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已有研究报道，采用 HPLC 法测定甜菜碱提取物的含                         回归方程为y＝2 848x+13.10（R ＝0.999 3），甜菜碱检测
                                                                                      2
        量，但多使用蒸发光散射检测器，且柱前衍生等样品处                           质量浓度的线性范围为2.035～2 035.04 μg/mL。
        理和提取方法较为复杂          [13-16] ，使得上述方法的精密度或                 600
        准确性均受影响。在此基础上，本研究建立了测定枸杞                                 500
                                                                 400
        子中甜菜碱含量的 HPLC 法；并以甜菜碱含量为指标，                             mAU  300
        采用单因素试验和正交试验对其提取方法进行了筛选；                                 200
                                                                                           甜菜碱
        同时，将所建 HPLC 法与《中国药典》方法进行了比较，                             100
                                                                  0
        旨在为枸杞子的质量控制和甜菜碱的提取提供方法                                         2.5  5  7.5  10  12.5  15  17.5  20
        支持。                                                                         t，min
                                                                                 A.对照品溶液
        1 材料                                                     600
        1.1 仪器                                                   500
                                                                 400
            1260 型 HPLC 仪（美国 Agilent 公司）；XS205DU 型              mAU  300
        电子天平[梅特勒-托利多仪器（上海）有限公司]；CQ-                              200                        甜菜碱
        200B-DST 型超声波清洗器（上海跃进医用光学器械                              100
                                                                  0
        厂）；800Y型粉碎机（永康市铂欧五金制品有限公司）。                                    2.5  5  7.5  10  12.5  15  17.5  20
        1.2 药品与试剂                                                                   t，min
                                                                                 B.供试品溶液
            甜菜碱对照品（中国食品药品检定研究院，批号：                               600
        110894-201604，纯度：99.2％）；10 批枸杞子药材（批号：                    500
                                                                 400
        NKY01～NKY10）采自宁夏银川市贺兰县项目实验基                             mAU  300
        地，由宁夏农林科学院农业生物技术研究中心郑国保副                                 200
        研究员鉴定为宁夏枸杞（L. barbarum L.）的成熟果实；甲                        100
                                                                  0
        醇、乙腈为色谱纯，磷酸二氢钾等其余试剂均为分析纯，                                          5      10      15      20
        水为纯化水。                                                                      t，min
                                                                                  C.空白溶剂
        2 方法与结果
                                                                          图1   高效液相色谱图
        2.1  甜菜碱含量测定方法的建立
                                                                      Tab 1  HPLC chromatograms
        2.1.1 对照品溶液制备
            精密称取甜菜碱对照品适量，置于 15 mL 量瓶中，                     2.1.5 检测限和定量限考察
        加入甲醇溶解、稀释并定容，制成质量浓度为 5.087 6                           精密量取“2.1.1”项下对照品贮备液适量，用甲醇逐
        mg/mL 的对照品贮备液。精密量取上述对照品贮备液                         级稀释，分别以信噪比为 3 ∶ 1、10 ∶ 1 计算检测限、定量
        1 mL，置于5 mL量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，制成                      限。结果，甜菜碱的检测限为 0.410 μg/mL，定量限为
        质量浓度为1 017.5 μg/mL的对照品溶液。                          2.051 μg/mL。
        2.1.2 供试品溶液制备                                      2.1.6 精密度试验
            取枸杞子样品，于50 ℃烘干后，冷冻，粉碎，过二号                          精密量取“2.1.1”项下质量浓度为 1 017.5 μg/mL 的
        筛，精密称取粉末 1.0 g，按一定方法提取后，用 0.45 μm                  对照品溶液适量，按“2.1.3”项下色谱条件连续进样测定
        滤膜滤过，取续滤液作为供试品溶液。                                  6 次，记录峰面积。结果，甜菜碱峰面积的 RSD 为 0.5％
        2.1.3 色谱条件                                         （n＝6），表明仪器精密度良好。
            色谱柱：Waters Spherisorb NH2 （250 mm×4.6 mm，5     2.1.7 重复性试验
        μm）；流 动 相 ：乙 腈 -0.01 mol/L 磷 酸 二 氢 钾 水 溶 液             精密称取枸杞子样品（批号：NKY01），共 6 份，按
       （75 ∶ 25，V/V）；流速：0.7 mL/min；检测波长：195 nm；柱          “2.1.2”项下方法制备供试品溶液，再按“2.1.3”项下色谱
        温：30 ℃；进样量：10 μL。取对照品溶液、供试品溶液                      条件进样测定，记录峰面积，按外标法计算甜菜碱的含
       （批号：NKY01）和空白溶剂（甲醇）各适量，进样测定，记                       量。结果，甜菜碱含量的RSD为1.0％（n＝6），表明该方
        录色谱图，详见图1。                                         法重复性良好。
        2.1.4 标准曲线绘制                                       2.1.8 稳定性试验
            精密量取“2.1.1”项下对照品贮备液 0.002、0.01、                    精密量取“2.1.2”项下供试品溶液（批号：NKY01）适
        0.1、0.5、1.0、1.5、2.0 mL，分别置于 5 mL 量瓶中，加入甲           量，分别于室温下放置 0、4、8、12、16、20、24 h 时按
        醇稀释至刻度，得系列工作溶液。按“2.1.3”项下色谱条                      “2.1.3”项下色谱条件进样测定，记录峰面积。结果，甜
        件进样测定，记录峰面积。以甜菜碱的质量浓度（x，                           菜碱峰面积的 RSD 为 1.2％（n＝7），表明供试品溶液在
        μg/mL）为横坐标、峰面积（y）为纵坐标进行线性回归，得                      室温下放置24 h内稳定性良好。


        中国药房    2020年第31卷第14期                                            China Pharmacy 2020 Vol. 31 No. 14  ·1701  ·
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