Page 70 - 202012
P. 70

溶解并定容，摇匀，即得质量浓度分别为0.324 0 mg/mL                     1.5％（n＝6），表明方法的精密度、稳定性（室温，36 h
        的芦丁对照品溶液和 0.204 0 mg/mL 的苦参碱对照品                     内）、重复性均良好。
                                                                                              [7]
        溶液。                                                 2.2.5  加样回收率试验        参照文献方法 进行相应方法
        2.1.2  供试品溶液       称取千里光药材粗粉约 2 g，精密                学考察。结果，绿原酸、金丝桃苷的平均加样回收率分
        称定，置于 50 mL 圆底烧瓶，加入提取溶剂后按一定的                        别为 101.25％、98.62％，RSD 均小于 1.5％（n＝6），表明
        工艺条件进行回流提取，提取液经 0.45 μm 微孔滤膜滤                       方法准确度良好。
        过，取续滤液，即得供试品溶液。                                     2.2.6  绿原酸和金丝桃苷的含量测定               取“2.1.2”项下
        2.2 绿原酸和金丝桃苷的含量测定                                   供试品溶液，按“2.2.1”项下色谱条件进样分析，各样品
            参照文献方法       [5，7] ，采用HPLC法测定绿原酸和金丝             平行操作 3 次，记录峰面积并代入“2.2.3”项下回归方程
        桃苷的含量。                                              分别计算绿原酸和金丝桃苷的含量。
        2.2.1  色谱条件      色谱柱：Diamonsil C18 （250 mm×4.6      2.3 总黄酮和总生物碱的含量测定
        mm，5 μm）；流动相：0.2％冰醋酸水溶液-甲醇（82 ∶ 18，                     参照文献方法      [5-8] ，采用紫外-可见分光光度法测定
        V/V）；柱温：35 ℃；流速：1.0 mg/mL；检测波长：327 nm；              总黄酮（以芦丁计）和总生物碱（以苦参碱计）的含量。
                                                                                             [5]
        进样量：5 μL。                                           2.3.1  线性关系考察        参照文献方法 ，取“2.1.1”项下
        2.2.2  系统适用性考察         取“2.1.2”“2.1.3”项下绿原酸         芦丁对照品溶液各适量，分别进行预处理，即加入5％亚
        和金丝桃苷混合对照品溶液和供试品溶液适量，以70％                           硝酸钠溶液 1 mL，摇匀后静置 6 min；再加入 10％硝酸
        甲醇为空白对照，按“2.2.1”项下色谱条件进样分析，记                        铝溶液1 mL，摇匀后静置6 min；然后加入5％氢氧化钠
                                                            溶液 10 mL，再用 70％乙醇稀释并定容至 25 mL，摇匀，
        录色谱图。结果显示，理论板数按绿原酸和金丝桃苷峰
                                                            静置 15 min，制成 5 个质量浓度梯度的系列线性工作溶
        计均不低于8 000，空白对照无干扰（图略），详见图1。
                                                            液（另设0 mg/mL的空白），在509 nm波长处分别检测其
           35
           30       1                                                            [6]
           25                2                              吸光度。参照文献方法 ，取“2.1.1”项下苦参碱对照品
           mAU  20
           15
           10                                               溶液各适量，以 70％乙醇稀释制成 5 个质量浓度梯度
            5
            0                                               的系列线性工作溶液（另设 0 mg/mL 的空白），在 208
                 2.5  5  7.5  10  12.5  15  17.5  20  22.5
                                                            nm 波长处分别检测其吸光度。分别以芦丁、苦参碱的
                                t，min
                      A.绿原酸和金丝桃苷混合对照品溶液                     质量浓度（x，mg/mL）为横坐标、相应吸光度（y）为纵
            5                                               坐标进行线性回归。结果，得芦丁的回归方程 y＝
            4       1
            3                2
           mAU  2 1                                         7.932 4x+0.279 9（r＝0.999 4）、苦参碱的回归方程 y＝
            0
           －1                                               29.684 87x+0.055 3（r＝0.999 2）。这表明芦丁、苦参碱
                 2.5  5  7.5  10  12.5  15  17.5  20  22.5  检测质量浓度的线性范围分别为 0.012 9～0.064 8、
                                 t，min
                              B.供试品溶液                       0.010 2～0.051 0 mg/mL。
            注：1.绿原酸；2.金丝桃苷                                  2.3.2  精密度、稳定性、重复性试验             参照文献方法      [5-7]
            Note：1. chlorogenic acid；2. hyperoside          进行相应方法学考察。结果，上述试验的 RSD 均小于
                       图1   高效液相色谱图                         1.5％（n＝6），表明方法的精密度、稳定性（室温，10 h
                   Fig 1  HPLC chromatograms
                                                            内）、重复性均良好。
        2.2.3  线性关系考察         参照文献方法        [5-8] ，精密吸取     2.3.3  加样回收率试验         参照文献方法      [5-7] 进行相应方
       “2.1.1”项下绿原酸和金丝桃苷混合对照品溶液适量，以                         法学考察。结果，芦丁、苦参碱的平均加样回收率分别
        70％甲醇稀释制成5个质量浓度梯度的系列线性工作溶                           为 101.13％、98.30％，RSD 均小于 1.5％（n＝6），表明方
        液（另设0 mg/mL的空白），按“2.2.1”项下色谱条件分别                    法准确度良好。
        进样分析，记录峰面积。以待测成分质量浓度（x，mg/mL）                       2.3.4  总黄酮和总生物碱的含量测定               取“2.1.2”项下
        为横坐标、峰面积（y）为纵坐标进行线性回归。结果，得                          供试品溶液，采用紫外-可见分光光度法测定（测定总黄
        绿原酸的回归方程y＝1 066.5x+0.786（r＝0.999 3），金丝              酮时需先按“2.3.1”项下方法预处理），各样品平行操作3
        桃苷的回归方程y＝3 495.6x－0.748（r＝0.999 1）。这表               次，记录吸光度并代入“2.3.1”项下回归方程分别计算总
        明绿原酸、金丝桃苷检测质量浓度的线性范围分别为                             黄酮和总生物碱的含量。
        0.026 2～0.262 0、0.013 1～0.130 8 mg/mL。              2.4 单因素试验筛选千里光提取工艺
        2.2.4  精密度、稳定性、重复性试验             参照文献方法 进               参考文献方法      [8-11] ，采用 80 ℃水浴回流提取的方法
                                                     [5]
        行相应方法学考察。结果，上述试验的 RSD 均小于                           提取千里光药材，以绿原酸、金丝桃苷、总黄酮和总生物


        ·1472  ·  China Pharmacy 2020 Vol. 31 No. 12                                中国药房    2020年第31卷第12期
   65   66   67   68   69   70   71   72   73   74   75