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KEYWORDS Periplaneta american； Anti-hepatoma effect； Grey relational analysis； Orthogonal partial least squares；
Spectrum-effect relationship；UHPLC-Q-TOF/MS

美洲大蠊（Periplaneta americana L.）为蜚蠊科大蠊 1.3 细胞
属昆虫，俗称蟑螂。其药用历史悠久，始载于《神农本草 人肝癌 HepG2 细胞株由齐氏生物科技有限公司
[1]
经》，主治“小儿疽积、症瘕积聚和疮痈肿毒”。近年来， 提供。
美洲大蠊的药用价值得到学者的广泛认同，大量研究表 2 方法与结果
明其具有明显的促进组织修复再生、抗氧化、抗肿瘤、抗 2.1 CⅡⅡ-3样品体外抗肝癌试验
肝炎和免疫调节等功效 [2-5] 。本课题组前期研究表明，以 2.1.1 样品制备 分别精密称取 10 批 CⅡ-3 样品各
美洲大蠊提取物CⅡ-3为原料的美蠊精胶囊具有显著的 6.00 mg，溶于含 10％胎牛血清的 DMEM 培养基（以下
抗肝癌作用 [6-7] ，并建立了 10 批 CⅡ-3 样品的指纹图 简称“完全培养基”）10 mL 中，得到质量浓度为 600.00
[8]
谱 。但其抗肝癌的活性成分尚未明确，且缺乏药效物 µg/mL 的母液，再用完全培养基稀释成 400.00、300.00、
质基础方面的相关研究。为此，本研究采用超高效液相 200.00、100.00、50.00 µg/mL 等 5 个质量浓度的 CⅡ-3 溶
色谱-四极杆-飞行时间质谱联用法（UHPLC-Q-TOF/ 液，备用。
MS），通过标准品比对和文献检索对 CⅡ-3 所含化合物 2.1.2 细胞培养 用完全培养基于 37 ℃、5％CO2培养
进行分析鉴定；以CⅡ-3对人肝癌细胞HepG2的半抑制 箱中培养 HepG2 细胞（培养条件下同）。培养过程中，
浓度（IC50 ）为抗肝癌活性指标，采用灰色关联度分析法 1～2 d换一次细胞培养液，3～4 d传一代细胞。
（GRA）和正交偏最小二乘法（OPLS）联合建立指纹图谱 2.1.3 CⅡ-3样品对肝癌HepG2细胞活性的影响 取对
与抗肝癌活性之间的谱效关系，旨在为美洲大蠊提取物 数生长期 HepG2 细胞，用完全培养基调整细胞密度至
CⅡ-3 的抗肝癌物质基础研究和临床应用提供科学 1×10 个/mL，按 100 µL/孔接种至 96 孔板中，培养 24 h
5
依据。 后，吸出培养液，PBS 清洗 2 次，加入“2.1.1”项下 5 个质
1 材料 量浓度的CⅡ-3溶液（给药浓度依据前期试验设置），同

1.1 仪器 时设置空白对照组（不含细胞、不含药物）和溶剂对照组
Dionex UITiMate 3000 型 UHPLC 仪（美国 Thermo （不含药物、只含细胞），每组设5个复孔。给药后继续培
Fisher Scientific 公 司）；MALDI-TOF MS 系 统（德 国 养72 h，吸弃孔内培养液，PBS清洗2次，再加入MTT溶
Bruker 公司）；FDU-2100 型冷冻干燥机（昆明倍捷科技 液 20 µL，轻轻拍匀，继续培养 4 h 后，每孔添加 DMSO
有限公司）；SB25-12D 型超声波清洗机（宁波新芝生物 150 µL，低速振荡 10 min，使用酶标仪在 490 nm 波长下
科技股份有限公司）；AL204型电子天平[梅特勒-托利多 检测各孔的吸光度。每组试验重复3次，取平均值，计算
仪器（上海）有限公司]；NU-5510E 型 CO2培养箱（美国 CⅡ-3 样品对 HepG2 细胞的抑制率：细胞抑制率（％）＝
NuAire 公司）；SN255939 型酶标仪（美国 BioTek 公司）； （溶剂对照组吸光度－给药组吸光度）/（溶剂对照组吸光
DT5-6型台式低速离心机（北京时代北利离心机有限公 度－空白对照组吸光度）×100％。
司）；DW-86L388 型超低温冰箱（青岛海尔股份有限公 2.1.4 统计学分析 采用 Excel 2003 进行线性回归分
司）；ES-315型高压灭菌锅（日本Tomy Digital Biology公 析，通过回归方程预测10批CⅡ-3样品对HepG2细胞的
司）；WTE-PW8-5012型超级纯水机（格力电器制造有限 半数抑制浓度（IC50 ），结果见表1。结果显示，各批CⅡ-3
公司）。 样品对HepG2细胞的IC50为70.550～200.303 μg/mL。
1.2 药品与试剂 表1 10批CⅡⅡ-3样品对HepG2细胞的IC50值
美洲大蠊提取物CⅡ-3由大理大学药化学院刘光明 Tab 1 IC50 values of 10 batches of C ⅡⅡ -3 samples
教授提供（编号：S1～S10，每克 CⅡ-3 样品相当于 100 g against HepG2 cells
干燥的美洲大蠊）；肌苷标准品和次黄嘌呤标准品（中国
样品 IC50，μg/mL 样品 IC50，μg/mL
食品药品检定研究院，批号：NUAD-SQW2、B96L-VFAP， S1 150.202 S6 140.314
S2 200.303 S7 95.708
纯度均大于 98％）；DMEM 培养基和胎牛血清（美国
S3 70.550 S8 118.194
Gibco公司）；噻唑蓝（MTT）和二甲基亚砜（DMSO）均购 S4 116.335 S9 183.227
自美国 Sigma 公司；磷酸盐缓冲液（PBS，pH 7.4，天津市 S5 83.875 S10 148.154
福晨化学试剂厂）；乙腈（德国 Merck 公司，色谱纯）；其 2.2 CⅡⅡ-3样品的化学成分分析
余试剂均为分析纯，水为纯净水。 2.2.1 色谱条件 色谱柱：Phenomenex Gemini C18 110A

中国药房 2020年第31卷第16期 China Pharmacy 2020 Vol. 31 No. 16 ·1945 ·