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2.1.9 加样回收率试验 甜菜碱的含量分别为 1.68％、1.85％、2.02％、2.10％、
精密称取已知含量的枸杞子样品（批号：NKY01）， 2.13％、2.20％、2.21％、2.19％。可见，当提取时间超过
粉碎，取粉末 9 份，置于具塞锥形瓶中，分别精密加入 45 min后，甜菜碱含量的变化不大。
“2.1.1”项下对照品贮备液 0.5、1.0、1.5 mL，按“2.1.2”项 （4）料液比：精密称取干燥后的枸杞子样品（批号：
下方法制备供试品溶液，再按“2.1.3”项下色谱条件进样 NKY01）5 份，每份 1.0 g，分别置于具塞锥形瓶中，精密
测定，记录峰面积并计算加样回收率，结果见表1。 加入甲醇10、20、30、40、50 mL，即料液比分别为1∶10、1∶20、
表1 加样回收率试验结果（n＝3） 1∶30、1∶40、1∶50（g/mL），称定质量，超声提取45 min，放
Tab 1 Results of recovery tests（n＝3） 至室温，再次称定质量，用甲醇补足减失的质量，摇匀，
序号 已知量，mg 加入量，mg 测得量，mg 回收率，％ 平均回收率，％ RSD，％ 用0.45 μm滤膜滤过，取续滤液，按“2.1.3”项下色谱条件
1 5.075 8 2.543 8 7.567 2 97.94 98.86 0.8 进样测定，记录峰面积并按外标法计算甜菜碱含量。结
2 4.876 3 2.543 8 7.408 8 99.56 果，上述料液比提取液中甜菜碱含量分别为 1.85％、
3 5.011 5 2.543 8 7.532 1 99.09
4 5.055 2 5.087 6 9.984 7 96.89 98.12 1.4 1.92％、2.20％、2.21％、2.19％。可见，当料液比为1 ∶ 30、
5 5.183 8 5.087 6 10.163 2 97.87 1∶40、1∶50时甜菜碱含量较高，且差异不大。
6 5.045 3 5.087 6 10.113 2 99.61 2.2.2 正交试验
7 5.581 8 7.631 4 13.117 8 98.75 97.41 1.4
8 5.386 8 7.631 4 12.815 6 97.35 在单因素试验结果的基础上，以甲醇体积分数
9 5.515 9 7.631 4 12.851 2 96.12 （A，％）、提取时间（B，min）、料液比（C，g/mL）为考察因
2.2 甜菜碱提取方法筛选 素，甜菜碱含量为指标，采用L9 （3）正交试验设计对枸杞
4
2.2.1 单因素试验 子中甜菜碱的提取方法进行优化。因素与水平见表 2，
（1）提取方法：精密称取干燥后的枸杞子样品（批 正交试验设计与结果见表3，方差分析结果见表4。
号：NKY01）6份，每份1.0 g，分别置于具塞锥形瓶中，精 表2 因素与水平
密加入甲醇 30 mL，称定质量。取 3 份超声（功率：250 Tab 2 Factors and levels
W，频率：33 kHz，下同）提取 60 min，另外 3 份加热回流 因素
水平
提取60 min，均冷却至室温，再次称定质量，用甲醇补足 A，％ B，min C，g/mL
1 100 40 1∶20
减失的质量，摇匀，用 0.45 μm 滤膜滤过，取续滤液，按
2 80 45 1∶30
“2.1.3”项下色谱条件进样测定，记录峰面积并按外标法 3 70 50 1∶40
计算甜菜碱含量。结果，超声提取和加热回流提取的提 表3 正交试验设计与结果
取液中甜菜碱的平均含量分别为 2.20％和 2.19％（n＝ Tab 3 Design and results of orthogonal tests
3），两种方法所得甜菜碱的含量相似。故综合考虑实际 因素
序号 甜菜碱含量，％
操作和人为影响，最终选择超声提取作为枸杞子中甜菜 A，％ B，min C，g/mL D（误差）
碱的提取方法。 1 1 1 1 1 2.18
2 1 2 2 2 2.31
（2）提取溶剂：精密称取干燥后的枸杞子样品（批
3 1 3 3 3 2.27
号：NKY01）7份，每份1.0 g，分别置于具塞锥形瓶中，精 4 2 1 2 3 2.04
密加入甲醇、80％甲醇、70％甲醇、60％甲醇、50％甲醇、 5 2 2 3 1 2.17
6 2 3 1 2 2.06
水和 0.1 mol/L 盐酸溶液各 30 mL，称定质量，超声处理
7 3 1 3 2 1.81
40 min，冷却至室温，再次称定质量，用相应提取溶剂补 8 3 2 1 3 1.75
足减失的质量，摇匀，用0.45 μm滤膜滤过，取续滤液，按 9 3 3 2 1 1.89
“2.1.3”项下色谱条件进样测定，记录峰面积并按外标法 k1 2.25 2.01 2.00 2.08
k2 2.09 2.08 2.08 2.06
计算甜菜碱含量。结果，上述溶剂提取液中甜菜碱的含
k3 1.82 2.07 2.08 2.02
量分别为2.21％、2.10％、1.95％、1.82％、1.80％、1.51％、 R 0.43 0.07 0.08 0.06
1.43％，其中含量较高的溶剂依次为甲醇、80％甲醇、 表4 方差分析结果
70％甲醇。 Tab 4 Results of variance analysis
（3）提取时间：精密称取干燥后的枸杞子样品（批 变异来源 平方和 自由度 均方 F P
号：NKY01）8份，每份1.0 g，分别置于具塞锥形瓶中，精 A 0.292 1 2 0.146 0 52.154 8 ＜0.05
密加入甲醇30 mL，称定质量，分别超声提取20、25、30、 B 0.008 5 2 0.004 2 1.511 9 ＞0.05
C 0.014 5 2 0.007 2 2.583 3 ＞0.05
35、40、45、50、55 min，冷却至室温，再次称定质量，用甲 D（误差） 0.005 6 2 0.002 8
醇补足减失的质量，摇匀，用 0.45 μm 滤膜滤过，取续滤 注：F0.05 （2，2）＝19.00；F0.01 （2，2）＝99.00
液，按“2.1.3”项下色谱条件进样测定，记录峰面积并按 Note：F0.05 （2，2）＝19.00；F0.01 （2，2）＝99.00
外标法计算甜菜碱含量。结果，上述提取时间提取液中 由表 3 结果可知，各因素对甜菜碱含量影响程度的

·1702 · China Pharmacy 2020 Vol. 31 No. 14 中国药房 2020年第31卷第14期