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表 3 各组细胞中 Nrf2 蛋白表达水平测定结果（x±±s，
HO-1 32 kDa
n＝3）
Tab 3 Protein expression of Nrf2 in cells in each group
β-actin 43 kDa （x±±s，n＝3）
空白组 COPP组 25 μg/mL 50 μg/mL 100 μg/mL 组别 细胞质Nrf2/β-actin 细胞核Nrf2/Lamin B
空白组 1.00±0.07 1.00±0.19
夜关门二氯甲烷提取物组
夜关门二氯甲烷提取物组（处理0.5 h） 0.49±0.02 ＊ 2.21±0.18 ＊
图3 各组细胞中HO-1蛋白表达的电泳图
夜关门二氯甲烷提取物组（处理1 h） 0.23±0.12 ＊ 2.82±0.23 ＊
Fig 3 Electrophoretograms of protein expression of 夜关门二氯甲烷提取物组（处理1.5 h） 0.20±0.02 ＊ 2.56±0.09 ＊
HO-1 in cells in each group 注：与空白组比较，P＜0.05
＊
＊
表 2 各组细胞中 HO-1 蛋白表达水平测定结果（x±±s， Note：vs. blank group，P＜0.05
n＝3）
Tab 2 Protein expressions of HO-1 in cells in each
group（x±±s，n＝3） 空白组
组别 HO-1/β-actin
空白组 1.00±0.19
CoPP组 4.13±0.49 ＊
25 μg/mL夜关门二氯甲烷提取物组 2.42±0.21 ＊
50 μg/mL夜关门二氯甲烷提取物组 3.81±0.33 ＊
100 μg/mL夜关门二氯甲烷提取物组 4.26±0.22 ＊ 夜关门二氯甲烷提取物组
注：与空白组比较，P＜0.05
＊
Note：vs. blank group，P＜0.05
＊
3.5 夜关门二氯甲烷提取物对细胞中Nrf2蛋白表达的 Nrf2图 DAPI（细胞胞核）图 叠加图
影响 图 5 各组细胞中 Nrf2 蛋白表达的免疫荧光显微图（×
与空白组比较，夜关门二氯甲烷提取物不同处理时 200）
间组细胞质中 Nrf2 蛋白表达水平均显著降低（P＜ Fig 5 Immunofluorescence micrograms of protein ex-
0.05），而细胞核中 Nrf2 蛋白表达水平显著升高（P＜ pression of Nrf2 in cells in each group（×200）
0.05）。各组细胞中Nrf2蛋白表达的电泳图见图4，蛋白
ROS 水平的作用（P＜0.05）。HO-1 基因沉默后各组细
水平测定结果见表3；免疫荧光染色显微图见图5。
胞中HO-1蛋白表达的电泳图见图6，蛋白表达水平测定
细胞质Nrf2 68 kDa 结果见表4；细胞存活率和细胞中ROS水平测定结果见
表5。
β-actin 43 kDa
HO-1 32 kDa

β-actin 43 kDa
细胞核Nrf2 68 kDa
空白组 夜关门二氯甲烷 夜关门二氯甲烷提取
提取物组 物+siRNA HO-1组
Lamin B 68 kDa 图6 HO-1基因沉默后各组细胞中HO-1蛋白表达的电
泳图
空白组 处理0.5 h 处理1 h 处理1.5 h
夜关门二氯甲烷提取物组 Fig 6 Electrophoretograms of protein expression of
图4 各组细胞中Nrf2蛋白表达的电泳图 HO-1 in cells after HO-1 gene silencing in each
Fig 4 Electrophoretograms of protein expression of group
Nrf2 in cells in each group
4 讨论
3.6 HO-1基因沉默后夜关门二氯甲烷提取物对谷氨酸 谷氨酸引起的神经细胞氧化应激和兴奋性毒性与
诱导细胞损伤的影响 各类神经退行性疾病的发生、发展有着密切联系。研究
进行 si-RNA HO-1 转染后，细胞中 HO-1 蛋白表达 发现，高浓度谷氨酸能引起海马组织中谷氨酸转运体及
[11]
水 平 显 著 降 低（P＜0.05），表 明 si-RNA HO-1 转 染 对 谷氨酸重摄取的功能下降 。本研究采用5 mmoL/L谷
HO-1基因发挥了沉默作用。夜关门二氯甲烷提取物可 氨酸诱导小鼠海马细胞 HT22 发生氧化应激，从而引起
升高谷氨酸诱导损伤细胞的存活率及细胞中 ROS 水平 细胞损伤及细胞内 ROS 的产生。用不同溶剂夜关门提
（P＜0.05），而HO-1基因沉默后逆转了夜关门二氯甲烷 取物对细胞进行预处理后，发现夜关门二氯甲烷提取物
提取物对谷氨酸诱导损伤细胞的促进增殖以及降低 可以显著抑制由谷氨酸诱导的细胞损伤和 ROS 的过量

中国药房 2020年第31卷第11期 China Pharmacy 2020 Vol. 31 No. 11 ·1307 ·