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附子为毛茛科植物乌头（Aconitμm carmichaelii De-            乌头（A. carmichaelii Debx.）的子根。
        bx.）子根的加工品，具有回阳救逆、补火助阳、散寒止痛                             乌 头 碱 对 照 品（批 号 ：M Μ ST-18110905，纯 度 ：
               [1]
        的功效 。现代研究表明，酯型生物碱既是附子的有效                            98.01％）、新乌头碱对照品（批号：MΜST-18111308，纯
                            [2]
        成分，又是其毒性成分 ，其中双酯型生物碱（如乌头碱、                          度：99.04％）、次乌头碱对照品（批号：MΜST-19080210，
        次乌头碱、新乌头碱等）是导致附子中毒的主要成分，同                           纯 度 ：99.09％）、苯 甲 酰 乌 头 碱 对 照 品（批 号 ：M Μ
        时也是其具有强心、抗炎和镇痛等作用的主要活性物                             ST-19032406，纯度：98.99％）、苯甲酰新乌头碱对照品
        质；但这类物质性质不稳定，在湿热条件下其8位上的乙                          （批号：MΜST-19032807，纯度：99.73％）、苯甲酰次乌头
        酰基易发生水解，得到相应的单酯型生物碱，如苯甲酰                            碱对照品（批号：MΜST-18110710，纯度：99.66％）均购
        乌头碱、苯甲酰新乌头碱、苯甲酰次乌头碱等，故炮制能                           自成都曼斯特生物科技有限公司；胆巴（食品级，江油恒
        将附子中具有毒性的双酯型生物碱转化为具有临床疗                             源药业集团有限公司，批号：20190217）；氯化镁（批号：
        效且毒性较小的单酯型生物碱，因此临床常以炮制品入                            2019051801）、氯化钙（批号：2019050201）、氯化钾（批
                                    [4]
        药 。附子炮制首见于《伤寒论》 ，后又衍生出炒、煨、盐                         号：2019112301）、氯化钠（批号：2019022101）均购自成
          [3]
        制等多种炮制方法 ，但大多已被淘汰，只有盐制法沿用                           都市科隆化学品有限公司；乙腈、四氢呋喃均为色谱纯，
                         [5]
        至今，并以胆巴为辅料进行炮制，以达到减毒、增效和防                           异丙醇、二氯甲烷均为分析纯，水为超纯水。
                [6]
        腐的目的 。2015年版《中国药典》（一部）中记载的附子                        2 方法与结果
                                               [7]
        炮制品盐附子、黑顺片、白附片均以胆巴浸泡 。但在此                           2.1 附子炮制品的制备
        炮制过程中，胆巴可导致大量生物碱成分流失，使得有                            2.1.1  生附子    将新鲜附子表面泥土洗净，去须根，纵
        效成分的含量降低         [8-9] ；此外，一些生产加工企业用胆巴              切成约0.3 cm的薄片，于37 ℃烘干，即得。
        浸泡后未将药材彻底漂洗干净，由于胆巴对皮肤、黏膜有                           2.1.2  附子盐制炮制品        将新鲜附子表面泥土洗净，去
        较强的刺激作用，可抑制中枢神经系统，若服用过量可引                           掉须根后，放入含 40％胆巴的水溶液（“花水”）中，以胆
                  [10]
        起中毒反应 。2015年版《中国药典》（一部）并未明确规                        巴水溶液淹没附子为宜，每日上下翻动1次，7 d后捞出，
        定胆巴的浸泡时间和用量，故目前市场上用胆巴炮制的                            此时附子外皮色黄亮，质松软，为“胆附子”。将泡过附
        附子质量参差不齐，临床应用时有中毒事件发生，严重影                           子的胆水（“老水”）煮沸，将胆附子倒入，以“老水”淹没
                        [11]
        响了附子临床疗效 。                                          胆附子为宜，煮 15～20 min，中途上下翻动 1 次，煮至透
            本课题组前期研究发现，炮制辅料胆巴中含有大量                          心，捞起，放入缸内，以“老水”+清水（1 ∶ 1，V/V）浸泡1 d，
                                       [10]
        的氯化镁、氯化钠、氯化钙等无机盐 。基于此，本研究                           得“冰附子”。取“冰附子”剥去表皮，以“老水”+清水（1∶1，
        按2015年版《中国药典》（一部）“附子”项下“白附片”的                       V/V）浸泡过夜，中途搅动1～2次，将浸泡后的附子捞出，
                                         [10]
                 [1]
        炮制方法 ，在前期优化胆巴炮制工艺 的基础上，分别                           纵切成约0.3 cm的薄片，放入清水中浸泡48 h后换超纯
        采用氯化镁、氯化钙、氯化钾、氯化钠炮制附子，同时通                           水再浸泡12 h，取出浸泡好的附子，放入蒸笼，蒸至蒸气
        过测定其中苯甲酰新乌头碱、苯甲酰次乌头碱、苯甲酰                            上顶后计时，以 60 min 为宜，将蒸好的附子于日光下曝
        乌头碱、新乌头碱、乌头碱、次乌头碱的含量变化来评价                           晒（不可重叠），晒至近干，即成色泽白亮的白附片（即胆巴
        4种盐制附子炮制品与胆巴炮制品、生附子的区别；采用                           炮制品）。按上述工艺分别以氯化钙、氯化镁、氯化钠、氯
        效/毒比、毒性成分指数（TCI）评价生附子及其不同盐制                         化钾（浓度均为40％）代替胆巴，制得氯化钠炮制品、氯化
        炮制品的效果和毒性，旨在为附子盐制规范的建立及炮                            钙炮制品、氯化钾炮制品、氯化镁炮制品 。
                                                                                             [12]
        制工艺的完善提供参考，亦为中药附子无胆炮制新工艺                            2.2  含量测定
        的确定提供依据。                                            2.2.1  色 谱 条 件    色 谱 柱 ：Dikma Dianonsil C18 （250
        1 材料                                                mm×4.6 mm，5 μm）；流动相（A）：乙腈-四氢呋喃（25∶15，
        1.1 仪器                                              V/V），流动相（B）：0.1 mol/L 醋酸铵水溶液（每 1 000 mL
            1260型高效液相色谱仪，包括四元泵、柱温箱、紫外                       含冰醋酸 0.5 mL），梯度洗脱（0～14 min，15％A→16％
        检测器、LC1260色谱工作站（美国Agilent公司）；SHB-Ⅲ                  A；14～65 min，16％A→18％A；65～90 min，18％A→
        型循环水式多用真空泵（郑州杜甫仪器厂）；KQ5200型超                        20％A；90～95 min，20％A）；检测波长：235 nm；柱温：
        声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；Rotavapor R-210                  30 ℃；流速：1.0 mL/min；进样量：20 μL。
        型旋转蒸发仪（瑞士Buchi公司）；ΜPT-Ⅱ-107型优普系列                    2.2.2  混合对照品溶液的制备            分别精密称取苯甲酰
        超纯水器（成都超纯科技有限公司）；BP221S型十万分之                        新乌头碱、苯甲酰次乌头碱、苯甲酰乌头碱、新乌头碱、
        一电子分析天平（德国Satorious公司）；101-2AB型电热鼓                  乌头碱、次乌头碱对照品适量，置于同一10 mL量瓶中，
        风干燥箱（北京中兴伟业仪器公司）。                                   加异丙醇-二氯甲烷（1 ∶ 1，V/V）混合溶液至刻度，混匀，
        1.2  药品与试剂                                          即得上述 6 种成分质量浓度分别为 122、112、101、139、
            新鲜附子由四川江油中坝附子加工厂提供，经成都                          112、112 μg/mL的混合对照品溶液。
        中医药大学药学院龙飞教授鉴定为毛莨科乌头属植物                             2.2.3  供试品溶液的制备          取“2.1”项下生附子及不同


        ·1224  ·  China Pharmacy 2020 Vol. 31 No. 10                                中国药房    2020年第31卷第10期
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