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应用提供实验依据。                                          2.46 mg/mL、汉黄芩素为 2.18 mg/mL、甘草酸铵为 7.01
        1 材料                                               mg/mL）。将煎液封装于消毒塑料瓶后，保存于－20 ℃
        1.1 仪器                                             冰箱中备用。给药前1天在4 ℃冰箱中解冻。
            BT225 型电子分析天平（德国 Sartorius 公司）；Mo-             2.2 造模、分组与给药
        dular P800 型全自动生化分析仪（瑞士 Roche 公司）；                     将 48 只雄性 SD 大鼠适应性喂养 1 周后，按体质量
        Nanodrop-2000 型核酸蛋白测定仪（美国 Thermo Fisher            随机分为空白对照组（n＝8）和造模组（n＝40）。空白对
        Scientific公司）；ChemiDocXRS+型化学发光凝胶成像系               照组大鼠给予普通饲料（含 10％脂肪、66％碳水化合物
        统（美国Bio-Rad公司）；HiSeq 2500型测序平台（美国Il-               和 24％蛋白质），造模组大鼠给予高脂饲料（含 60％脂
        lumina公司）。                                         肪、20％碳水化合物和20％蛋白质），两组大鼠均自由饮
        1.2 药品与试剂                                          食，持续5周。在本研究中，若造模大鼠体质量超过正常
            葛根饮片（批号：180124，产地：河南）、黄芩饮片（批                   体质量的15％、Lee’s指数有显著差异、血脂水平紊乱但
                                                                                               [12]
        号：171215，产地：辽宁）、黄连饮片（批号：180131，产地：                 血糖水平正常，则视为HLP模型造模成功 。以此为标
        四川）、灸甘草饮片（批号：171214，产地：内蒙古）均购自                     准，共有 30 只大鼠造模成功。将这 30 只大鼠按体质量
        江西江中中药饮片有限公司，经江西中医药大学药学院                           随机分为模型组、辛伐他汀组（阳性对照，10 mg/kg，相当
        刘勇教授鉴定依次为豆科植物野葛[Pueraria lobata                    于临床人用量的 15 倍）和葛根芩连汤高、中、低剂量组
                                                                                          [13]
       （Willd.）Ohwi]的干燥根、唇形科植物黄芩（Scutellaria               （14.85、4.95、1.65 g/kg，以生药量计） ，每组 6 只。各给
        baicalensis Georgi）的干燥根、毛茛科植物黄连（Coptis             药组大鼠灌胃相应药物，空白对照组和模型组大鼠灌胃
        chinensis Franch.）的干燥根茎、豆科植物甘草（Glycyrrhi-          等体积生理盐水，每天给药1次。在给药同时，模型组和
        za uralensis Fisch.）的干燥根和根茎；辛伐他汀片（杭州               各药物组大鼠继续给予高脂饲料，空白对照组大鼠继续
        默沙东制药有限公司，批号：N025120，规格：20 mg）；总                   给予正常饲料。每 2 周监测 1 次模型组大鼠血糖水平，
        TC 检测试剂盒（批号：700487-01）、总 TG 检测试剂盒                  当其血清中空腹血糖（FBG）水平显著升高时则停止给
       （批 号 ：627311-01）、HDL-C 检 测 试 剂 盒（批 号 ：              药，此时共计给药11周。给药期间，空白对照组大鼠由
        HL8108m）均购自瑞士 Roche 公司；葡萄糖检测试剂盒                    于灌胃操作意外死亡2只。
       （宁波普瑞柏公司，批号：GL8322）；粪便 DNA 提取试剂                     2.3  大鼠体质量、体长和Lee’s指数测定
        盒（德国 Qiagen 公司，批号：160033067）；其余试剂均为                    在给药前和给药 11 周后，分别称定大鼠体质量、体
        分析纯，水为超纯水。                                         长（大鼠鼻尖至肛门的长度，精确到0.1 cm），并计算Lee’s
        1.3  动物                                            指数[Lee’s指数＝体质量（g） ×1 000/体长（cm）] 。
                                                                                                     [14]
                                                                                    1/3
            SPF级SD大鼠48只，雄性，3～4周龄，体质量（90±                   2.4  大鼠血脂、血糖水平检测
        10）g，购于江西中医药大学实验动物科技中心，实验动                             在给药前和给药 11 周后，分别从大鼠眼静脉丛采
        物生产许可证号：SCXK（赣）2018-0003。动物饲养于该                    血，在4 ℃下静置3 h后，以3 000 r/min离心10 min，分离
        中心屏障系统实验室[实验动物使用许可证号：SYXK-                         血清。采用胆固醇氧化酶法检测血清中 TC 水平、酶法
       （赣）2017-0004]。本实验已得到江西中医药大学动物伦                      检测血清中 TG 水平、均相酶比色法检测血清中 HDL-C
        理委员会批准，相关操作符合科学技术部颁发的《实验                           水平、己糖激酶法检测血清中 FBG 水平，具体操作均按
        动物管理条例》（2017版）要求。                                  照相应试剂盒说明书进行。
        2 方法                                               2.5 大鼠盲肠内容物DNA 16S rRNA测序及质控
        2.1 葛根芩连汤煎液的制备                                         取血后深度麻醉大鼠，开腹后剪断盲肠连接的肠道
            葛根芩连汤是由葛根、黄芩、黄连、炙甘草按8∶3∶3∶2                    组织，以剪断处为开口，将盲肠内容物取出，置于2.0 mL
        的质量比组成的中药复方。按照上述比例称取相应药                            无菌冻存管内，并立刻将冻存管置于液氮中冷冻，随后
        材适量，混匀，加 8 倍量水（mL/g），浸泡约 30 min（以浸                 转移至－80 ℃冰箱中保存，备用。采用粪便 DNA 提取
        透为准），然后加热至沸腾，保持微沸 40 min，低温减压                      试剂盒提取盲肠内容物的肠道菌群基因组DNA，并用核
        浓缩，得每 1 mL 中含原生药材 1 g 的煎液（经高效液相                    酸蛋白测定仪测定其浓度和纯度，以 1％琼脂糖凝胶检
        色谱法检测，该煎液中有效成分含量葛根素为 23.70                         测其完整性。质检合格后，利用 Illumina HiSeq 2500 测
        mg/mL、甘草苷为 4.54 mg/mL、黄连碱为 10.23 mg/mL、            序平台对 16S rRNA 基因的 V3～V4 区域进行测序。将
        黄芩苷为118.20 mg/mL、黄连素为36.50 mg/mL、巴马亭               测序得到的原始 Reads 对序列质量进行质控和过滤，再
        为 6.88 mg/mL、汉黄芩苷为 21.30 mg/mL、黄芩黄素为               提取其丰度值进行后续关联分析。


        中国药房    2020年第31卷第15期                                             China Pharmacy 2020 Vol. 31 No. 15  ·1825  ·
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