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α-SMA                                     43 kDa          单一生物体过程                            97
                                                                       代谢过程                        86
        GAPDH                                      36 kDa              细胞进程                       83
                                                                       生物调节                 61
               空白组    HF模型组  七味清肝散  七味清肝散   七味清肝散                      刺激反应                 60
                              高剂量组   中剂量组    低剂量组                  多细胞生物过程           32
            图3 各组大鼠肝组织中α-SMA表达的电泳图                                生物过程   定位          32
        Fig 3 Electrophoretograms of protein expression of             发育过程        25
                                                                    细胞组件组织       19
               α-SMA in liver tissue of rats in each group          免疫系统过程       18
                                                                       信号通路     15
                 表2 与HF有关的差异表达蛋白                                         其他      18
                                                                         细胞
        Tab 2 Differentially expressed proteins associated              细胞器                     77    96
                with HF                                        GO分类名称     膜               51
                                                                       细胞外区
               编码基  表达                 编码基    表达                  细胞组分  大分子配合物    21     48
        Uniprot ID        P    Uniprot ID           P
               因名称  趋势                 因名称    趋势                      膜-封闭腔      16
        A0A0G2JSI0  Fmo3  下调 1.624×10 -12  Q62730  Hsd17b2  下调 1.151×10 -7  其他  7
        A0A0H2UHP1 Aldh1a1 下调 1.000×10 -32  Q64581  Cyp3a18  下调 1.000×10 -32  细胞连接  8
        A0A0H2UI26 Steap3  下调 0.020  Q8CHM7  Hacl1  下调 3.664×10 -15      整合                         91
        D3Z8X6  Dtx3l  下调 1.812×10 -8  A0A0G2K0P2 Smad2  下调 1.428×10 -4  催化活性   14              76
                                                                       转运活性
        F1LRQ1  Aox1  下调 1.000×10 -32  P62738  Acta2  下调 1.000×10 -32  分子功能调节  10
        F1LSA2  Cyp2b2  下调 1.428×10 -4  P52631  Stat3  下调 1.950×10 -9  分子功能  其他  3
        G3V8F9  Amacr  下调 7.851×10 -5  A0A0G2JSQ2  Fmo5  上调 0.029   结构分子活性    5
        O54753  Hsd17b6 下调 0.002  A0A0G2K1R4 Rdh5  上调 4.120×10 -5     抗氧化活性   5
        P08503  Acadm  下调 1.952×10 -5  A0A0H2UHJ1 S100a9  上调 3.902×10 -10   0      30      60      90
        P08541  Ugt2b  下调 9.898×10 -8  D3ZAC0  Itga2b  上调 1.645×10 -4              差异表达蛋白数,个
        P0DMW1  Hspa1b  下调 1.861×10 -7  D4ABM1  Cyp2c7  上调 3.109×10 -15  图4 差异表达蛋白的GO注释
        P12336  Slc2a2  下调 0.002  F1LTB8  RGD1559459 上调 1.600×10 -4  Fig 4 GO annotation of differentially expressed pro-
        P16303  Ces1d  下调 2.347×10 -5  P16232  Hsd11b1  上调 1.000×10 -32
        P18125  Cyp7a1  下调 2.582×10 -4  P24008  Srd5a1  上调 1.924×10 -5  teins
        P19225  Cyp2c70 下调 6.536×10 -12  P50115  S100a8  上调 1.178×10 -13  细胞膜(10.96%)  线粒体(8.22%)
        P24473  Gstk1  下调 1.000×10 -32  P55051  Fabp7  上调 0.015
        P36511  Ugt2b15 下调 0.002  P55053  Fabp5  上调 6.612×10 -10                          细胞核(7.53%)
        P38918  Akr7a3  下调 1.000×10 -32  Q5XIW9  Flot2  上调 1.649×10 -5
        Q5FVR2  Tymp  下调 8.440×10 -5  Q6IMX5  Cd36  上调 3.180×10 -4                              内质网(6.85%)
        Q5I0K1  Pipox  下调 5.482×10 -9  Q9Z1E1  Flot1  上调 0.021
                                                              细胞外基质
        Q5XFV4  Fabp4  下调 0.002  O54857  PTEN  上调 1.254×10 -4  (27.41%)                          细胞质,细胞核
                                                                                                  (5.48%)
        4 讨论                                                                                     过氧化物酶体
                                                                                                  (3.42%)
            七味清肝散是蒙医的经典名方,常被用于治疗各种
                                                                                               其他(0.68%)
                [10]
        肝脏疾病 。本课题组前期研究已经明确了七味清肝
        散的抗 HF 作用 ,所以本研究将重点放在了该方多靶                                    细胞质(29.45%)
                     [11]
        点、多机制治疗HF的潜在靶点上。同时,由于目前尚缺                                图5   差异表达蛋白亚细胞结构的定位比例
        乏疗效确切的 HF 治疗药物,加之民族医学与中医理论                         Fig 5  Proportion of subcellular structure localization
        体系也有所差异,故本研究暂未设置阳性对照组。蒙药                                  of differentially expressed proteins
        及其方剂成分复杂多样,因缺乏合理的方法对其作用靶                           并及时治疗可有效控制该病的发展。有文献报道,CCl4
        点及机制进行深入探讨          [18-19] ,使得蒙药的发展受到一定           可导致肝脏炎症以及纤维化的发生,并伴随肝细胞的变
        限制。随着蛋白质组学等技术的发展,通过对比药物组                           性、坏死、破裂,进而使存在于肝细胞内的酶(ALT、AST、
        与模型组相关蛋白表达的变化,并以此进行潜在作用靶                           ALP)进入到血清中,故血清肝酶含量可反映肝细胞受
        点的挖掘,可为科学阐释蒙药的作用机制提供新的思                            损程度 。此外,HYP是胶原蛋白中特征性的氨基酸成
                                                                 [22]
        路。近年来,蛋白质组学相关技术已广泛应用于蒙药机                           分,在HF发生时显著升高,可作为肝功能的评价指标之
                                                             [23]
        制研究等领域中       [20-21] 。鉴于此,本课题组在进一步证实              一 。除上述指标外,病理切片亦有助于更准确地判断
        七味清肝散对 HF 模型大鼠保护作用的基础上,结合                          肝脏病变的程度。其中,HE 染色可用以观察炎症细胞
        TMT 技术初步分析了该方治疗 HF 的潜在靶点及机制,                       浸润、气球样变、假小叶等病理状态;Masson染色则可直
        旨在为其深入研究提供参考。                                      观反映肝组织中胶原纤维的生成情况,从而判断 HF 的
            HF 是肝脏疾病发展过程中的重要节点,正确认识                        进展程度。因此,本研究在测定肝脏指数的基础上,选


        中国药房    2020年第31卷第11期                                             China Pharmacy 2020 Vol. 31 No. 11  ·1299  ·
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