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1 ∶ 10 000），室温下避光孵育 1 h，以 TBST 溶液清洗 10 模型组比较，DEX 处理组和 GOEE 100、150、200、300
min×3 次。于双色红外激光成像系统上成像，并通过 μg/mL处理组细胞培养液中NO的含量均显著降低（P＜
Image J2 v5.2.5软件分析，以p-p65和p65、p-IκBα和IκBα 0.05），且随着剂量的增加，NO 含量有减少的趋势。与
灰度值的比值（p-p65/p65、p-IκBα/IκBα比值）来表示 对照组比较，LPS 模型组细胞中 ROS 的含量显著升高
p65、IκBα的磷酸化水平，以目标蛋白与内参（HO-1 以 （P＜0.01）；与LPS模型组比较，NAC处理组与GOEE各
GAPDH 为内参，NRF2 以 Lamin B 为内参）的灰度值比 处理组ROS的含量均显著降低（P＜0.05或P＜0.01），详
值来表示其表达水平。上述试验重复3次。 见表2。
2.9 统计学方法 表 2 不同剂量 GOEE 对 LPS 诱导的 RAW264.7 细胞
采用SPSS 17.0软件对数据进行统计分析。计量资 NO、ROS含量的影响（x±±s，n＝3）
料以 x±s 表示，采用单因素方差分析进行多组间比较， Tab 2 Effects of different doses of GOEE on the con-
采用 LSD-t 检验进行组间两两比较。P＜0.05 为差异有 tents of NO and ROS in LPS-induced
统计学意义。 RAW264.7 cells（x±±s，n＝3）
3 结果 组别 剂量 NO，μmol/L ROS，a.u.
3.1 总多酚和总黄酮的含量测定结果 对照组 4.58±0.88 1 061.33±121.48
LPS模型组 1 μg/mL 27.89±1.89 ＊＊ 6 404.33±377.47 ＊＊
以没食子酸当量计算GOEE中总多酚的含量，根据 DEX处理组 0.2 μg/mL 18.73±0.88 ##
标准曲线方程 Y＝0.111 6X+0.018 0（R ＝0.999 0）计算 NAC处理组 10 mmol/L 2 890.67±187.58 ##
2
出总多酚含量为（20.191±1.264）mg/g（n＝3）。以芦丁 GOEE处理组 50 μg/mL 27.64±1.30 3 638.00±150.69 ##
100 μg/mL 25.56±1.51 # 2 988.33±87.84 ##
当量计算 GOEE 中总黄酮的含量，根据标准曲线方程 150 μg/mL 21.64±0.50 ## 2 883.00±315.93 ##
2
Y＝0.012 7X－0.017 6（R ＝0.999 4）计算出总黄酮含量 200 μg/mL 15.82±0.29 ## 2 452.67±309.07 ##
300 μg/mL 13.74±0.63 ## 1 920.00±290.99 ##
为（12.571±0.020）mg/g（n＝3）。
＊＊
#
##
注：与对照组比较， P＜0.01；与LPS模型组比较，P＜0.05，P＜
3.2 GOEE对LPS诱导RAW264.7细胞存活率的影响
0.05
LPS模型组细胞存活率与对照组比较，差异无统计
#
Note：vs. control group， P＜0.01；vs. LPS model group，P＜0.05，
＊＊
学意义（P＞0.05）。与对照组比较，GOEE 1 000 µg/mL
##
P＜0.05
组细胞存活率显著降低（P＜0.01），而当 GOEE 剂量≤ 3.4 GOEE对LPS诱导RAW264.7细胞TNF-α、IL-1β、
500 µg/mL 时，各剂量组细胞存活率与对照组比较差异 IL-6水平的影响
均无统计学意义（P＞0.05），详见表 1。根据上述结果， 与对照组比较，LPS 模型组细胞培养液中 TNF-α、
本研究选择 GOEE 剂量范围为 0～500 µg/mL 进行后续 IL-6、IL-1β水平均显著升高（P＜0.05）。与 LPS 模型组
试验。 比较，DEX 处理组和 GOEE 各处理组细胞培养液中
表1 不同剂量GOEE对LPS诱导RAW264.7细胞存活 TNF-α、IL-6、IL-1β水平均显著降低（P＜0.05），详见表3。
率的影响（x±±s，n＝3） 表 3 不 同 剂 量 GOEE 对 LPS 诱 导 RAW264.7 细 胞
Tab 1 Effects of different doses of GOEE on survival TNF-α、IL-6、IL-1β水平的影响（x±±s，n＝3）
rate of LPS-induced RAW264.7 cells（x ±± s， Tab 3 Effects of different does of GOEE on the levels
n＝3） of TNF-α ，IL-6 and IL-1 β in LPS-induced
组别 剂量，μg/mL 存活率，％ RAW264.7 cells（x±±s，n＝3）
对照组 100
LPS模型组 1. 97.60±2.82 组别 剂量，μg/mL TNF-α，pg/mL IL-6，pg/mL IL-1β，pg/mL
GOEE处理组 15.625 94.76±2.92 对照组 158.48±18.90 ＊＊ 41.08±1.29 ＊＊ 35.63±15.50 ＊＊
31.25 94.32±9.26 LPS模型组 1. 481.47±18.24 ## 84.42±2.09 ## 110.25±13.02 ##
62.5 96.37±7.80 DEX处理组 0.2 271.03±20.43 ## 53.40±7.22 ## 74.14±4.15 ##
125. 96.41±4.86 GOEE处理组 100. 254.17±12.71 ## 54.89±7.06 ## 73.39±11.57 ##
250. 98.87±5.57 200. 226.91±13.95 ## 49.22±3.87 ## 69.70±10.9 ##
500. 97.77±2.99 300. 199.80±16.62 41.98±1.12 48.25±14.40
##
＊＊
1 000. 75.58±4.93 ＊＊ 注：与对照组比较， P＜0.01；与LPS模型组比较，P＜0.01
＊＊
##
注：与对照组比较， P＜0.01 Note：vs. control group， P＜0.01；vs. LPS model group，P＜0.01
＊＊
＊＊
Note：vs. control group， P＜0.01 3.5 GOEE 对 LPS 诱导 RAW264.7 细胞 NF-κB 活化的
3.3 GOEE 对 LPS 诱导 RAW264.7 细胞 NO、ROS 含量 影响
的影响 与对照组比较，LPS 模型组细胞中 p-p65/p65 和
LPS模型组细胞培养液中NO的含量约为对照组的 p-IκBα/IκBα比值均显著升高（P＜0.01）；与 LPS 模型组
6.09 倍，组间比较差异有统计学意义（P＜0.01）；与 LPS 比较，DEX 处理组和 GOEE 各处理组细胞中 p-p65/p65
·1722 · China Pharmacy 2020 Vol. 31 No. 14 中国药房 2020年第31卷第14期
