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0.632、1.469 mg/mL 的单一对照品贮备液。取上述各单 对照品溶液适量，用 75％甲醇逐级稀释，分别以信噪比
一对照品贮备液 0.8 mL，置于 10 mL 量瓶中，加 75％甲 10∶1、3∶1计算定量限、检测限，结果见表1。
醇稀释至刻度，摇匀，制成上述7种成分质量浓度分别为 表1 回归方程、线性范围与定量限、检测限考察
的 0.074、0.299、0.104、0.057、0.036、0.051、0.118 mg/mL Tab 1 Results of linear equation，linear range，quan-
混合对照品溶液，避光保存。 tification limit and detection limit
2.2.2 供试品溶液 取本品适量，研细，取约1.0 g，精密 待测成分 回归方程 r 线性范围，μg/mL 检测限，ng 定量限，ng
称定，置于具塞锥形瓶中，精密加入75％甲醇50 mL，称 新绿原酸 A＝43.405 3c－0.184 5 0.999 8 9.27～92.70 0.41 1.38
绿原酸 A＝43.623 1c+0.126 1 0.999 9 37.36～373.60 0.42 1.41
定质量，超声（功率：240 W，频率：40 kHz）处理 10 min， 隐绿原酸 A＝43.912 0c+0.205 7 0.999 8 13.02～130.20 0.42 1.40
冷却至室温，再次称定质量，用 75％甲醇补足减失的质 连翘酯苷A A＝25.320 6c－0.153 2 0.999 7 7.15～71.50 0.60 1.99
异绿原酸B A＝54.234 7c－0.225 8 0.999 7 4.56～45.60 0.33 1.10
量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
异绿原酸A A＝54.602 9c－0.287 3 0.999 8 6.32～63.20 0.35 1.17
2.2.3 阴性对照溶液 取小儿金翘阴性对照颗粒，按 异绿原酸C A＝54.387 2c+0.364 7 0.999 9 14.69～146.90 0.33 1.10
“2.2.2”项下方法分别制备缺金银花、连翘的阴性对照 2.5 精密度试验
溶液。 取“2.2.1”项下混合对照品溶液适量，按“2.1”项下色
2.3 系统适用性试验 谱条件连续进样测定 6 次，记录峰面积。结果，新绿原
分别精密量取“2.2”项下混合对照品溶液、供试品溶 酸、绿原酸、隐绿原酸、连翘酯苷 A、异绿原酸 B、异绿原
液、阴性对照溶液适量，按“2.1”项下色谱条件进样测定， 酸 A、异绿原酸 C 峰面积的 RSD 分别为 0.29％、0.17％、
记录色谱图，详见图1。结果，新绿原酸、绿原酸、隐绿原 0.32％、0.41％、0.36％、0.33％、0.25％（n＝6），表明仪器
酸、连翘酯苷A、异绿原酸B、异绿原酸A、异绿原酸C与 精密度良好。
其相邻色谱峰的分离度均大于 2.22；拖尾因子分别为 2.6 重复性试验
1.07、1.00、1.03、1.01、1.00、1.07、1.10，理论板数均不低于 取小儿金翘颗粒样品（批号：20180912），每份 1.0
23 000；阴性对照在对应位置处无吸收峰，对测定无 g，共 6 份，精密称定，按“2.2.2”项下方法制备供试品溶
干扰。 液，再按“2.1”项下色谱条件进样测定，记录峰面积并按

1 400 1 400 标准曲线法计算样品中7种待测成分的含量。结果，新
1 000 1 000
mAU 500 mAU 500 绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、连翘酯苷 A、异绿原酸 B、异
0 0 绿 原 酸 A、异 绿 原 酸 C 含 量 的 RSD 分 别 为 1.19％ 、
－200 －200
0 5 10 15 20 0 5 10 15 20 1.08％、1.26％、1.41％、1.32％、1.20％、1.13％（n＝6），表
t，min t，min
A.混合对照品溶液 B.供试品溶液（批号：20180912） 明本方法重复性良好。
1 400 1 400
2.7 稳定性试验
1 000 1 000
mAU 500 mAU 500 取“2.2.2”项下供试品溶液（批号：20180912）适量，
0 0 在室温密闭条件下放置0、4、8、12、24、36 h时，按“2.1”项
－200 －200
0 5 10 15 20 0 5 10 15 20 下色谱条件进样测定，记录峰面积。结果，新绿原酸、绿
t，min t，min
C.缺金银花阴性对照溶液 D.缺连翘阴性对照溶液 原酸、隐绿原酸、连翘酯苷 A、异绿原酸 B、异绿原酸 A、
注：1.新绿原酸；2.绿原酸；3.隐绿原酸；4.连翘酯苷A；5.异绿原酸
异绿原酸C峰面积的RSD分别为0.83％、0.66％、0.95％、
B；6.异绿原酸A；7.异绿原酸C
0.90％、0.87％、0.78％、0.71％（n＝6），表明供试品溶液
Note：1. neochlorogenic acid；2. chlorogenic acid；3. cryptochloro-
在室温密闭条件下放置36 h内稳定性良好。
genic acid；4. forsythoside A；5. isochlorogenic acid B；6. isochlorogenic
acid A；7. isochlorogenic acid C 2.8 加样回收率试验
图1 高效液相色谱图 取已知含量的小儿金翘颗粒（批号：20180912），每
Fig 1 HPLC chromatograms 份0.5 g，共9份，精密称定，分别加入一定量的单一对照
2.4 线性关系与定量限、检测限考察 品溶液（按“2.2.1”项下方法制备，含新绿原酸 1.925
分别精密量取“2.2.1”项下各单一对照品贮备液 mg/mL、绿原酸 10.219 mg/mL、隐绿原酸 2.507 mg/mL、
0.1、0.2、0.4、0.6、0.8、1 mL，置于 10 mL 量瓶中，加 75％ 连翘酯苷 A 1.094 mg/mL、异绿原酸 B 1.016 mg/mL、异
甲醇稀释至刻度，制得系列线性工作溶液，按“2.1”项下 绿原酸 A 1.312 mg/mL、异绿原酸 C 2.968 mg/mL），按
色谱条件进样测定，记录峰面积。以待测成分质量浓度 “2.2.2”项下方法制备供试品溶液，再按“2.1”项下色谱条
（c，µg/mL）为横坐标、峰面积（A）为纵坐标进行线性回 件进样测定，记录峰面积并计算加样回收率。结果，新
归，回归方程与线性范围见表1。另取“2.2.1”项下混合 绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、连翘酯苷 A、异绿原酸 B、异

中国药房 2020年第31卷第10期 China Pharmacy 2020 Vol. 31 No. 10 ·1181 ·