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of TNF-α，IL-6 and IL-1β，ratio of p-p65 to p65 and ratio of p-IκBα to IκBα were decreased significantly in GOEE groups and
positive control groups， while protein expression of HO-1 and NRF2 were increased significantly （P＜0.05 or P＜0.01）.
CONCLUSIONS：GOEE attenuates LPS-induced macrophages inflammation injury by inhibiting the inflammatory response and the
phosphorylation of NF-κB pathway，promoting NRF2 protein transportation to the nucleus.
KEYWORDS Garcinia oblongifolia；Epicarp；Ethanol extract；Anti-inflammatory effect；NF-κ B；NRF2；Mice macrophage；
RAW264.7

炎症是机体抵御感染和组织损伤的一种防御机制， 统（美国LI-COR公司）；SpectraMax Plus384型连续光谱
许多慢性炎症性疾病（如糖尿病、动脉粥样硬化等）可能 扫描式酶标仪（美国 Molecular Devices 公司）；Synergy TM
是由于过度的炎症反应所引起的 。当各种内在或外在 H1 全功能酶标仪（美国 BioTek 公司）；R-1001N 型旋转
[1]
的刺激导致巨噬细胞过度活化时，炎症细胞被激活并维 蒸发仪（郑州长城科工贸易有限公司）；ACB-4A1型超净
持免疫反应。因此，调节巨噬细胞活化可能将有利于许 工作台（新加坡 ESCO 公司）；3111 型 CO2培养箱（美国
多炎症性疾病的治疗。脂多糖（LPS）是革兰氏阴性菌细 Thermo Fisher Scientific公司）。
胞壁的内毒素，通常用于诱导小鼠单核巨噬细胞以建立 1.2 药品与试剂
[2]
炎症模型 。LPS 还可使核因子κB（NF-κB）活化，活化 新鲜岭南山竹子于 2017 年 7 月采集于广西壮族自
的NF-κB可进一步诱导促炎细胞因子的产生，包括肿瘤 治区北海市，经广西医科大学冯洁教授鉴定为藤黄科藤
坏死因子α（TNF-α）、白细胞介素6（IL-6）和IL-1β。而促 黄属岭南山竹子（G. oblongifolia Champ. ex Benth.）的新
炎细胞因子能够刺激机体产生过量的活性氧（ROS），从 鲜果实。药材标本（编号：GB20170728）保存于广西医
而打破机体内氧化与抗氧化之间的平衡，造成氧化应 科大学药学院。
[3]
激 。若机体长时间处于氧化应激状态，可进一步诱导 LPS（美国Sigma公司，批号：L2880）；NO试剂盒（南
[4]
细胞凋亡、组织坏死 。核因子E2相关因子2（NRF2）是 京建成生物工程研究所，批号：20181007）；TNF-α、IL-6、
调节氧化应激的关键蛋白，有文献报道，激活NRF2可保 IL-1β酶联免疫吸附测定（ELISA）试剂盒（上海源叶生物
护机体免受急性肺损伤、急性肝衰竭等各种炎症性疾病 科 技 有 限 公 司 ，批 号 ：CK-E20220M、CK-E20012M、
的侵害 [5-6] 。因此，NRF2 与 NF-κB 一同作为炎症性疾病 CK-E20533M）；兔源磷酸化p65（p-p65）、磷酸化核因子κ
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的潜在治疗靶标引起了学者的广泛关注 。 B 抑制蛋白α（p-IκBα）多克隆抗体（美国 ABclonal Tech-
岭 南 山 竹 子（Garcinia oblongifolia Champ. ex nology 公司，批号：AP0124、AP0614）；兔源 IκBα、p65、
Benth.）属于藤黄科藤黄属植物，主要分布于我国广西、 NRF2、血红素加氧酶1（HO-1）、核纤层蛋白B（Lamin B）
广东地区。据文献报道，从岭南山竹子的树皮中分离出 多克隆抗体和小鼠源甘油醛-3-磷酸脱氢酶（GAPDH）单
来 的 Garcinone C、Griffipavixanthone、Oblongifolin M、 克隆抗体（美国 Proteintech Group 公司；批号：10268-1-
Norcowanin等化合物具有抗肿瘤、抗糖尿病和抗病毒等 AP、10745-1-AP、16396-1-AP、10701-1-AP、12987-1-AP、
活性 [8-11] 。然而，国内外现有研究主要集中于岭南山竹 6004-1-1g）；胎 牛 血 清（美 国 Gemini 公 司 ，批 号 ：
子的树皮与树叶，且多为简单的活性成分研究。由于民 A87F82H）；高糖DMEM培养基（美国Gibco公司，批号：
间主要是以岭南山竹子的果皮入药以消炎镇痛，有关该 8118048）；兔源免疫球蛋白 G（IgG）（H+L）荧光二抗、小
药果皮化学成分的研究仅有 1 篇报道 ，而有关其药理 鼠源IgG（H+L）荧光二抗（美国CST公司，批号：5366P、
[12]
作用尤其是抗炎抗氧化活性的研究等尚未见相关报 5257P）；N-乙酰基-L-半胱氨酸（NAC）对照品（抗氧化
道 。 为 此 ，本 研 究 以 LPS 诱 导 小 鼠 单 核 巨 噬 细 胞 剂，纯度：≥99％）、ROS试剂盒[含2′，7′-二氯二氢荧光
RAW264.7 建 立 炎 症 细 胞 模 型 ，通 过 检 测 一 氧 化 氮 素二乙酸酯（DCFH-DA）等试剂]、胞核胞浆蛋白抽提试
（NO）、ROS的含量以及促炎细胞因子、炎症介质等炎性 剂盒、BCA蛋白浓度测定试剂盒、Loading Buffer上样缓
靶标表达水平的变化，初步探讨岭南山竹子70％乙醇提 冲液（碧云天生物技术研究所，批号：S0077、S0033、
取物（GOEE）的抗炎活性及其潜在的分子机制，旨在为 P0027、P0012、P0015）；地塞米松磷酸钠注射液（DEX，阳
治疗炎症性疾病提供更多的候选药物。 性对照，国药集团容生制药有限公司，批号：1801207，规
1 材料 格：1 mL∶ 2 mg）；MTT、二甲基亚砜（DMSO）、芦丁对照
1.1 仪器 品（纯度：≥99％）、青链霉素双抗（北京索莱宝科技有限
EL204型电子分析天平（瑞士Mettler Toledo公司）； 公司，批号：M8180、D8370、YZ-10080、20180418）；没食
TV-1901型紫外-可见分光光度计（北京普析通用仪器有 子酸对照品（中国食品药品检定研究院，批号：110831-
限责任公司）；WIX-miniPRO4 型迷你垂直电泳槽（北京 201906，纯度：≥99％）；其余试剂均为分析纯，水为超
韦克斯科技有限公司）；Odyssey型双色红外激光成像系 纯水。

·1720 · China Pharmacy 2020 Vol. 31 No. 14 中国药房 2020年第31卷第14期