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培养箱中培养24 h后，将其分为空白组、模型组、夜关门 0.05）。与模型组比较，阳性对照组和 50、100 μg/mL 夜
二氯甲烷提取物组、夜关门二氯甲烷提取物+siRNA 关门二氯甲烷提取物组细胞的存活率显著降低（P＜
HO-1 组，每组设置 3 个复孔。分别将 siRNA HO-1 与其 0.05），而其余提取物组细胞存活率差异无统计学意义
对照 siRNA control 样品用无血清和抗体的培养基稀释 （P＞0.05），可见夜关门二氯甲烷提取物对谷氨酸诱导
至浓度为 40 nmol/L。之后取 Lipofectamine TM 2000 稀释 的细胞损伤具有一定的保护作用，故后续试验以夜关门
液 1 μL 于 50 μL 培养基中，室温孵育 5 min 后与上述稀 二氯甲烷提取物为研究对象。夜关门不同溶剂提取物
释后的 siRNA 溶液混合，室温静置 20 min，得到转染 对谷氨酸诱导细胞损伤的影响考察结果见图2。
液。将转染液加入各细胞孔中，每孔 100 μL。其中，空
120
白组、模型组与夜关门二氯甲烷提取物组加入 siRNA 100 # #
control转染液，夜关门二氯甲烷提取物+siRNA HO-1组 ％ 80 #
加入 siRNA HO-1 转染液。然后，夜关门二氯甲烷提取 细胞存活率， 60 ＊
40
物组及夜关门二氯甲烷提取物+siRNA HO-1 组分别加
20
入夜关门二氯甲烷提取物（100 μg/mL）处理细胞 24 h， 0
阳性对照组
空白组不作处理。之后分别按“2.3”～“2.5”项下方法进 空白组 模型组 25 μg/mL 50 μg/mL 100 μg/mL 25 μg/mL 50 μg/mL 100 μg/mL 25 μg/mL 50 μg/mL 100 μg/mL
行细胞存活率及细胞中ROS水平和HO-1蛋白表达的检 夜关门石油醚提取 夜关门二氯甲烷提 夜关门乙酸乙酯提
物组 取物组 取物组
测，以判断夜关门二氯甲烷提取物是否通过促进 HO-1
注：与空白组比较，P＜0.05；与模型组比较，P＜0.05
＊
#
蛋白的表达进而发挥药效。 Note：vs. blank group，P＜0.05；vs. model group，P＜0.05
＊
#
2.9 统计学方法 图2 夜关门不同溶剂提取物对谷氨酸诱导细胞损伤的
采用 SPSS 19.0 软件对数据进行统计分析，采用 影响考察结果（x±±s，n＝3）
GraphPad Prism 5.0软件绘制柱形图。数据以x±s表示， Fig 2 Effects of different solvent extracts of L. cunea-
多组间比较采用单因素方差分析，两组间比较采用 t 检 ta on glutamate-induced cell injury（x±±s，n＝3）
验。P＜0.05表示差异有统计学意义。
3 结果 3.3 夜关门二氯甲烷提取物对谷氨酸诱导损伤细胞中
3.1 夜关门不同溶剂提取物的细胞毒性测定结果 ROS水平的影响
当夜关门各溶剂提取物的质量浓度在 25～100 与空白组比较，模型组细胞中 ROS 水平显著升高
μg/mL 范围时，对细胞活性均无明显影响；当提取物质 （P＜0.05）。与模型组比较，阳性对照组和50、100 μg/mL
量浓度达到 200 μg/mL 时，均可显著降低细胞的存活率 夜关门二氯甲烷提取物组细胞中 ROS 水平显著降低
（P＜0.05）。这表明在25～100 μg/mL范围内，各溶剂提 （P＜0.05），且夜关门二氯甲烷提取物的作用具有一定
取物对细胞的毒性较小，故以此质量浓度范围进行后续 的浓度依赖性趋势。各组细胞中 ROS 水平测定结果见
试验。夜关门不同溶剂提取物对细胞的毒性考察结果 表1。
见图1。 表1 各组细胞中ROS水平测定结果（x±±s，n＝3）
120
Tab 1 The level of ROS in cells in each group（x±±s，
100 ＊
＊ ＊ n＝3）
％ 80
细胞存活率， 60 组别 100.00±4.49
ROS，％
空白组
40
20 模型组 204.17±6.97 ＊
阳性对照组 117.34±7.92 #
0
空白组 25 μg/mL 50 μg/mL 100 μg/mL 200 μg/mL 25 μg/mL 50 μg/mL 100 μg/mL 200 μg/mL 25 μg/mL 50 μg/mL 100 μg/mL 200 μg/mL 25 μg/mL夜关门二氯甲烷提取物组 187.57±9.21 #
163.81±7.23
50 μg/mL夜关门二氯甲烷提取物组
夜关门石油醚提取物组 夜关门二氯甲烷提取物组 夜关门乙酸乙酯提取物组 100 μg/mL夜关门二氯甲烷提取物组 134.11±8.24 #
＊
#
＊
注：与空白组比较，P＜0.05 注：与空白组比较，P＜0.05；与模型组比较，P＜0.05
＊
#
Note：vs. blank group，P＜0.05 Note：vs. blank group，P＜0.05；vs. model group，P＜0.05
＊
图1 夜关门不同溶剂提取物的细胞毒性考察结果（x±± 3.4 夜关门二氯甲烷提取物对细胞中 HO-1 蛋白表达
s，n＝3） 的影响
Fig 1 Cytotoxicity of different solvent extracts of L. 与空白组比较，CoPP组和25、50、100 μg/mL夜关门
cuneata on cells（x±±s，n＝3） 二氯甲烷提取物组细胞中HO-1蛋白表达水平均显著升
3.2 夜关门不同溶剂提取物对谷氨酸诱导细胞损伤的 高（P＜0.05），且夜关门二氯甲烷提取物的作用具有一
影响 定的浓度依赖趋势。各组细胞中HO-1蛋白表达的电泳
与空白组比较，模型组细胞的存活率显著降低（P＜ 图见图3，蛋白表达水平测定结果见表2。

·1306 · China Pharmacy 2020 Vol. 31 No. 11 中国药房 2020年第31卷第11期