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solid-liquid ratio，（NH4 ） 2SO4 addition amount，ultrasonic time and ultrasonic temperature as factors，based on the single factor
tests，Box-Behnken design-response surface methodology was used to optimize the extraction technology of citrusinol. RESULTS：
The optimized extraction technology of citrusinol included that ethanol volume fraction was 95.35％，the solid-liquid ratio was 1 ∶ 50.35
（g/mL），（NH4 ） 2SO4 addition amount was 4.49 g，ultrasonic time was 48.7 min，ultrasonic temperature was 57.6 ℃. In 3 times of
validation tests，the extraction rates of citrusinol were 0.637 8，0.638 4，0.625 4 mg/g，respectively，which was close to predicted
value（0.630 5 mg/g）. CONCLUSIONS：The optimized ultrasonic-assisted ethanol-（NH 4 ） 2SO 4 aqueous two-phase extraction
technology is stable and feasible，and can be used for the extraction of citrusinol from D. caudatum.
KEYWORDS Desmodium caudatum；Citrusinol；Aqueous two-phase extraction；Ultrasonic extraction；Box-Behnken design；
Response surface methodology；Technology optimization

小槐花[Desmodium caudatum（Thunb.）DC.]为豆科 3200DE 型超声波清洗器（昆山洁力美超声仪器有限公
山蚂蝗属植物，以全株入药，为广西壮、瑶民族常用药 司）；LDZ4-0.8A型离心机（北京医用离心机厂）。
[1]
材，被收载于《广西中药材标准》 、《广西壮族自治区壮 1.2 药品与试剂
[3]
[2]
药质量标准》 、《中国瑶药学》 。小槐花壮药名为棵文 小槐花药材采自广西鹿寨县，经广西壮族自治区中
沾，瑶药名为握麻红，主要分布于广西、安徽、浙江、江西 医药研究院卢文杰主任中药师鉴定为小槐花[D. cauda-
等省。本课题组前期对壮瑶药小槐花进行了深入的研 tum（Thunb.）DC.]的全草，标本存放于广西壮族自治区
究，并从中提取分离出了一种A环并吡喃环黄酮结构的 中医药研究院中药研究所标本室；柠檬酚对照品（本实
化合物柠檬酚（化学结构见图1）；随后的活性研究发现， 验室自制，HPLC 法检测纯度：≥98％）；甲醇为色谱纯，
该化合物可通过破坏人肝癌HepG2细胞的F-actin骨架， 磷酸、乙醇、硫酸铵等其余试剂均为分析纯，水为超
阻止纺锤体形成，从而抑制癌细胞的增殖，并呈剂量依 纯水。
赖性，提示柠檬酚具有潜在的抗肿瘤作用 [4-9] 。 2 方法与结果
2.1 小槐花粗提物的制备
称取小槐花药材600 g，加20倍量（mL/g）50％乙醇，
于90 ℃回流提取2次，每次1 h；合并2次提取液，减压浓
缩至200 mL后，加乙醇500 mL醇沉；滤过，滤液蒸干，即
得粗提物35.41 g。
2.2 柠檬酚的含量测定
采用HPLC法检测。
图1 柠檬酚的化学结构
2.2.1 色谱条件 色谱柱：Waters XBrige-C18 （250 mm×
Fig 1 Chemical structure of citrusinol
4.6 mm，5 μm）；流动相：甲醇-0.1％磷酸水溶液（80 ∶ 20，
目前，黄酮类化合物多以有机溶剂回流或超声提
V/V）；测定波长：282 nm；流速：1.0 mL/min；柱温：25 ℃；
取，溶剂用量大且后续处理复杂 [10-11] 。双水相提取具有
进样量：10 μL。
分相快、条件温和、操作安全方便、污染小等优点，现已
2.2.2 溶液的制备 ①对照品贮备液：精密称取柠檬酚
广泛应用于中药有效成分分离和生物化学等领域 [12-15] 。
对照品 1.0 mg，加无水乙醇定容至 5 mL，超声（功率：
中药中的活性成分大多为微量成分，且初生代谢产物和
200 W，频率：40 kHz，下同）使溶解，制得质量浓度
次生代谢产物共存，因此为提高活性成分的提取效果，
为 200 μg/mL 的对照品贮备液，备用。②供试品溶液：
本研究以乙醇-硫酸铵为双水相 （与常见的碳酸钠、磷 精密称取“2.1”项下所得粗提物 0.2 g，加无水乙醇定容
[16]
酸氢二钠、氯化铵等盐相比，硫酸铵在乙醇中的溶解度 至50 mL，超声使溶解，制得供试品溶液。③空白溶液：
更低，更利于黄酮类成分的分离），利用超声与双水相体 取适量无水乙醇溶液经超声处理后，作为空白溶液。
系相结合的方法提取小槐花中的柠檬酚；以柠檬酚含量 2.2.3 系统适用性试验 取对照品溶液（50 μg/mL，用
为评价指标，采用Box-Behnken设计-响应面法优化其提 无水乙醇将“2.2.2①”项下对照品贮备液稀释所得）、供
取工艺，旨在为小槐花药材中活性成分的有效提取及其 试品溶液、空白溶液各适量，按“2.2.1”项下色谱条件进
进一步开发利用提供理论依据。 样分析，记录色谱图（见图2）。结果，供试品溶液与对照
1 材料 品溶液在相应位置有相同的色谱峰，且空白溶液对待测
1.1 仪器 物的测定无干扰；理论板数按柠檬酚计不低于2 000，分
2695 型高效液相色谱（HPLC）仪（美国 Waters 公 离度＞1.5，表明本方法专属性强。
司）；HH-S2 型数显恒温水浴锅（金坛市医疗仪器厂）； 2.2.4 线性关系考察 取“2.2.2①”项下对照品贮备液
JJ224BC 型 电 子 天 平（常 熟 双 杰 测 试 仪 器 厂）；KS- 适量，用无水乙醇稀释，得质量浓度分别为 6.25、12.5、

·1086 · China Pharmacy 2020 Vol. 31 No. 9 中国药房 2020年第31卷第9期