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谱条件进样分析，记录峰面积（A1 ）；另取上述活性成分                         性成分药量]。A值越大，则表明该活性成分在肠道中吸
        的低、中、高质量浓度的质控样品溶液，于 37 ℃ 条件下                        收越多。
        以N2吹干，残渣用初始流动相300 μL复溶，按“2.2”项下                     2.7  荭草中 6 种活性成分在正常和心肌缺血模型大鼠
        方法预处理后，再按“2.3”项下色谱与质谱条件进样分                          体内的肠吸收特征研究
        析，记录峰面积（A2 ）。基质效应＝A1/A2×100％。每个质                    2.7.1  不同质量浓度荭草活性成分在正常和模型大鼠
        量 浓 度 样 品 均 平 行 操 作 5 次 。 结 果 ，基 质 效 应 为            体内的肠吸收差异           分别取正常组和模型组大鼠各 15
        87.49％～108.54％，RSD 为 1.26％～10.12％（n＝5），符            只，选取其十二指肠段（幽门往下 1.0 cm 处起至往下 10
        合生物样品定量分析要求。                                        cm处），按“2.6”项下方法“在肠段前、后两端……排空肠
        2.4.5  稳定性试验      取荭草提取物肠循环液（10 mg/mL               道内的水分”处理后，分别以不同质量浓度（5.0、10.0、
        荭草提取物溶液肠循环1 h），分别于室温下放置0、2、4、                       20.0 mg/mL）的荭草提取物溶液进行肠循环灌流实验
        6、8、12 h时，按“2.2”项下方法预处理后，再按“2.3”项下                 （每个质量浓度分别用5只正常或模型大鼠进行实验）。
        色谱与质谱条件进样分析，记录峰面积。结果，荭草素                            于不同时间点取样，按“2.2”项下方法预处理后，再按
        等6种活性成分峰面积的RSD均小于10％（n＝6），表明                       “2.3”项下色谱与质谱条件进样分析，根据公式计算 A，
        含药肠循环溶液样品在室温下放置12 h内稳定性良好。                          考察不同质量浓度荭草各活性成分在正常和模型大鼠
        2.5 分组与建模                                           体内肠吸收的差异。采用SPSS 18.0统计软件对数据进
            取 SD 大鼠 80 只，分为正常组和模型组，每组 40                    行分析，数据以x±s表示，组间比较采用t检验，P＜0.05
        只。模型组大鼠皮下注射盐酸异丙肾上腺素（50 mg/kg，                       表示差异有统计学意义（以下各实验数据统计学处理方
        剂量参考相关文献        [10-12] 设置），每日1次，连续给药2 d，复          法同）。结果，除模型组大鼠十二指肠中荭草素的吸收
        制心肌缺血模型；正常组大鼠同法注射等量生理盐水。                            在不同质量浓度下无显著性差异外，其余5种成分在正
        2.6  荭草活性成分在大鼠体内的肠循环灌流实验                            常和模型大鼠十二指肠中的吸收均随其质量浓度的升
            大鼠体内肠循环灌流实验操作步骤参考相关文
                                                            高而增加，且模型组大鼠十二指肠对中质量浓度和/或高
          [9]
        献 方法。造模成功24 h后，取正常组和模型组大鼠（已                         质量浓度活性成分（槲皮苷除外）的吸收显著低于正常
        禁食 12 h），腹腔注射水合氯醛（0.04 mL/kg）麻醉，然后
                                                            组（P＜0.05），详见图2。
        将大鼠固定于 37 ℃恒温手术台上，沿腹部中线打开腹
                                                            2.7.2  荭草活性成分在正常和模型大鼠不同肠段的吸
        腔，开口约3～4 cm。先结扎总胆管，然后找到目标肠段
                                                            收差异     分别取正常组和模型组大鼠各15只，分为十二
        （约10 cm），在肠段前、后两端避开毛细血管分别剪一个
                                                            指肠段组（即“2.7.1”项下灌流10.0 mg/mL荭草提取物溶
        小口，插入直径约 0.3 cm 的硅胶软管，并用手术线固定
                                                            液的正常组和模型组大鼠的十二指肠段，因此此肠段不
        扎紧，连接恒流泵，使其与恒流泵形成一个回路；再将恒
                                                            再另取大鼠实验）、空肠段组（幽门往下 15 cm 起至往下
        流泵流速调至 1.0 mL/min，并泵入 37 ℃ 的生理盐水冲
                                                            10 cm处）、回肠段组（盲肠上行 20 cm处起至往下10 cm
        洗肠道，直至无内容物洗出后，排空肠道内的水分。取
                                                            处）、结肠段组（盲肠末端起至往下10 cm处），每组5只，
        37 ℃恒温的荭草提取物溶液50 mL至量筒中，并将硅胶
                                                            按“2.6”项下方法“在肠段前、后两端……然后排空肠道
        软管插入量筒中，以2.0 mL/min的流速使药物溶液在目
                                                            内的水分”处理后，选择 10.0 mg/mL 的荭草提取物溶液
        标肠段内循环平衡 10 min 后，将恒流泵的流速调节为
                                                            作为肠循环灌流液，在上述相应肠段处进行循环灌流实
        1.0 mL/min，并立刻读出此时量筒内药物溶液体积，然后
                                                            验。于不同时间点取样，按“2.2”项下方法预处理，再按
        从量筒中取样1.0 mL，作为零时间点测定荭草活性成分
                                                           “2.3”项下色谱与质谱条件进样分析，并根据公式计算
        浓度的样品；取完样品后向量筒中补加 37 ℃的 K-R 营
                                                            A，考察荭草活性成分在正常和模型大鼠不同肠段的吸
        养液 1.0 mL，继续循环，于不同时间点（10、30、60、90、
                                                            收差异。结果，在正常组大鼠中，荭草素主要在空肠、回
        120 min）按上述方法取样，同时记录各时间点补液后量
                                                            肠、结肠吸收较多，异荭草素主要在回肠吸收较多，牡荆
        筒内荭草提取物溶液体积。末次取样后，排净肠道内和
                                                            素 、原 儿 茶 酸 主 要 在 空 肠 、回 肠 吸 收 较 多 ，山 柰
        管路内液体并记录该部分液体体积作为死体积，肠道/管
                                                            素-3-O-β-D-葡萄糖苷主要在十二指肠、空肠、结肠吸收
        路死体积与各时间点量筒内荭草提取物溶液体积之和
                                                            较多，槲皮苷主要在结肠吸收较多；在模型组大鼠中，荭
        即为该时间点荭草提取物溶液的体积。然后计算荭草
                                                            草素主要在空肠、结肠吸收较多，异荭草素在4种肠段的
        各活性成分肠剩余药量（Ptn，µg）和灌流 2 h 的累积吸收
                                                            吸收差别不大，牡荆素主要在回肠吸收较多，原儿茶酸、
                                                n－1
        转化率（A，％），公式分别为 Ptn＝ctn×Vtn+1.0× ∑ cti，A＝
                                                i＝1         山柰素-3-O-β-D-葡萄糖苷主要在空肠吸收较多，槲皮苷
        （Pt0－Ptn ）/Pt0×100％[式中，ctn为tn时间点荭草各活性成分             主要在十二指肠、回肠吸收较多。在同一肠段中，与正
        质量浓度（µg/mL，根据按前述超高效液相色谱-串联质                         常组比较，模型组6种成分在各肠段的吸收均减少：十二
                                                            指肠对荭草素、牡荆素、原儿茶酸和山柰素-3-O-β-D-葡
        谱法测定）；Vtn为 tn时间点荭草提取物溶液体积（mL）；tn
        为荭草提取物溶液灌注时间（min），Pt 0 为零时间点各活                      萄糖苷的吸收，空肠对牡荆素的吸收，回肠对荭草素、异
        ·1566  ·  China Pharmacy 2020 Vol. 31 No. 13                                中国药房    2020年第31卷第13期
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