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重复性、稳定性、回收率等方法学考察，所有溶液均临用                          模型组比较，胶囊组、丹皮酚组大鼠子宫组织中NO含量
        现配 。                                               以及胶囊组、芍药苷组、丹皮酚组MDA含量均显著降低
            [18]
        2.3.4 SCFAs 的含量测定       取“2.1.3”项下结肠内容物            （P＜0.05或P＜0.01），详见表1。
        适量，按“2.3.2”项下方法处理后，再按“2.3.1”项下GC条                  表 1   各组大鼠扭体反应以及子宫组织中 NO、MDA 含
        件进样分析，记录峰面积。根据标准曲线计算样品中                                  量比较（x±±s，n＝6）
        SCFAs的质量浓度，并计算其含量（X，mg/g）：X＝c×v×D/                 Tab 1 Comparison of writhing reaction and the con-
        m[式中，c为样品中SCFAs的质量浓度（mg/L），v为样品                           tents of NO and MDA in uterus tissues of rats
        预处理时的定容体积（L），m 为结肠内容物的取样质量                                in each group（x±±s，n＝6）
       （g），D为样品稀释倍数]。                                                     扭体反应
                                                           组别                           NO，μmol/g pro  MDA，μmol/g pro
        2.4 肠道菌群多样性分析                                                扭体次数      抑制率，％
                                                           正常组        0                   7.41±1.87  1.22±0.29
        2.4.1  肠道菌群DNA提取         取“2.1.3”项下各组大鼠粪           模型组     27.66±15.88 ＊＊        17.29±6.88 ＊  3.05±1.12 ＊
        便适量，使用 QIAamp DNA Stool Mini Kit 试剂盒提取             胶囊组     11.00±7.77 #  60.1     7.91±2.66 #  1.37±0.48 #
                           ®
                                                           芍药苷组     6.17±3.37 ##  77.9   16.05±8.48  1.03±0.67 ##
        其细菌DNA，严格按试剂盒说明书操作。                                丹皮酚组    18.00±13.75 #  34.8    6.94±3.16 #  1.49±0.89 #
        2.4.2 Rep-PCR 和 Eric-PCR 扩增    扩增反应体系（25           苦杏仁苷组   22.33±12.13  19.2     14.79±4.68  2.08±0.82
                                                                                    ＊ ＊
        μL，两种方法相同）：DNA 模板 3.0 μL、上/下游引物各                       注：与正常组比较， P＜0.05， P＜0.01；与模型组比较，P＜
                                                                                                        #
                                                                             ＊
                                                               ##
        0.5 μ L、2 × Taq PCR Mix 12.5 μ L、ddH2O 8.5 μ L。    0.05，P＜0.01
                                                                                       ＊ ＊
                                                               Note：vs. normal group， P＜0.05， P＜0.01；vs. model group，
                                                                               ＊
        Rep-PCR 反应条件：94 ℃预变性 5 min；94 ℃变性 1
                                                                  ##
                                                           # P＜0.05，P＜0.01
        min，39 ℃退火 30 s，36 ℃再退火 30 s，72 ℃延伸 3 min，
                                                           3.2  结肠内容物中SCFAs含量变化
        共 35 个循环；72 ℃再延伸 9 min。Eric-PCR 反应条件：
                                                           3.2.1 GC方法学考察结果 （1）专属性：混合对照品溶
        94 ℃预变性 5 min；94 ℃变性 1 min，49 ℃退火 30 s，
                                                           液（经乙醚稀释，质量浓度均为50 mg/L）、结肠内容物样
        46 ℃再退火30 s，72 ℃延伸3 min，共35个循环；72 ℃再
                                                           品溶液、空白溶剂（乙醚）的 GC 图见图 1。其中，图 1A、
        延伸 9 min。扩增反应产物行 2％琼脂糖凝胶电泳（电
                                                           图1B在同一保留时间有相同的色谱峰，且分离度良好；
        压：90 V，时间：1 h），以 1％溴化乙锭试液显色后，使用
                                                           空白溶剂（图 1C）对定量分析无干扰，提示本法专属性
        多功能凝胶成像仪成像并拍照，以DL2000 DNA Marker
                                                           好。（2）线性关系：6 种 SCFAs 检测质量浓度的线性范围
       （2 000 bp）、DL5000 DNA Marker（5 000 bp）为参照，获
                                                                               2
                                                           均为 5～1 000 mg/L（R 均大于 0.999），定量下限均为 5
        取DNA条带信息。利用Image Lab 6.0软件将电泳图谱
                                                           mg/L。（3）精密度、重复性、稳定性及回收率试验：精密
        转变为波峰图，其中每个波峰代表1个条带，假设1个条
                                                           度、重复性试验的 RSD 分别为 0.5％～2.5％、4.8％～
        带代表1个细菌类群，条带波峰峰面积则代表该类群的                           10.9％（n＝6）；结肠内容物样品溶液室温放置8 h内稳定
        种群数量。采用多样性指数（H′，即 Shannon-Wiener 指
                                                           （RSD 为 5.1％～11.2％，n＝5）；6 种 SCFAs 成分的平均
        数）描述大鼠肠道菌群的多样性：H′＝－∑（pi lnpi ）（式                   加样回收率为 99.0％～113.3％（RSD 为 9.6％～14.1％，
        中，pi＝ni/N，ni为大鼠的第i条带的峰面积，N为此大鼠所                    n＝9）。精密度、稳定性试验数据略，其余详见表2。
        有条带的峰面积总和），H′值越高则表明菌群多样性越                          3.2.2  结肠内容物中SCFAs含量           与正常组比较，模型
        丰富  [19-20] 。                                      组大鼠结肠内容物中乙酸、丙酸、丁酸及总 SCFAs 的含
        2.5 统计学方法                                          量均显著降低（P＜0.05或P＜0.01）。与模型组比较，胶
            采用SPSS 24.0软件对数据进行统计分析。数据均                     囊组大鼠结肠内容物中丙酸及总SCFAs含量，芍药苷组
        以 x±s 表示，多组间比较采用单因素方差分析，组间两                        乙酸、丙酸、丁酸及总SCFAs含量以及丹皮酚组丙酸、丁
        两比较采用LSD检验。P＜0.05为差异有统计学意义。                        酸及总SCFAs含量均显著升高，而芍药苷组异戊酸含量
        3 结果                                               显著降低（P＜0.05或P＜0.01），详见表3。
        3.1 药效学评价指标                                        3.3 肠道菌群多样性变化
            腹腔注射缩宫素后，与正常组比较，模型组大鼠均                         3.3.1  肠道菌群DNA电泳图           各组大鼠粪便中肠道菌
        出现了明显的扭体反应，且扭体次数显著增加（P＜                            群 DNA 的 Rep-PCR 和 Eric-PCR 电泳图见图 2。由图
        0.01）；与模型组比较，胶囊组、芍药苷组、丹皮酚组大鼠                       2A、图 2B 可见，与正常组比较，模型组大鼠肠道菌群
        的扭体次数均显著减少（P＜0.05或P＜0.01），抑制率分                     DNA的电泳图中条带数量明显减少，且大部分条带的亮
        别为 60.1％、77.9％、34.8％。与正常组比较，模型组大                   度明显减弱、小部分条带亮度有所增强。与模型组比
        鼠子宫组织中NO、MDA含量均显著升高（P＜0.05）；与                      较，胶囊组和芍药苷组大鼠肠道菌群 DNA 的电泳图中


        中国药房    2020年第31卷第11期                                             China Pharmacy 2020 Vol. 31 No. 11  ·1323  ·
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