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岭南山竹子醇提物对 LPS 致 RAW264.7 细胞炎性损伤的保护作

用研究 Δ

2
3
1# a
黄 雷 1，2＊ ，刘美琼 ，张小曼 ，苏少锋 ，邹小琴 ，钟小斌 ，冯 洁 （1.广西医科大学附属埌东医院药学部，南
2# b
2
2
宁 530029；2.广西医科大学药学院中药学教研室，南宁 530021；3.广西医科大学第一附属医院科研部，南宁
530021）
中图分类号 R285.5 文献标志码 A 文章编号 1001-0408（2020）14-1719-07
DOI 10.6039/j.issn.1001-0408.2020.14.11

摘 要 目的：探讨岭南山竹子70％乙醇提取物（GOEE）对脂多糖（LPS）致RAW264.7细胞炎性损伤的保护作用及其潜在分子机
制。方法：取岭南山竹子果皮用70％乙醇回流提取，制得GOEE。采用Folin-Ciocalteau法和紫外-可见分光光度法分别测定GOEE
中总多酚和总黄酮的含量。采用MTT法检测不同剂量GOEE的细胞毒性；以LPS诱导小鼠单核巨噬细胞RAW264.7建立炎症模
型，分别以地塞米松、N-乙酰基-L-半胱氨酸为阳性对照，采用Griess法和2′，7′-二氯荧光素法检测细胞培养液中一氧化氮（NO）和
细胞中活性氧（ROS）的含量；采用酶联免疫吸附测定（ELISA）法测定细胞培养液中肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素6（IL-6）
和 IL-1β水平；采用 Western blotting 法测定细胞中 p65 蛋白（p65）、磷酸化 p65（p-p65）、核因子κB 抑制蛋白α（IκBα）、磷酸化 IκBα
（p-IκBα）、血红素加氧酶-1（HO-1）以及细胞核内核因子Ｅ2相关因子2（NRF2）蛋白的表达水平。结果：GOEE中总多酚与总黄酮
的含量分别为（20.191±1.264）、（12.571±0.020）mg/g。当剂量≤500 μg/mL时，GOEE对RAW264.7细胞存活率无显著影响（P＞
0.05）。与对照组比较，LPS模型组NO、ROS含量，TNF-α、IL-6、IL-1β水平，p-p65/p65和p-IκBα/IκBα比值以及NRF2蛋白的表达水
平均显著升高（P＜0.05或P＜0.01）。与LPS模型组比较，阳性对照组和GOEE各处理组细胞NO（除GOEE 50 μg/mL处理组外）、
ROS 含量，TNF-α、IL-6、IL-1β水平以及 p-p65/p65 和 p-IκBα/IκBα比值均显著降低，HO-1、NRF2 蛋白的表达水平均显著升高（P＜
0.05或P＜0.01）。结论：GOEE可通过抑制炎症反应、抑制核因子κB通路磷酸化、促进NRF2蛋白入核等途径来减轻LPS诱导的小
鼠巨噬细胞炎性损伤。
关键词 岭南山竹子；果皮；醇提物；抗炎作用；核因子κB；核因子E2相关因子2；小鼠巨噬细胞；RAW264.7

Study on Protective Effects of the Ethanol Extract of Garcinia oblongifolia on LPS-induced RAW264.7 Cell
Inflammatory Injury
HUANG Lei ，LIU Meiqiong ，ZHANG Xiaoman ，SU Shaofeng ，ZOU Xiaoqin ，ZHONG Xiaobin ，FENG Jie 2
2
2
2
1，2
1
3
（1. Dept. of Pharmacy，Langdong Hospital of Guangxi Medical University，Nanning 530029，China；2. TCM
Teaching and Research Section，School of Pharmaceutical Sciences，Guangxi Medical University，Nanning
530021，China；3. Dept. of Scientific Research，the First Affiliated Hospital of Guangxi Medical University，
Nanning 530021，China）
ABSTRACT OBJECTIVE：To investigate the anti-inflammatory activity of 70％ ethanol extracts from Garcinia oblongifolia
（GOEE）on LPS-induced RAW264.7 cells and its potential molecular mechanism. METHODS：GOEE was obtained after the fresh
G. oblongifolia epicarp refluxed with 70％ ethanol. The contents of total phenol and total flavonoids were determined by
Folin-Ciocalteau assay and UV spectrophotometer. MTT assay was used to detect the cytotoxicity of different doses of GOEE. The
inflammatory model was induced in RAW264.7 cells by lipopolysa- ccharide（LPS）. Using dexamethasone and N-acetyl-L-cysteine
as positive control，Griess assay and 2′，7′-dichloro- fluorescein assay were used to detect the contents of NO in cell culture
medium and ROS in cells. The levels of TNF-α，IL-6，and IL-1β in cell culture medium were measured by ELISA. The protein
expression of p65，p-p65，IκBα，p-IκBα，HO-1 in cells and NRF2 in nucleus were determined by using Western blotting assay.
RESULTS：The contents of total phenol and flavonoids in GOEE were（20.191±1.264）and（12.571±0.020）mg/g，respectively.
At the concentration below 500 μ g/mL， GOEE had no
Δ 基金项目：广西自然科学基金资助项目（No.2018GXNSFAA-
significantly effect on survival rate of RAW264.7 cells （P＞
294043）；南宁市青秀区科技计划项目（No.2019025）
0.05）. Compared with control group，the contents of NO and
＊硕士研究生。研究方向：天然产物研发。电话：0771-5356154。
ROS，the levels of TNF-α，IL-6 and IL-1β，ratio of p-p65 to
E-mail：leihuang12345@163.com
p65，ratio of p-IκBα to IκBα，protein expression of NRF2
#a 通信作者：主任药师，硕士生导师，硕士。研究方向：中药研
were increased significantly in LPS model group（P＜0.05 or
发。E-mail：1878125675@qq.com
#b 通信作者：教授，硕士生导师，博士。研究方向：天然产物研 P＜0.01）. Compared with LPS model group，the contents of
发。电话：0771-5356154。E-mail：ezjiefeng@hotmail.com NO（except for GOEE 50 μg/mL group）and ROS，the levels

中国药房 2020年第31卷第14期 China Pharmacy 2020 Vol. 31 No. 14 ·1719 ·