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绿原酸A、异绿原酸C的平均加样回收率分别为98.63％                         3），表明色谱条件在一定范围内的变化对各待测成分相
        （RSD＝1.39％，n＝9）、99.15％（RSD＝1.10％，n＝9）、              对校正因子的影响较小。
        98.78％（RSD＝1.34％，n＝9）、98.37％（RSD＝1.53％，             2.9.3  相对校正因子重现性考察             本研究考察了不同
        n＝9）、98.28％（RSD＝1.62％，n＝9）、98.46％（RSD＝              品牌 HPLC 仪（Dionex、Shimadzu）以及不同色谱柱[Lu-
        1.50％，n＝9）、98.85％（RSD＝1.19％，n＝9）。                   bex Kromasil C18、AkzoNobel Kromasil C18、Dikma Silver-
        2.9 相对校正因子的计算及验证                                    sil C18，均为（250 mm×4.6 mm，5 µm）]对相对校正因子的

        2.9.1  相对校正因子的计算           本研究前期试验发现，由              影响，平行操作3次。结果，各待测成分相对校正因子的
        于小儿金翘颗粒中绿原酸含量最高，其对照品价格便宜                            RSD 均小于 2％（n＝3），表明相对校正因子在不同色谱
        且易得，故以绿原酸为内参物，计算新绿原酸、隐绿原                            条件下具有良好的重现性。
        酸、连翘酯苷 A、异绿原酸 B、异绿原酸 A 及异绿原酸 C                      2.10  待测成分色谱峰的定位
        相对于绿原酸的相对校正因子（fi/s），相对校正因子                              QAMS法通常采用相对保留时间定位色谱峰，即通
                 [12]
        （fi/s ）＝ai/as 。式中，ai为待测成分标准曲线斜率，as为内                过对比不同条件下的相对保留时间，若相对保留时间基
        参物标准曲线低利率。结果，新绿原酸、隐绿原酸、连翘                           本一致则认定为同一色谱峰 。当色谱峰众多且密集
                                                                                     [13]
        酯苷A、异绿原酸B、异绿原酸A及异绿原酸C相对于绿                           时，由于未测量的其余色谱峰均需计算相对保留时间，
        原酸的相对校正因子分别为 0.995、1.007、0.580、1.243、               因此其操作非常繁琐。假设其余条件下的相对保留时
        1.252、1.247。                                        间与标准相对保留时间一致，再计算其相对应的理论保
        2.9.2  相对校正因子耐用性考察             为考察相对校正因             留时间，则可简化过程，即各色谱峰的预测保留时间
        子在不同色谱条件下的耐用性，本研究适当改变了流动                           （y）＝其余条件下内参物绿原酸的保留时间×Lubex Kro-
        相各梯度点的比例（±2％）、流速（±2％）、柱温（±5 ℃）、                     masil C18对应的标准相对保留时间（x），结果见表2[以第
        水相 pH（±0.2）、检测波长（±5 nm），并平行操作 3 次。                  1 根色谱柱为标准，相对误差（RE）＝（预测保留时间－
        结果，各待测成分相对校正因子的RSD均小于3％（n＝                          实测保留时间）/实测保留时间×100％]。
                                      表2    相对保留时间预测保留时间定位色谱峰
                   Tab 2  Retention time to locate chromatographic peaks predicted by relative retention time
        仪器     色谱柱           保留时间                新绿原酸     绿原酸     隐绿原酸    连翘酯苷A    异绿原酸B    异绿原酸A   异绿原酸C
        Dionex  Lubex Kromasil C18  标准保留时间（tR）    6.400   8.592     8.975   13.625   15.350  16.100   16.825
                             标准相对保留时间（RtR，x）      0.745   1.000     1.045   1.586    1.787    1.874   1.958
                                                  5.850   7.900     8.342   13.117   14.725  15.375   16.183
               AkzoNobel Kromasil C18  实测tR
                             预测tR （y＝7.900x）      5.886   7.900     8.256   12.529   14.117  14.805   15.468
                             实测tR与预测tR的RE，％       0.62    0.       －1.03   －4.48    －4.13    －3.71   －4.42
                                                  5.925   7.967     8.400   13.242   14.775  15.383   16.242
               Dikma Silversil C18  实测tR
                             预测tR （y＝7.9670x）     5.935   7.967     8.326   12.636   14.237  14.930   15.599
                             实测tR与预测tR的RE，％       0.17    0.       －0.88   －4.58    －3.64    －2.94   －3.96
        Shimadzu  Lubex Kromasil C18  实测tR        5.837   7.853     8.288   13.018   14.614  15.261   16.058
                             预测tR （y＝7.853x）      5.850   7.853     8.206   12.455   14.033  14.717   15.376
                             实测tR与预测tR的RE，％       0.22    0.       －0.99   －4.32    －3.98    －3.56   －4.25
                                                  5.609   7.542     7.971   13.036   14.646  15.291   16.102
               AkzoNobel Kromasil C18  实测tR
                             预测tR （y＝7.542x）      5.619   7.542     7.881   11.962   13.478  14.134   14.767
                             实测tR与预测tR的RE，％       0.18    0.       －1.13   －8.24    －7.97    －7.57   －8.29
                                                  5.629   7.486     7.884   13.406   15.118  15.795   16.816
               Dikma Silversil C18  实测tR
                             预测tR （y＝7.486x）      5.577   7.486     7.823   11.873   13.377  14.029   14.658
                             实测tR与预测tR的RE，％      －0.92    0.       －0.77   －11.44   －11.52  －11.18   －12.83
            由表 2 可知，采用相对保留时间校正法定位色谱峰                        系 。根据此原理，本研究以待测成分在Lubex Kroma-
                                                              [14]
        时，保留时间越靠前的色谱峰，其实测和预测保留时间                            sil C18的保留时间为横坐标（x），以其余色谱柱的保留时
        的RE绝对值越小，定位越准确，这部分色谱峰可采用相                           间为纵坐标（y），绘制标准曲线。结果发现，Lubex Kro-
        对保留时间校正法定位；但随着保留时间的增加，保留                            masil C18 与其余色谱柱保留时间的相关系数分别为
        时间靠后的色谱峰的实测和预测保留时间的RE绝对值                            0.999 7、0.999 4、0.999 7、0.999 0、0.997 8。由于本研究的
        越大，保留时间甚至相差2 min以上，难以准确定位。                          目的仅为定位色谱峰，且在实际操作中，因其他色谱峰
            有研究发现，在相同的色谱条件下即使采用不同的                          未知，故无法采用多个数据点计算保留时间的标准曲
        仪器和色谱柱，各成分的保留时间也存在简单的线性关                            线，但若在色谱图中前后各取一点，以内参物绿原酸和


        ·1182  ·  China Pharmacy 2020 Vol. 31 No. 10                                中国药房    2020年第31卷第10期
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