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表5 各组细胞中GST-π、TopoⅡⅡ mRNA表达水平测定
结果（x±±s，n＝3）
敏感组 Tab 5 mRNA expression levels of GST-π and TopoⅡⅡ

in cells in each group（x±±s，n＝3）
组别 GST-π Topo Ⅱ
敏感组 0.63±0.11 0.86±0.24
耐药组 耐药组 1.00±0.00 ＊＊ 1.00±0.00
索拉非尼组 1.01±0.04 0.08±0.01 ##
脱脂膏组 0.07±0.01 ##▲▲ 0.79±0.12 ▲
CⅡ- 3组 ＊＊ 0.26±0.05 ##▲▲ ## 0.77±0.39 ▲
注：与敏感组比较， P＜0.01；与耐药组比较，P＜0.01；与索拉非
索拉非尼组 尼组比较，P＜0.05， P＜0.01 ＊ ＊
▲
▲▲
Note：vs. sensitivity group， P＜0.01；vs. drug-resistance group，
▲▲
## P＜0.01；vs. sorafenib group，P＜0.05， P＜0.01
▲
0.05）。与耐药组比较，索拉非尼组细胞中GST-π蛋白表
脱脂膏组 达水平显著升高（P＜0.01），但脱脂膏组、CⅡ-3 组细胞
中 GST-π蛋白表达水平和索拉非尼组、CⅡ- 3 组细胞中
Topo Ⅱ蛋白表达水平均显著降低（P＜0.01）。与索拉非
尼组比较，脱脂膏组、CⅡ- 3组细胞中GST-π蛋白表达水
CⅡ-3组 平均显著降低（P＜0.01），CⅡ- 3 组 Topo Ⅱ蛋白表达水
平差异无统计学意义（P＞0.05）。各组细胞中 GST-π、
Topo Ⅱ蛋白表达的免疫细胞化学染色显微图见图5，蛋
P-gp LRP BCRP
图4 各组细胞中P-gp、LRP、BCRP蛋白表达的免疫细 白表达水平测定结果见表6。
胞化学染色显微图（×200） 4 讨论
Fig 4 ICC micrograms of protein expression of P-gp， 本研究利用 ADM 自发荧光的特点，通过激光扫描
LRP，BCRP in cells in each group（×200） 共聚焦显微技术观察其在细胞中的累积情况。结果发
现经脱脂膏、CⅡ-3处理后，细胞中ADM含量明显增加，
表4 各组细胞中P-gp、LRP、BCRP蛋白表达水平测定
即药物的外排减少。常规情况下，耐药细胞通过使药物
结果（x±±s，n＝3）
外排产生耐药性，故细胞内药物含量应减少，但由于本
Tab 4 Protein expression levels of P-gp，LRP and
研究中采用耐 ADM 的细胞系，培养时为了维持细胞耐
BCRP in cells in each group（x±±s，n＝3）
药性，加入了含ADM的培养基培养，所以在本研究耐药
组别 P-gp LRP BCRP
敏感组 0.08±0.01 0.10±0.01 0.15±0.01 组细胞中ADM含量较敏感组反而增加。化学治疗仍然
耐药组 0.09±0.01 ＊ 0.20±0.02 ＊＊ 0.18±0.02 ＊＊ 为目前临床上治疗肿瘤的主要手段，索拉非尼为临床常
索拉非尼组 0.12±0.01 ## 0.12±0.01 ## 0.13±0.01 ## 用且是第一个被美国食品药品监督管理局（FDA）批准
脱脂膏组 0.11±0.01 ##▲▲ 0.15±0.02 ##▲▲ 0.15±0.02 ##▲▲ 用于治疗晚期肝癌的分子抑制剂，故本研究以其作为阳
CⅡ-3组 0.11±0.00 ##▲ 0.13±0.01 ## 0.15±0.01 ##
性对照药 。
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＊ ＊
＊
注：与敏感组比较， P＜0.05， P＜0.01；与耐药组比较，P＜
##
▲
0.01；与索拉非尼组比较，P＜0.05， P＜0.01 细胞凋亡是多基因严格控制的细胞自主死亡过程，
▲▲
Note：vs. sensitivity group， P＜0.05， P＜0.01；vs. drug-resis- 这些基因包括抑癌基因 p53、Caspase 家族、Bcl-2 家族
＊ ＊
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tance group，P＜0.01；vs. sorafenib group，P＜0.05， P＜0.01 等。Bcl-2 作为重要的抗凋亡因子，通过和特定的蛋白
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##
高（P＜0.01），但Topo Ⅱ mRNA表达水平差异无统计学 [如 B 细胞淋巴瘤 xL（Bcl-xL）、Bcl-2 相关 X 蛋白（Bax）
意义（P＞0.05）。与耐药组比较，索拉非尼组细胞中 等]形成二聚体后，作为在细胞死亡信号通路上的分子
Topo Ⅱ mRNA 表达水平和脱脂膏组、CⅡ-3 组细胞中 开关，调控细胞凋亡。Bcl-2表达增加时，可阻止细胞凋
GST-π mRNA 表达水平均显著降低（P＜0.01）。与索拉 亡而产生耐药性 。Caspase-9位于凋亡级联反应上游，
[15]
非尼组比较，脱脂膏组、CⅡ-3组细胞中GST-π mRNA表 当凋亡起始信号作用于线粒体后，引起线粒体释放细胞
达水平均显著降低（P＜0.05 或 P＜0.01）。各组细胞中 色素C（Cyt-C）；Cyt-C与凋亡蛋白酶活化因子1（Apaf-1）
GST-π、Topo Ⅱ mRNA表达水平测定结果见表5。 结合并使 Apaf-1 构象改变形成八聚体，后者与 Cas-
3.5.2 酶介导MDR途径中相关蛋白表达 与敏感组比 pase-9 p37 结 合 并 诱 导 其 发 生 自 我 催 化 ；活 化 的
较，耐药组细胞中 TopoⅡ蛋白表达水平显著升高（P＜ Cleaved-Caspase-9 p37 亚基使级联反应进一步放大，从
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0.01），但 GST-π蛋白表达水平差异无统计学意义（P＞ 而促进细胞凋亡 。本研究结果显示，CⅡ-3作用后，耐
中国药房 2020年第31卷第15期 China Pharmacy 2020 Vol. 31 No. 15 ·1821 ·