Page 58 - 202014

资料发现，现有研究多以单一成分的含量作为舒肝和胃 mL使溶解，通过D101型大孔吸附树脂色谱柱（内径1.5
[9]
丸的质量控制指标 [6-8] ；此外，单婷婷等 对舒肝和胃丸中 cm，柱高 10 cm），依次用水 50 mL、30％甲醇 50 mL、甲
挥发性成分进行了研究，也仅限于该类成分的指纹图谱 醇50 mL洗脱，收集甲醇洗脱液，旋转蒸发至近干，用混
研究。鉴于此，本文以舒肝和胃丸中君药佛手作为研究 合溶剂[甲醇-0.1％磷酸水溶液（20 ∶ 80，V/V），下同]转移
对象，拟建立同时测定该方中佛手活性成分7-羟基香豆 并定容至10 mL量瓶中，经0.45 μm微孔滤膜滤过，取续
素、6，7-二甲氧基香豆素、5，7-二甲氧基香豆素、欧前胡
滤液，即得。
素、佛手柑内酯含量的高效液相色谱法（HPLC），旨在为
2.2.2 对照品溶液 精密称取 7-羟基香豆素对照品
有效控制舒肝和胃丸的质量提供方法支持。
37.50 mg、6，7-二甲氧基香豆素对照品 21.50 mg、5，7-二
1 材料
甲氧基香豆素对照品 25.22 mg、欧前胡素对照品 17.50
1.1 仪器
mg、佛手柑内酯对照品 40.66 mg，分别置于 20 mL 量瓶
LC-20A 型 HPLC 仪，配有二极管阵列检测器、自动
中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为各单一对照品
进样器、柱温箱（日本 Shimadzu 公司）；1200 型 HPLC 仪
贮备液。分别精密量取上述单一对照品贮备液各1 mL，
（美国Agilent公司）；Meteler XP205型电子分析天平（瑞
士 Mettler Toledo 公司，精度：0.01 mg）；KQ-600DE 型超 置于同一20 mL量瓶中，用混合溶剂稀释至刻度，摇匀，
声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；A10型超纯水 经0.45 μm微孔滤膜滤过，取续滤液，即得上述成分质量
机[密理博（中国）有限公司]。 浓度分别为 93.75、53.75、63.05、43.75、101.65 μg/mL 的
1.2 药品与试剂 混合对照品溶液。
7-羟基香豆素对照品（批号：111739-200501，供含量 2.2.3 阴性样品溶液 按照舒肝和胃丸处方配比，称取
测定用）、6，7-二甲氧基香豆素对照品（批号：111740- 除佛手外的12味中药饮片，按照“2.2.1”项下方法制备不
200702，供 含 量 测 定 用）、欧 前 胡 素 对 照 品（批 号 ： 含佛手的阴性样品溶液。
110826-201918，纯度：99.0％）、佛手柑内酯对照品（批 2.3 专属性试验
号：520036-201401，纯度：99.2％）均购自中国食品药品 分别取空白对照溶液（混合溶剂）、混合对照品溶
检定研究院；5，7-二甲氧基香豆素对照品（北京北纳创 液、供试品溶液（批号：18032500）和阴性样品溶液，按
联生物技术研究院，批号：A63874，纯度：98.0％）；佛手
“2.1”项下色谱条件进样测定，记录色谱图。结果，7-羟
（批号：190901）、白芍（批号：191212）、醋香附（批号：
基香豆素、6，7-二甲氧基香豆素、5，7-二甲氧基香豆素、
2001015）、陈皮（批号：200304）、木香（批号：190711）、郁
欧前胡素、佛手柑内酯的色谱峰峰形对称，其色谱峰与
金（批号：191203）、炒白术（批号：190808）、柴胡（批号：
相邻色谱峰的分离度均不小于 1.6，空白对照与阴性样
20100201）、广藿香（批号：20191204）、炙甘草（批号：
品溶液对5种成分的测定均无干扰，详见图1。
190811）、莱 菔 子（批 号 ：20191113）、焦 槟 榔（批 号 ：
20190902）、乌药（批号：200202）等中药饮片均购自药 2.0×10 6 2.0×10 6
店，经山东省立第三医院李俊峰副主任中药师鉴定均为 1.5×10 6 1.5×10 6 1
真品；舒肝和胃丸（北京同仁堂科技发展股份有限公司 mV U， 1.0×10 6 mV U， 1.0×10 6 3
制药厂，批号：18032500、19033869、19013386，规格：水 5.0×10 5 5.0×10 5 2 4 5
蜜丸每 100 丸重 20 g）；D101 型大孔吸附树脂（粒径： 0 0
0 10 20 30 40 50 60 0 10 20 30 40 50 60
0.25～0.84 mm，天津南大树脂科技有限公司）；甲醇为 t，min t，min
色谱纯，磷酸为优级纯，其余试剂均为分析纯，水为超 A.空白对照溶液 B.混合对照品溶液
2.0×10 6 2.0×10 6
纯水。
1.5×10 6 1.5×10 6
2 方法与结果 mV 1.0×10 6 1 mV 1.0×10 6
2.1 色谱条件 U， 2 3 U，
5.0×10 5 4 5 5.0×10 5
色谱柱：Venusil MP C18 （250 mm×4.6 mm，5 μm）；流
0 0
动相：甲醇（A）-0.1％磷酸水溶液（B），梯度洗脱（0～9 0 10 20 30 40 50 60 0 10 20 30 40 50 60
t，min t，min
min，20％ A；9～17 min，20％ A→50％ A；17～30 min， C.供试品溶液 D.阴性样品溶液
50％A→55％A；30～60 min，55％A→100％A）；流速：1.0
注：1. 7-羟基香豆素；2. 6，7-二甲氧基香豆素；3. 5，7-二甲氧基香
mL/min；检测波长：270 nm；柱温：30 ℃；进样量：10 μL。 豆素；4.欧前胡素；5.佛手柑内酯
2.2 溶液制备 Note：1. 7-hydroxycoumarin；2. 6，7-dimethoxycoumarin；3. 5，
2.2.1 供试品溶液 取舒肝和胃丸适量，研碎，精密称 7-dimethoxycoumarin；4. imperatorin；5. bergaptene
取粉末约 2.0 g，置于 250 mL 圆底烧瓶中，加入甲醇 100 图1 高效液相色谱图
mL，采用索氏提取法提取1 h，提取液蒸干，残渣加水10 Fig 1 HPLC chromatograms

·1716 · China Pharmacy 2020 Vol. 31 No. 14 中国药房 2020年第31卷第14期