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3.6 Calpeptin 对 E2转化细胞中 CD44、Nanog、OCT4、 ERK 42 kDa CD44 80 kDa
ERK和p-ERK蛋白表达的影响
与对照组比较，E2 转化组细胞中 CD44、Nanog、 Nanog 37 kDa
p-ERK 42 kDa
OCT4和p-ERK蛋白的表达水平均显著升高（P＜0.01）；
OCT4 39 kDa
与 E2 转化组比较，E2 转化+Calpeptin 组细胞中 CD44、
Nanog、OCT4、p-ERK 蛋白的表达水平均显著降低（P＜ α-tubulin 55 kDa α-tubulin 36 kDa
0.05或P＜0.01）；3组细胞中ERK蛋白表达水平间比较， 对照组 U0126组 对照组 U0126组
差异均无统计学意义（P＞0.05）。各组细胞中 CD44、 A. ERK、p-ERK蛋白 B.干性相关蛋白
Nanog、OCT4、ERK、p-ERK蛋白表达电泳图见图4，蛋白 图 5 ERK 抑制剂 U0126 作用下 E2 转化细胞中 ERK、
表达水平测定结果见表6。 p-ERK蛋白和干性相关蛋白表达的电泳图
Fig 5 Electrophoretograms of ERK，p-ERK protein
CD44 80 kDa ERK 42 kDa
and stemness-related protein expression in E2-
Nanog 37 kDa
p-ERK 42 kDa
OCT4 39 kDa transformed cells after treated with ERK inhi-
GAPDH 36 kDa GAPDH 36 kDa bitor U0126
对照组 E2转化组 对照组 E2转化组 表 7 ERK 抑制剂 U0126 作用下 E2转化细胞中 ERK、
E2转化+Calpeptin组 E2转化+Calpeptin组 p-ERK 蛋白和干性相关蛋白表达水平测定结果

A.干性相关蛋白 B. ERK、p-ERK蛋白
（x±±s，n＝3）
图 4 各组细胞中 CD44、Nanog、OCT4、ERK、p-ERK Tab 7 Protein expression levels of ERK，p-ERK and
蛋白表达电泳图 stemness-related protein in E2-transformed
Fig 4 Electrophoretograms of protein expression of cells after treated with ERK inhibitor U0126
CD44，Nanog，OCT4，ERK and p-ERK of （x±±s，n＝3）
cells in each group
组别 ERK/α-tubulin p-ERK/α-tubulin CD44/α-tubulin Nanog/α-tubulin OCT4/α-tubulin
表 6 各组细胞中 CD44、Nanog、OCT4、ERK、p-ERK 对照组 2.91±0.10 2.43±0.13 0.48±0.06 0.69±0.08 0.32±0.02
U0126组 2.67±0.16 1.57±0.18 ＊ 0.20±0.02 ＊ 0.38±0.05 ＊ 0.18±0.03 ＊
蛋白表达水平测定结果（x±±s，n＝3）
＊
注：与对照组比较，P＜0.05
Tab 6 Protein expression levels of CD44，Nanog， Note：vs. control group，P＜0.05
＊
OCT4，ERK and p-ERK of cells in each group
4 讨论
（x±±s，n＝3）
乳腺上皮细胞发生转化是乳腺癌发生的必要过
组别 CD44/GAPDH Nanog/GAPDH OCT4/GAPDH ERK/GAPDH p-ERK/GAPDH
对照组 0.78±0.05 0.27±0.03 0.23±0.02 0.52±0.08 0.41±0.04 程。肿瘤干细胞是细胞内具有自我更新、多潜能分化和
E2转化组 1.39±0.11 ＊＊ 0.51±0.04 ＊＊ 0.45±0.03 ＊＊ 0.50±0.08 0.77±0.07 ＊＊ 肿瘤特殊生物学行为的一类细胞亚群，与癌症的发生发
E2转化+Calpeptin组 0.90±0.09 # 0.32±0.01 # 0.26±0.05 # 0.46±0.11 0.30±0.03 ##
[14]
展密切相关 。近期有研究显示，E2可以促进乳腺上皮
＊＊
##
注：与对照组比较， P＜0.01；与 E2转化组比较，P＜0.05，P＜ [6]
#
细 胞 MCF-10A 获 得 干 细 胞 特 性 。 CD44、Nanog 和
0.01
OCT4均是公认的癌症干细胞标志物。据报道，CD44可
#
Note：vs. control group， P＜0.01；vs. E2-transformed group，P＜
＊＊
通过与细胞外基质成分、生长因子和细胞因子相互作用
0.05，P＜0.01
##
[15]
3.7 ERK 表达被抑制后对 E2转化细胞的克隆形成能 来促进肿瘤的发生 。而Nanog和OCT4在多种癌症干
力、自我更新能力以及干性相关蛋白表达的影响 细胞中都呈异常高表达状态，其高表达后能够促进细胞
与对照组比较，U0126组中p-ERK蛋白表达水平显 的重新编程，从而调控肿瘤细胞增殖、自我更新和多能
著降低（P＜0.05），表明ERK蛋白表达被抑制；细胞的克 性分化等干细胞特征 [16-17] 。本研究采用E2连续培养乳腺
隆形成率显著降低（P＜0.01），成球数显著减少（P＜ 上皮细胞 MCF-10A 15 代，发现 E2处理后细胞出现了一
0.05），干性相关蛋白（CD44、Nanog、OCT4）的表达水平 定的间质细胞样特征，细胞活力、克隆形成能力以及自
也显著降低（P＜0.05）。这提示抑制 ERK 表达后，E2转 我更新能力均显著增强，这表明细胞在E2作用下发生了
化细胞的克隆形成能力、自我更新能力以及干性相关蛋 转化。同时，E2转化细胞中干性标志物 CD44、Nanog、
白的表达均减弱。ERK 抑制剂 U0126 作用下各组细胞 OCT4 mRNA 及其蛋白的表达均显著上调，这提示 E2不
中ERK、p-ERK蛋白和干性相关蛋白表达测定结果见图 仅可诱导细胞转化，还可增强转化细胞的干性特征。
5、表 7，细胞克隆形成和细胞成球情况测定结果见图 6、 Calpain 的生物学活性与肿瘤的发生有关，其可通
表8。 过修饰性剪切多种肿瘤抑制蛋白，促进上皮细胞的转

·1554 · China Pharmacy 2020 Vol. 31 No. 13 中国药房 2020年第31卷第13期