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采集频率：5 Hz；过滤常数：5 s；雾化器温度：35 ℃；气 释至刻度，制成系列浓度工作溶液。按“2.1”项下色谱条
5
源：氮气；压力：4.012×10 Pa。 件进样测定，记录峰面积。以各待测成分的质量浓度
2.2 溶液的制备 （x，mg/mL）为横坐标、峰面积（y）为纵坐标进行线性回
2.2.1 混合对照品溶液 精密称取果糖对照品390.375 归。结果，果糖的回归方程为 y＝44.665 7x－0.474 8
mg、D-无水葡萄糖对照品31.750 mg、蔗糖对照品694.050 （r＝0.999 5）、D-无水葡萄糖的回归方程为y＝45.171 8x+
mg，分别置于5 mL量瓶中，加80％乙醇溶解并定容，摇 0.133 0（r＝0.999 7）、蔗糖的回归方程为 y＝46.555 3x+
匀，制得各单一对照品贮备液。取上述各单一对照品贮 0.350 1（r＝0.999 8），上述3种成分检测质量浓度的线性
备液1 mL，置于25 mL量瓶中，加80％乙醇稀释至刻度， 范围分别为0.156 2～1.873 8、0.012 7～0.152 4、0.277 6～
混匀，制成果糖、D-无水葡萄糖、蔗糖质量浓度分别为 3.331 2 mg/mL。
3.123、0.254、5.552 mg/mL的混合对照品溶液。
2.5 定量限与检测限考察
2.2.2 供试品溶液 取药用石斛药材样品粉碎，过三号
取“2.2.1”项下混合对照品溶液，用80％乙醇逐级稀
筛，取粉末，约 1.0 g，精密称定，置于具塞锥形瓶中，加
释，按“2.1”项下色谱条件进样测定，分别以信噪比10∶1、
80％乙醇30 mL，超声（功率：500 W，频率：30 kHz）处理
3∶1计算定量限、检测限。结果，果糖、D-无水葡萄糖、蔗
60 min，滤过，减压回收溶剂，残渣加适量 80％乙醇溶
糖的定量限分别为 0.002 61、0.004 24、0.005 12 mg/mL，
解，并用80％乙醇定容至10 mL量瓶中，经0.22 µm微孔
检测限分别为0.000 78、0.001 27、0.001 54 mg/mL。
滤膜滤过，取续滤液，即得。
2.6 精密度试验
2.2.3 阴性对照溶液 以80％乙醇为阴性对照溶液。
精密量取“2.2.1”项下混合对照品溶液1.0 mL，置于
2.3 系统适用性试验
5 mL 量瓶中，加 80％乙醇稀释至刻度，混匀，按“2.1”项
取“2.2”项下混合对照品溶液、供试品溶液（以 S4、
下色谱条件连续进样测定 6 次，记录峰面积。结果，果
S11、S24为例）、阴性对照溶液各适量，按“2.1”项下色谱
条件进样测定，记录色谱图。结果，果糖、D-无水葡萄 糖、D-无水葡萄糖、蔗糖峰面积的 RSD 分别为 1.1％、
糖、蔗糖的分离度均大于 1.5，理论板数均不低于 6 000， 1.2％、1.0％（n＝6），表明仪器精密度良好。
阴性对照对测定无干扰，详见图1。 2.7 稳定性试验
取“2.2.2”项下供试品溶液（编号：S4）适量，分别于
50
400 3
40 室温下放置 0、2、4、8、12、24 h 时，按“2.1”项下色谱条件
mV U， 30 mV 300 1 进样测定，记录峰面积。结果，果糖、D-无水葡萄糖、蔗
200
U，
20
10 100
2 糖峰面积的RSD分别为1.3％、1.4％、1.3％（n＝6），表明
0 0
0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 20 0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 20 供试品溶液在室温下放置24 h 内稳定性良好。
t，min t，min
A.阴性对照溶液 B.混合对照品溶液 2.8 重复性试验
250 3 3 精密称取药用石斛药材样品（编号：S4）粉末约 1.0
200 1
200
1 g，共 6 份，精密称定，按“2.2.2”项下方法制备供试品溶
mV U， 150 2 mV 150 2
100
U，
100
50 50 液，再按“2.1”项下色谱条件进样测定，记录峰面积并按
0 0 外标法计算样品中 3 种成分的含量。结果，果糖、D-无
0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 20 0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 20
t，min t，min 水葡萄糖、蔗糖含量的 RSD 分别为 2.0％、1.4％、1.9％
C.供试品溶液（编号：S4） D.供试品溶液（编号：S11）
（n＝6），表明该方法重复性良好。
3
250 1 2.9 加样回收率试验
200
mV U， 150 2 取已知含量的样品（编号：S4）粉末约0.5 g，共6份，
100
50 精密称定，分别精密加入一定量的混合对照品溶液（含
0
0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 20 果糖 3.001 6 mg/mL、D-无水葡萄糖 1.303 mg/mL、蔗糖
t，min 25.809 4 mg/mL）0.5 mL，按“2.2.2”项下方法制备供试品
E.供试品溶液（编号：S24）
注：1.果糖；2. D-无水葡萄糖；3.蔗糖 溶液，再按“2.1”项下色谱条件进样测定，记录峰面积并
Note：1. fructose；2. D-anhydrous glucose；3. sucrose 计算加样回收率，结果见表2。
图1 高效液相色谱图 2.10 耐用性试验
Fig 1 HPLC chromatograms 取药用石斛药材样品（编号：S4）粉末适量，精密称
2.4 线性关系考察 定，按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，再按“2.1”项下
精密量取“2.2.1”项下混合对照品溶液 0.5、1.0、2.0、 色谱条件分别以不同色谱柱[Shodex Asahipak NH2P-50
3.0、4.0、5.0、6.0 mL，置于 10 mL 量瓶中，加 80％乙醇稀 4E（250 mm×4.6 mm，5 µm）、Agilent Zorbax NH2 （250

中国药房 2020年第31卷第10期 China Pharmacy 2020 Vol. 31 No. 10 ·1187 ·