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（250 mm×4.6 mm，5 µm）；流动相：乙腈（A）-0.1％甲酸 5×10 4 10
水溶液（B），梯度洗脱：0.0～11.0 min，1.0％A→3.5％A； 4×10 4
11.0～37.3 min，3.5％A→8.0％A；37.3～90.0 min，8.0％ 3×10 4
A→22.0％ A；90.0～104.0 min，22.0％ A→28.0％ A；流 intensity 2×10 4
速：0.5 mL/min；柱温：28 ℃；检测波长：214 nm；进样量： 7
1×10 4 11
8 µL。 15
3 6 13 16
0 24
2.2.2 质谱条件 采用电喷雾离子源（ESI）以正、负离 0 20 40 60 80 100
子两种模式分别进行检测；扫描范围：m/z 50～1 200，以 t，min
A.正离子
甲酸钠进行质量实时矫正；喷雾气体和干燥气体均为高 5×10 4
纯度氮气；碰撞气体：氩气；离子喷雾电压：4 500 V；检测 4×10 4
电压：2 000 V；脱溶剂气温度：180 ℃；锥孔气流量：8.0 3×10 4
mL/min；离子源温度：200 ℃。 intensity 2×10 4
2.2.3 UHPLC指纹图谱生成和共有峰指认 按本课题
1×10 4
组前期已建立的指纹图谱研究方法，按“2.2.1”项下色谱
22
0
条件对 10 批 CⅡ-3 样品的指纹图谱进行分析。相关方 0 20 40 60 80 100
[8]
法学考察内容见已发表文献 。10 批 CⅡ-3 样品的 t，min
B.负离子
UHPLC 指纹图谱和对照指纹图谱见图 1，CⅡ-3 样品在
图2 CⅡⅡ-3样品在正、负离子模式下的基峰离子流图
正、负离子模式下的基峰离子流图见图 2。根据标准品
Fig 2 BPC diagrams of CⅡⅡ-3 samples under positive
和相关文献 [9-15] 定性鉴定出10个化合物，结果见表2。从 and negative ion mode
图1和表2可知，CⅡ-3的指纹图谱中有25个共有峰，其
2.3 CⅡⅡ-3样品谱效关系的建立
中峰7、10、11、15分别为腺嘌呤、苯丙氨酸、肌苷、环（甘
2.3.1 GRA 以UHPLC指纹图谱的共有峰峰面积为比
氨酸-苯丙氨酸），由于其峰面积相对较大，推测均为
较序列，以CⅡ-3样品对HepG2细胞的IC50为参考序列，
CⅡ-3样品的主要成分。
采用均值化法对上述序列数据进行无量纲化处理；数据
1 200
2 经处理后，比较序列记为{Xi （m）}，参考序列记为{X0
1 000 7 10 11 15 （m）}，计算关联度（r）。r 值越大，表明该色谱峰对药理
1 3 4 5 8 20 21
6 9 1213 14
24
800 16 17 18 19 22 23 25 [16]
S10 活性影响越大 。CⅡ-3的25个共有峰中，以r值排序，
S9（R）
600 峰20、23、24、15对CⅡ-3样品的抗肝癌活性贡献较大，r
mV S8
S7
U， 400 S6 均大于 0.7；峰 21、17、3、7、10、1、11、16、13、19、25、8、9、
S5
200 S4 22的贡献次之，r大于0.6且小于0.7；峰5、14、2、4、12、6、
S3
0 S2 18的贡献较小，r均小于0.6，详见表3。
S1
2.3.2 OPLS 分析 以 UHPLC 指纹图谱的共有峰峰面
0 9 18 27 36 45 54 63 72 81 90
t，min 积为自变量，以 CⅡ-3 样品对 HepG2 细胞的 IC50为因变
A. UHPLC指纹图谱
量，将峰面积做归一化处理后导入Simca 13.0软件中，计
1 200
算 25 个共有峰与 IC50 （药效）的标准化回归系数和变量
1 000
重要性投影（VIP），结果见图3。
800
mV 600 由图 3B 可知，以 VIP 值排序，峰 23、18、15、24、7、
U， 14、6、2、20的VIP值均大于1，说明这些峰对CⅡ-3样品
400
的抗肝癌活性有重要影响。结合图 3A 可知，在 VIP 大
200
于 1 的色谱峰中，峰 23、15、24、7、20 的标准化回归系数
0
大于 0，其与 CⅡ-3 样品的抗肝癌活性成正相关，峰 18、
0 9 18 27 36 45 54 63 72 81 90 14、6、2的标准化回归系数小于0，两者成负相关。
t，min
B.对照指纹图谱 2.3.3 GRA 和 OPLS 的联合分析 将 r＞0.7 和 VIP＞1
图 1 10 批 CⅡⅡ-3 样品的 UHPLC 指纹图谱和对照指纹 的峰整合，发现CⅡ-3样品抗肝癌活性的主要成分依次
图谱 为峰 20（未知化合物）＞23（未知化合物）＞24[环（酪氨
Fig 1 UHPLC fingerprints of 10 batches of C ⅡⅡ -3 酸-脯氨酸）]＞15[环（甘氨酸-苯丙氨酸）]，且均与药理活
samples and control fingerprint 性成正相关。

·1946 · China Pharmacy 2020 Vol. 31 No. 16 中国药房 2020年第31卷第16期