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30 ℃、超声时间为20 min的条件下，分别以固液比1∶40、 表2 因素与水平
1 ∶ 45、1 ∶ 50、1 ∶ 55、1 ∶ 60 进行提取。取提取液适量，按 Tab 2 Factors and levels
“2.2.2②”项下方法制备供试品溶液，按“2.2.1”项下色谱 因素
水平
条件进样分析，并按外标法计算样品中柠檬酚的含量。 A，％ B，g/mL C，g D，min E，℃
－1 90 1∶45 3.5 40 50
结果，当固液比为1 ∶ 40～1 ∶ 50时，柠檬酚含量有上升的
0 95 5∶50 4.5 50 60
趋势，提示增加溶剂量可有助于提高柠檬酚的溶出程 1 100 1∶55 5.5 60 70
度；当固液比超过1∶50后，柠檬酚含量先下降再升高，含 表3 试验方案及结果
量的下降可能与大量杂质溶出有关，详见图3B。 Tab 3 Experimental design and results
2.3.3 硫酸铵加入量 精密称取小槐花粗提物0.2 g，在 试验号 A B C D E 柠檬酚含量，mg/g
乙醇体积分数为 80％、固液比为 1 ∶ 40、超声温度为 1 －1 0 1 0 0 0.449 2
30 ℃、超声时间为20 min的条件下，分别加入硫酸铵1.5、 2 0 0 0 0 0 0.627 7
3 0 －1 0 －1 0 0.465 6
2.5、3.5、4.5、5.5 g 进行提取。取提取液适量，按“2.2.2 4 0 1 0 0 －1 0.554 4
②”项下方法制备供试品溶液，按“2.2.1”项下色谱条件 5 0 0 1 1 0 0.501 5
进样分析，并按外标法计算样品中柠檬酚的含量。结 6 0 0 0 0 0 0.627 7
7 0 0 0 1 1 0.525 7
果，当硫酸铵加入量为1.5～2.5 g时，柠檬酚含量随着硫 8 －1 －1 0 0 0 0.391 5
酸铵加入量的增加而降低；当硫酸铵加入量为 2.5～4.5 9 1 0 0 1 0 0.545 3
g 时，柠檬酚含量也随之增加；当硫酸铵加入量＞4.5 g 10 0 0 －1 1 0 0.484 7
11 0 0 1 0 －1 0.477 0
时，柠檬酚含量增加不明显，且若再继续加入硫酸铵，则 12 0 1 0 1 0 0.445 7
双水相体系饱和，使得其分相能力减弱，详见图3C。 13 0 －1 1 0 0 0.427 4
2.3.4 超声时间 精密称取小槐花粗提物0.2 g，在乙醇 14 0 0 0 －1 －1 0.564 8
15 0 0 1 0 1 0.413 5
体积分数为 80％、固液比为 1 ∶ 40、超声温度为 30 ℃、硫
16 1 1 0 0 0 0.421 4
酸铵加入量为1.5 g的条件下，分别超声提取20、30、40、 17 0 1 1 0 0 0.469 4
50、60 min。取提取液适量，按“2.2.2②”项下方法制备 18 0 0 0 1 －1 0.445 1
19 0 1 0 －1 0 0.481 7
供试品溶液，按“2.2.1”项下色谱条件进样分析，并按外
20 1 0 0 0 －1 0.462 8
标法计算样品中柠檬酚的含量。结果，当超声时间为 21 0 －1 0 0 －1 0.393 2
20～50 min 时，柠檬酚含量呈波浪形上升；而当超声时 22 1 0 －1 0 0 0.480 3
23 0 0 －1 0 －1 0.513 8
间＞50 min 时，柠檬酚含量有所下降；当超声时间为 50
24 1 －1 0 0 0 0.483 0
min时，柠檬酚含量最高，详见图3D。 25 0 0 0 0 0 0.627 7
2.3.5 超声温度 精密称取小槐花粗提物0.2 g，在乙醇 26 1 0 1 0 0 0.470 5
27 0 0 0 0 0 0.627 7
体积分数为80％、固液比为1∶40、超声时间为20 min、硫
28 0 －1 0 0 1 0.495 1
酸铵加入量为 1.5 g 的条件下，分别在 30、40、50、60、 29 0 1 0 0 1 0.403 9
70 ℃下进行提取。取提取液适量，按“2.2.2②”项下方法 30 0 －1 0 1 0 0.450 1
31 －1 0 0 0 1 0.414 1
制备供试品溶液，按“2.2.1”项下色谱条件进样分析，并
32 1 0 0 0 1 0.473 4
按外标法计算样品中柠檬酚的含量。结果，当超声温度 33 0 0 0 －1 1 0.439 5
为30～50 ℃时，柠檬酚含量的变化并不明显；当超声温 34 0 0 －1 －1 0 0.517 7
35 －1 0 0 1 0 0.438 3
度为50～60 ℃，柠檬酚含量明显上升，且于60 ℃时达到
36 1 0 0 －1 0 0.485 2
最大值；当超声温度＞60 ℃时，柠檬酚的含量又有所下 37 －1 0 0 －1 0 0.568 3
降，详见图3E。 38 0 0 －1 0 1 0.421 5
39 0 0 0 0 0 0.627 7
2.4 Box-Behnken设计-响应面法优化提取工艺
40 0 1 －1 0 0 0.510 7
2.4.1 试验设计 根据“2.3”项下单因素试验结果和响 41 －1 0 0 0 －1 0.476 8
应面中心组合试验设计原理，选取乙醇体积分数（A）、固 42 －1 1 0 0 0 0.511 8
43 0 0 0 0 0 0.627 7
液比（B）、硫酸铵加入量（C）、超声时间（D）、超声温度
44 0 －1 －1 0 0 0.449 8
（E）等5个因素为响应因素，以柠檬酚含量为响应值，运 45 0 0 1 －1 0 0.523 2
用 Design-Expert 8.0.6 软件设计 5 因素 3 水平响应面试 46 －1 0 －1 0 0 0.520 6
验，因素与水平见表2，试验方案及结果见表3。 Y＝0.630+3.211×10 － 3 A+0.015B－0.010C－0.013D－
2.4.2 模型建立与方差分析 采用 Design-Expert 8.0.6 0.019E － 0.045AB + 0.015AC + 0.048AD + 0.018AE －
软件对试验数据进行拟合，并建立二次多元回归方程： 4.720×10 BC－5.124×10 BD－0.063BE+2.843×10 CD+
－3
－3
－3
·1088 · China Pharmacy 2020 Vol. 31 No. 9 中国药房 2020年第31卷第9期