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membrane，homotype protein binding，immune response，ion channel activity，immune response（group A and B）；basolateral
plasma membrane，exodeoxyribonuclease activity，response to INF-γ （group B7 d and C7 d ）；extracellular domain，receptor
regulatory activity，phenolic compound metabolism process（group B14 d and C14 d ）. DEGs enriched in cytokine-cytokine receptor
interaction（group A and B）；CAMs，complement and coagulation cascades and Hedgehog signaling pathway（group B7 d and C7 d ）；
retrograde endocannabinoid signaling，neuroactive ligand-receptor interaction，PPAR signaling pathway，GABA ergic synapse
（group B14 d and C14 d ），etc. CONCLUSIONS：Protective effect of ligustrazine on acute SCI model rats may be associated with
inflammatory response，immune response/regulation，neuron ion channel，cytokine-cytokine receptor interaction，neuroactive
ligand-receptor interaction and regulation of GABA ergic synapse activity.
KEYWORDS Ligustrazine；Acute spinal cord injury；Transcriptome sequencing；Differentially expressed gene；Gene Ontology；
KEGG signaling pathway；Mechanism；Rats

脊髓损伤（Spinal cord injury，SCI）是一种因高能量 1.2 药品与试剂
损伤而导致的严重性致残性疾病。在全世界范围内，由 注射用盐酸川芎嗪（北京四环科宝制药有限公司，
于收集数据的方式以及结果推算的技术不同，不同地区 批号：18110345，规格：80 mg；临床用量：80～120 mg/次，
SCI 的发病率差别很大，从 236/100 万到 4 187/100 万不 每日1次）；氯化钠注射液（四川科伦药业股份有限公司，
等 。最近的一项二次研究显示，我国 SCI 每年的发病 批号：A18122701-1，规格：500 mL ∶ 4.5 g，作生理盐水
[1]
[2]
率约为37/100万 。SCI在中医上属于“体惰”“瘫证”“痿 用）；注射用青霉素（山东圣旺药业股份有限公司，批号：
躄”范畴，为督脉损伤所导致的其他经络、气血、脏腑功 20180301，规格：167 万单位）；Ambion Trizol 试剂盒（美
[3]
能障碍 。近年来，中医药治疗 SCI 的相关研究有所增 国 Life Technologies 公司，批号：15596018）；多聚甲醛
多。川芎嗪（即四甲基吡嗪）是从中药川芎中分离出的 （美国Sigma公司）；尼氏体染色液（北京索莱宝科技有限
一种生物碱，具有抗炎、抗氧化、抗凋亡、改善微循环等 公司）；苏木精-伊红（HE）染色液、磷酸盐缓冲液（PBS，
作用，临床上多用于治疗各种缺血再灌注损伤 [4-5] 。SCI
pH 7.0）均为本实验室自制；无水乙醇、二甲苯等其余试
的原发性损伤大多不可逆，继发性损伤则是紧接原发性
剂均为分析纯，水为蒸馏水。
损伤之后的由类似于“雪崩式”损伤激活的自身损伤过
1.3 动物
程，包括缺血、出血、脊髓休克、水电解质紊乱、自由基增
SPF 级健康 SD 大鼠 30 只，雄性，6～8 周龄，体质量
多、一氧化氮改变等，可引起持续性的细胞损害，甚至可
200～230 g，由湖南斯莱克景达实验动物有限公司提供，
引发神经细胞凋亡 [6-7] 。近年来，学者对SCI的研究逐渐
动物生产合格证号：SCXK（湘）2016-0002。所有动物均
转向多基因参与、复杂网络调控等分子水平发展。转录
单笼饲养，环境温度为20～28 ℃。
组测序是当前最有效的高通量技术，可快速检测和发现
细胞或器官在特定条件下所有基因、功能基因及其转录 2 方法
2.1 造模
的调控规律 。基于此，本研究在动物实验的基础上，借
[8]
大鼠适应性喂养1周后，随机分为假手术组（A组，6
助转录组测序技术分析川芎嗪干预急性SCI模型大鼠基
只）、模型组（B组，共12只；不同时间点各6只，分别记为
因表达的影响并寻找差异表达基因（DEGs），并对其进
行基因本体（GO）和 KEGG 信号通路富集分析，以期为 B7 d、B14 d组）和川芎嗪干预组（C组，共12只；不同时间点
进一步探索川芎嗪治疗SCI的分子机制提供参考。 各6只，分别记为C7 d、C14 d组）。禁食、不禁水8 h后，大鼠
1 材料 腹腔注射10％水合氯醛溶液（0.3 mg/kg）麻醉，以第9胸
椎（T9 ）为中心，咬除椎板，暴露长约5 mm的脊髓。A 组
1.1 仪器
2100型生物分析仪（美国Agilent公司）；Hiseq X-ten 大鼠止血缝合；B、C组大鼠利用打击仪参照改良Allen’s
型高通量转录组测序仪（美国Illumina公司）；CK31型正 法复制急性 SCI 模型：以棘突固定器钳夹固定胸椎 T8、
置光学显微镜（日本 Olympus 公司）；TVO 63XC-MO 型 T10棘突，调节T9节段脊髓水平，用直径2.5 mm、质量10 g
显微数码成像系统（广州市明美光电技术有限公司）； 的撞针自 2.5 cm 高处自由落下垂直撞击 T9脊髓后正中
Pannoramic SCAN 型 数 字 全 扫 仪 器（ 匈 牙 利 部（致伤能量：25 gcf），撞击后迅速移除撞针。以肉眼可
3DHISTECH 公司）；ImpactorModelⅠ型打击仪（安徽正 见脊髓组织肿胀、出血以及大鼠摆尾反射、双下肢回缩
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华生物仪器设备有限公司）；KD-BM型包埋机、KD-2258 样扑动且麻醉清醒后呈迟缓性瘫痪为造模成功 ，缝合
型病理切片机、KD-P 型摊片机、KD-BL 型冷冻台（浙江 术后皮下注射青霉素 8 万单位，每日 1 次、持续 3 d。人
省金华市科迪仪器设备有限公司）；PHG-9070A 型烤箱 工按摩大鼠膀胱排尿，每日2次，直至其恢复自主排尿。
（上海精宏实验设备有限公司）；JJ124BC型分析天平（常 2.2 给药
熟双杰测试仪器厂）。 造模成功后，C组大鼠腹腔注射川芎嗪（药液质量浓

·1328 · China Pharmacy 2020 Vol. 31 No. 11 中国药房 2020年第31卷第11期