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2.2 1 H-NMR分析条件 计为1种）。白芷 H-NMR图谱大致可以分为3个区域：
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以 CD3OD 为频率内锁，H-NMR 测定条件为：观察 高场区（3.1～0.0 ppm）主要包括有氧化前胡素、欧前胡
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频率 400.12 MHz，测定温度（T）25 ℃，谱宽（sw）6 410.3 素、异欧前胡素、Cnidilin、丁二酸、谷氨酰胺、谷氨酸、醋
Hz，采样时间（at）2.556 s，脉冲延迟时间（dl）2.0 s，采样 酸盐、丙氨酸、亮氨酸、缬氨酸以及饱和脂肪酸和不饱和
次数（nt）64，脉冲宽度（pw）6 µs，采用标准的预饱和脉冲 脂肪酸类成分等；中场区（5.5～3.1 ppm）主要有蔗糖、α-
序列（Presat）压制残留的水峰信号。 葡萄糖、β-葡萄糖等；低场区（9.5～5.5 ppm）主要有异茴
2.3 数据处理及统计分析 芹内酯、东莨菪素、补骨脂素等。白芷药材代表性的
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将测得的 H-NMR 自由感应衰减（FID）信号导入 1 H-NMR图谱见图1。
MestReNova 6.1.0 软件进行傅里叶转换，并手动调整相 400
300
位和基线，以TSP峰（0.0 ppm）为基准校正所有样品的化 200 信号强度
100
学位移。对0.50～8.50 ppm范围内的图谱以0.04 ppm为 0
8.5 8.3 8.1 7.9 7.7 7.5 7.3 7.1 6.9 6.7 6.5 6.3
单位进行分段积分（binning），并以总峰面积进行归一化 化学位移，ppm
处理，然后以 ASCII 格式输出数据，即得到各化学位移 20 000
15 000
段与之相对应的信号峰面积值，并扣除甲醇溶剂的信号 10 000 信号强度
（3.26～3.34 ppm）及残留水峰信号（4.66～5.02 ppm）。 5 000
0
将最终获得的数据矩阵，导入 SIMCA 11.5 软件进行 5.4 5.2 4.5 4.3 4.1 3.9 3.7 3.5 3.3 3.1
PCA 分析。此外，采用 GraphPad Prism 5.0 软件进行统 化学位移，ppm
计学分析，两组样品比较采用配对 t 检验，P＜0.05 表示 1 500
差异有统计学意义。 1 000 信号强度
500
2.4 方法学考察
0
2.4.1 仪器精密度考察 取同一批未熏硫白芷供试品 3.0 2.8 2.6 2.4 2.2 2.0 1.8 1.6 1.4 1.2 1.0 0.8 0
化学位移，ppm
溶液（批号：BZ-1），分别连续进行 H-NMR 测定 5 次，按
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注：1.氧化前胡素；2.欧前胡素；3.异欧前胡素；4.Cnidilin；5.珊瑚
“2.3”项下数据处理方法处理图谱，得到 5 组积分值数 菜素；6.佛手柑内酯；7.异茴芹内酯；8.东莨菪素；9.补骨脂素；10.蔗
据，运用Excel 2007软件计算5组数据之间的相关系数， 糖；11.α-葡萄糖；12.β-葡萄糖；13.胆碱；14.丁二酸；15.谷氨酰胺；16.
结果分别为 0.995、0.993、0.997、0.995 和 0.998，均大于 谷氨酸；17.醋酸盐；18.丙氨酸；19.亮氨酸；20.缬氨酸；21.饱和脂肪
0.99，表明仪器精密度良好。 酸类成分；22.不饱和脂肪酸类成分
Note：1. oxypeucedanin；2. imperatorin；3. isoimperatorin；4. cni-
2.4.2 方法重复性考察 取同一批未熏硫白芷药材（批
dilin；5. phellopterin；6. bergapten；7. isopimpinellin；8. scopoletin；9.
号：BZ-1）粉末 5 份，按“2.1”项下方法制得供试品溶液，
psoralen；10. sucrose；11. α-glucose；12. β-glucose；13. choline；14.
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再分别进行 H-NMR 测定和数据处理，得到 5 组积分值 succinic acid；15. glutamine；16. glutamic acid；17. acetate；18. ala-
数据，运用 Excel 2007 软件计算 5 组数据之间的相关系 nine；19. leucine；20. valine；21. saturated fatty acids；22.unsaturated
数，分别为 0.994、0.995、0.996、0.998、0.995，均在 0.99 以 fatty acids
图1 白芷药材的 H-NMR图谱
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上，表明该方法具有较好的重复性。
Fig 1 1 H NMR spectra of A. dahuricae
2.5 白芷整体化学成分的 H-NMR检测及鉴定
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取一批未熏硫白芷药材（批号：BZ-1）粉末适量，按 2.6 熏硫和未熏硫白芷的 H-NMR图谱比较
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“2.1”项下方法制备供试品溶液后，在“2.2”项条件下进 分别取同一批熏硫（批号：XLBZ-1）和未熏硫（批
行 H-NMR测定。采用“加标准品定性”试验进行9种次 号：BZ-1）白芷药材粉末各适量，按“2.1”项下方法制备
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级代谢产物（氧化前胡素、欧前胡素、异欧前胡素、Cnidi- 供试品溶液后，在“2.2”项条件下分别进行 H-NMR 测
lin、珊瑚菜素、佛手柑内酯、异茴芹内酯、东莨菪素、补骨 定，得到熏硫和未熏硫白芷的 H-NMR图谱。通过直观
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脂素）的 H-NMR 信号归属，即在供试品溶液中分别加 分析，发现熏硫和未熏硫白芷的整体化学成分轮廓相
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入各对照品2 mg，超声2 min使溶解，再进行 H-NMR测 似，但二者有些成分的信号强度有较大的差异，如未熏
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定。通过MestReNova 6.1.0软件比对加入对照品前后的 硫白芷的蔗糖、α-葡萄糖、β-葡萄糖及一些未鉴定的糖类
1 H-NMR图谱差异，根据峰的变化确定信号归属。此外， （3.3～4.1 ppm）的信号强度明显高于熏硫白芷，而丙氨
通过比对 SDBS 光谱数据库（http：//sdbs.db.aist.go.jp）及 酸的信号强度弱于熏硫白芷。此外，通过放大 H-NMR
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参考相关文献 [11，14] 进行氨基酸、糖类等初级代谢产物的 图谱的低场区（6.2～8.5 ppm），发现白芷熏硫后主要的
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1 H-NMR信号归属。结果，采用 H-NMR分析技术，从白 香豆素类成分（如氧化前胡素、欧前胡素）的信号强度也
芷药材中共鉴定出19种化学成分（α-葡萄糖和β-葡萄糖 有所不同，表明两种白芷的化学成分含量有一定的差
中国药房 2020年第31卷第13期 China Pharmacy 2020 Vol. 31 No. 13 ·1559 ·
