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·药学研究·

基于 Calpain-ERK 信号通路研究 Calpeptin 对雌激素诱导人乳腺

上皮细胞MCF-10A转化及干性标志物表达的影响 Δ

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张 艳 1，2＊ ，王旭东 ，金 爱 ，何 艳 ，詹云惠 ，沈敬堃 ，董宇华 ，宛 蕾 （1.贵州医科大学基础医学院生理学
教研室，贵阳 550025；2.贵州医科大学基础医学院药理学教研室，贵阳 550025；3.贵阳市第一人民医院超声
科，贵阳 550002）
中图分类号 R737.9；R34 文献标志码 A 文章编号 1001-0408（2020）13-1549-08
DOI 10.6039/j.issn.1001-0408.2020.13.03
摘 要 目的：研究钙激活中性蛋白酶（Calpain）抑制剂Calpeptin对雌二醇（E2 ）诱导人乳腺上皮细胞MCF-10A转化及干性标志物
表达的影响，并探讨其作用机制。方法：以人乳腺上皮细胞MCF-10A为研究对象，采用E2诱导制备转化细胞模型。将细胞分为对
照组[0.1％二甲基亚砜（DMSO）]、E2转化组（50 nmol/L）、E2转化+Calpeptin组（50 nmol/L E2+1 μmol/L Calpeptin），以相应含药培养
基连续培养15代。然后采用MTT法检测细胞的增殖率（24、48 h），采用平板克隆试验检测细胞的克隆形成率，采用悬浮成球试验
检测细胞的成球数；采用实时荧光定量-聚合酶链式反应法检测细胞中干性标志物（CD44、Nanog、OCT4）和细胞外信号调节激酶
（ERK）mRNA 表达水平，并采用 Western blotting 法检测细胞中 CD44、Nanog、OCT4、ERK 和磷酸化 ERK（p-ERK）蛋白表达水平。
另取E2转化细胞分为对照组（0.1％DMSO）和U0126（ERK抑制剂）组（10 μmol/L），按上述方法测定细胞的克隆形成率、成球数以
及细胞中 CD44、Nanog、OCT4、p-ERK 蛋白表达水平，以验证 ERK 表达抑制与转化细胞生物学行为及干性标志物表达之间的关
系。结果：与对照组比较，E2转化组细胞的增殖率（24、48 h）、克隆形成率均显著升高（P＜0.01），细胞成球数均显著增加（P＜
0.01），细胞中 CD44、Nanog、OCT4、p-ERK mRNA 表达水平及 CD44、Nanog、OCT4、p-ERK 蛋白表达水平均显著升高（P＜0.01）。
与 E2转化组比较，E2转化+Calpeptin 组细胞的增殖率（24、48 h）、克隆形成率均显著降低（P＜0.01），细胞成球数显著减少（P＜
0.05），细胞中CD44、Nanog、OCT4、ERK mRNA表达水平及CD44、Nanog、OCT4、p-ERK蛋白表达水平均显著降低（P＜0.05或P＜
0.01）。加入ERK抑制剂U0126后，E2转化细胞的克隆形成率、成球数以及细胞中p-ERK、CD44、Nanog、OCT4蛋白表达水平均显
著增加或升高（P＜0.05或P＜0.01）。结论：Calpeptin可抑制E2诱导的人乳腺上皮细胞MCF-10A转化及干性标志物表达，其机制
可能与抑制Calpain-ERK信号通路的激活有关。
关键词 Calpeptin；雌二醇；人乳腺上皮细胞MCF-10A；细胞转化；干性标志物；细胞外信号调节激酶；机制

Study on the Effects of Calpeptin on Estrogen-induced Transformation and Stemness Markers Expression
of Mammary Epithelial Cells MCF-10A Based on Calpain-ERK Signaling Pathway
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ZHANG Yan ，WANG Xudong ，JIN Ai ，HE Yan ，ZHAN Yunhui ，SHEN Jingkun ，DONG Yuhua ，WAN Lei 2
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（1. Dept. of Physiology，School of Basic Medical Sciences，Guizhou Medical University，Guiyang 550025，
China；2. Dept. of Pharmacology，School of Basic Medical Sciences，Guizhou Medical University，Guiyang
550025，China；3. Dept. of Ultrasonography，Guiyang First People’s Hospital，Guiyang 550002，China）

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＊硕士研究生。研究方向：抗肿瘤药理学。E-mail：2020439619 [17] 国务院.中共中央国务院关于促进中医药传承创新发展
@qq.com 的意见[Z]. 2019-10-20.
# 通信作者：教授，硕士生导师。研究方向：抗肿瘤药理学。 （收稿日期：2020-02-20 修回日期：2020-05-18）
E-mail：1325164635@qq.com （编辑：刘明伟）

中国药房 2020年第31卷第13期 China Pharmacy 2020 Vol. 31 No. 13 ·1549 ·