使PI3K/AKT信号通路受到抑制，进而抑制肾小管上皮细胞EMT的发生。
关键词 吡格列酮；肾小管上皮细胞；过氧化物酶体增殖物激活受体γ；第10号染色体缺失的磷酸酶和张力蛋白同源基因；磷脂酰
肌醇-3-激酶/蛋白激酶B信号通路；上皮细胞-间充质细胞转分化；大鼠

Effects and Mechanism Study of Pioglitazone on High Glucose-induced Epithelial-mesenchymal Transition
in Renal Tubular Epithelial Cells of Rat
1，2
1，2
1，2
SUN Lan ，ZHANG Fan ，SHI Mingjun ，TIAN Pingping ，GUO Bing （1. Dept. of Pathophysiology，
1，2
1，2
College of Basic Medicine，Guizhou Medical University，Guiyang 550025，China；2. Guizhou Provincial Key
Laboratory of Pathogenesis & Drug Research on Common Chronic Diseases，Guiyang 550025，China）
ABSTRACT OBJECTIVE：To investigate the effects of pioglitazone（PIO）on high glucose-induced epithelial-mesenchymal
transition（EMT）in renal tubular epithelial cells of rat and its possible mechanism，and to provide theoretic reference and new
target for the prevention and treatment of diabetic nephropathy. METHODS：The rat renal tubular epithelial NRK-52E cells were
randomly divided into control group（5.5 mmol/L glucose），high-glucose group（30 mmol/L glucose），PIO intervention group（30
mmol/L glucose+5.0 μmol/L PIO），GW9662 intervention group（30 mmol/L glucose+5.0 μmol/L PIO+5.0 μmol/L specific anta-
gonist GW9662）. The cells of the first 3 groups were detected at 6，12，24，48 h of culture，while those in GW9662 intervention
group were detected at 48 h of culture. mRNA expression of PTEN and PPAR γ were detected by real-time PCR. The protein
expression of PTEN，PPARγ，α-SMA and E-cadherin as well as the changes of PI3K/AKT signaling pathway were determined by
Western blotting assay. RESULTS：With the extension of culture time，compared with control group，the mRNA and protein
expression of PPAR γ （except for protein expression at 6 h） and PTEN in high-glucose group reduced significantly，while the
protein expression of α-SMA and p-AKT （Thr308） increased significantly，and the protein expression of E-cadherin reduced significantly
（P＜0.05）， showing time-dependent trend. Compared with
Δ 基金项目：国家自然科学基金资助项目（No.81760131）；贵州省
high-glucose group， the mRNA and the protein expression
教育厅青年科技人才成长项目（No.黔教合 KY 字〔2018〕191）；贵州省
（except for 6 h） of PPAR γ and PTEN were increased
中 医 药 管 理 局 中 医 药 、民 族 医 药 科 学 技 术 研 究 课 题（No.QZYY-
significantly in PIO intervention group， while the protein
2016-077）
＊讲师，硕士。研究方向：糖尿病肾病肾脏纤维化。电话： expression of α-SMA and p-AKT （Thr308） were decreased
0851-88416067。E-mail：2277359086@qq.com significantly，and the protein expression of E-cadherin was
# 通信作者：教授，博士生导师，硕士。研究方向：糖尿病肾病相 increased significantly （P＜0.05）， showing time-dependent
关发病机制。电话：0851-88416067。E-mail：guobingbs@126.com trend. There was no statistical significance in mRNA and

中国药房 2020年第31卷第16期 China Pharmacy 2020 Vol. 31 No. 16 ·1949 ·