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丙肾上腺素原料药（上海阿拉丁生化科技股份有限公                             液（A）- 0.1％甲酸水溶液（B），梯度洗脱（0～0.5 min，
        司，批号：L1708046，纯度：≥99％）；水合氯醛（批号：                     10％A；0.5～3.0 min，19.0％A；3.0～3.5 min，90.0％A；
        20150110）、葡萄糖（批号：20170923）均购自天津科密欧                  3.5～4.0 min，10％A）；柱温为30 ℃；流速为0.3 mL/min；
        化学试剂有限公司；无机试剂均为分析纯，甲醇为色谱                            进样量为5 µL。
        纯，水为纯净水。                                            2.3.2  质谱条件     电喷雾电离源（ESI）；毛细管电压为
        1.3 动物                                              3 kV；离子源温度为 150 ℃；去溶剂气温度为 400 ℃；去
            SPF 级健康 SD 大鼠，雄性，体质量为（250±20）g，                 溶剂气为 N2，流速为 800 L/h；反吹气为 N2，流速为 50
        由长沙市天勤生物技术有限公司提供，动物生产许可证                            L/h；碰撞气为 Ar，流速为 0.16 mL/min。质谱数据采集
        号为 SCXK（湘）2014-0011。大鼠饲养于温度（23±                     及处理软件为 MassLynx V4.1 工作站；扫描方式为多反
        2）℃、相对湿度（60±10）％的环境中，饲养管理均严格                        应离子监测模式（MRM）。各成分离子对信息见1。
        按照实验动物的要求及规则，实验前适应性饲养1周。                                         表1   各成分离子对信息
        2 方法与结果                                                Tab 1 Ion pair information of each component
        2.1 溶液的制备                                           成分             ESI 母离子，质荷比（m/z） 子离子，m/z 锥孔电压，V 碰撞电压，V
        2.1.1  单一对照品溶液的制备            精密称取荭草素、异荭             荭草素            +     449.20   329.20  35    25
        草素、牡荆素、原儿茶酸、山柰素-3-O-β-D-葡萄糖苷、槲                      异荭草素           +     449.20   299.10  35    25
                                                            牡荆素            +     433.20   313.00  35    25
        皮苷对照品适量，分别置于 10 mL 量瓶中，加甲醇溶解                        原儿茶酸           -     153.00   109.10  35    15
        并定容，制成上述 6 种成分质量浓度分别为 1.090、                        山柰素-3-O-β-D-葡萄糖苷  +  449.05   287.20  25    10
        1.026、1.048、1.018、0.839、1.034 mg/mL的单一对照品溶          槲皮苷            +     449.10   303.10  20    10
                                                            葛根素（内标）        +     417.20   267.10  40    25
        液，于－20 ℃保存，备用。
        2.1.2  内标溶液的制备         精密称取葛根素对照品适量，                2.4  方法学考察
                                                            2.4.1  专属性    取空白肠循环液、混合对照品溶液（取
        置于 10 mL 量瓶中，用甲醇溶解并定容，制成葛根素储
        备液。取该储备液适量，用甲醇稀释制成质量浓度为                            “2.1.1”项下各单一对照品溶液适量混合）、内标溶液和
        10.40 µg/mL的内标溶液，于－20 ℃保存，备用。                       荭草提取物肠循环液（10.0 mg/mL荭草提取物溶液肠循
        2.1.3 Krebs-Ringer’s（K-R）营养液的制备        称取 NaCl      环1 h）适量，按“2.2”项下方法处理后，再按“2.3”项下色
        7.80 g、KCl 0.35 g、NaHCO3 1.37 g、NaH2PO4 0.32 g、Mg-  谱与质谱条件进样分析，记录色谱图。结果，荭草素、异
        Cl2 0.02 g、CaCl2 0.37 g、葡萄糖1.40 g，除CaCl2和葡萄糖        荭草素、牡荆素、原儿茶酸、山柰素-3-O-β-D-葡萄糖苷、
        外的其余试剂先用少量水溶解，然后单独溶解 CaCl2后                         槲皮苷和葛根素之间的分离度良好，空白肠循环液对各
        逐滴加入，葡萄糖临用时加入，全部试剂溶解后用水定                            成分测定无干扰，详见图1。
        容至1 L，备用。                                           2.4.2  线性关系及定量限考察            取荭草素、异荭草素、
        2.1.4  荭草提取物溶液的制备            取荭草药材适量，按本             牡荆素、原儿茶酸、山柰素-3-O-β-D-葡萄糖苷、槲皮苷单
                           [3]
        课题组前期研究方法 制备其提取物（得率为 5.02％）。                        一对照品溶液适量，在37 ℃条件下以N2吹干，用K-R营
        分别取荭草提取物适量，加入 K-R 营养液超声（功率：                         养液复溶后逐级稀释制成荭草素质量浓度为3.15、6.30、
        300 W，频率：20 kHz，下同）溶解，滤过，分别制成质量浓                    12.60、25.20、50.40 µg/mL，异荭草素质量浓度为 3.21、
        度为5.0、10.0、20.0 mg/mL的荭草提取物溶液。                      6.41、12.83、25.65、51.31 µg/mL，牡 荆 素 质 量 浓 度 为
        2.1.5  空白肠循环液的制备           取空白K-R营养液，于大             3.27、6.55、13.11、26.21、52.43 µg/mL，原儿茶酸质量浓度
        鼠小肠段肠道中以 1.0 mL/min 的流速循环灌流 2 h，制                   为 3.18、6.36、12.73、25.45、50.94 µg/mL，山柰素-3-O-β-
        成空白肠循环液，现用现制。                                       D-葡萄糖苷质量浓度为 1.31、2.62、5.24、10.48、20.97
        2.2 样品预处理                                           µg/mL，槲 皮 苷 质 量 浓 度 为 8.07、16.16、32.31、64.62、
            取肠循环液样品 300 µL，置于 1.5 mL 离心管中，加                 129.25 µg/mL的系列溶液，然后按“2.2”项下方法预处理
        入内标溶液 13 µL、1％甲酸溶液 100 µL，涡旋混合 5 s，                 后，再按“2.3”项下色谱与质谱条件进样分析。以待测成
        再用水饱和正丁醇800 µL萃取1次，涡旋混合1 min，超                      分峰面积与内标峰面积之比为纵坐标（y）、待测成分质
        声 10 min；以 12 000 r/min 离心 10 min，取上清液，于            量浓度为横坐标（x，mg/mL）进行回归分析。另外，以信
        37 ℃条件下 N2吹干，用 50％甲醇 300 µL 超声 10 min 复             噪比为 10 ∶ 1 计算各待测成分的定量下限。荭草中 6 种
        溶，再以13 000 r/min离心10 min，取上清液进样分析。                  活性成分的回归方程、线性范围及定量下限见表2。
        2.3 色谱与质谱条件                                         2.4.3  准确度和精密度试验           按“2.1.1”项下方法分别
            采用超高效液相色谱-串联质谱法测定。                              配制 6 种活性成分的低、中、高质量浓度（荭草素 3.15、
        2.3.1  色谱条件      色谱柱为 Waters BEH C18 （50 mm ×       12.60、25.20 µg/mL，异荭草素 3.21、12.83、25.65 µg/mL，
                                                            牡荆素 3.27、13.11、26.21 µg/mL，原儿茶酸 3.18、12.73、
        2.1 mm，1.7 µm），保护柱为 Waters Van Guard BEH C18
        （5.0 mm×2.1 mm，1.7 µm）；流动相为 0.1％甲酸乙腈溶               25.45 µg/mL，山 柰 素 -3-O-β-D- 葡 萄 糖 苷 1.31、5.24、


        ·1564  ·  China Pharmacy 2020 Vol. 31 No. 13                                中国药房    2020年第31卷第13期
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