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大于 0.900，表明其与对照指纹图谱均具有较好的一致 品溶液，再喷以5％三氯化铝乙醇溶液进行显色 [12，14] 。而
性。但是各样品色谱峰的面积和数量有一定差异，表明 本研究以山柰酚-3-O-β-D-槐糖苷为指标成分对木贼进
来自不同产地的木贼样品存在一定的质量差异。10 批 行 TLC 鉴别，采用的是 70％乙醇超声提取、乙醇溶解制
木贼样品的 HPLC 叠加指纹图谱和对照指纹图谱见图 备供试品溶液、在紫外光（波长为 254 nm）下检视，方法
3，相似度评价结果见表5。 更简便，重复性更好，同时减少了强酸、喷雾接触，更益
4（S） 于检测员的化学防护。
2 3
61.55 1 3.2 浸出物含量测定条件的考察
49.24 S10 在前期研究中，笔者考察了冷浸法和热浸法测定浸
S9
S8
36.93 S7 出物含量的差异，结果两种方法测得的浸出物含量差异
mAU S6
24.62 无统计学意义（P＞0.05），因此在本研究选择更为简便
S5
S4
12.31 的冷浸法进行浸出物的含量测定。接着，笔者又进一步
S3
S2
－3.09 S1 考察了以不同体积分数（50％、70％、95％）乙醇为溶剂
0 5.72 11.44 17.16 22.88 28.60 34.32 40.04
t，min 时对醇溶性浸出物提取效果的影响，结果以70％乙醇作
A.叠加指纹图谱
为溶剂时测得的醇溶性浸出物含量最高，因此在本研究
4（S） 中选择70％乙醇作为醇溶性浸出物的提取溶剂。
24.62
3.4 供试品溶液制备条件的考察
mAU 12.31 1 2 3 在前期研究中，笔者以待测物的相对含量为指标，
分别对供试品溶液制备的不同提取方法（浸提、超声、加
－3.09
0 5.72 11.44 17.16 22.88 28.60 34.32 40.04 热回流）、不同提取时间（0.5、1、1.5 h）、不同提取次数（1、
t，min
B.对照指纹图谱（R） 2、3 次）和不同提取溶剂倍数（25、50、100）进行了考察，
图3 10批样品的HPLC叠加指纹图谱和对照指纹图谱 最终选择了50倍水超声提取2次、每次0.5 h为木贼供试
Fig 3 HPLC superimposed fingerprint and control 品的制备方法（此条件下待测物的相对含量较高）。
fingerprint of 10 batches of E. hyemale 3.5 HPLC色谱条件的考察
笔者前期对0.4％磷酸-乙腈和0.1％三氟乙酸-乙腈
表5 10批木贼样品的相似度评价结果
两种洗脱系统进行了比较，发现以后者为洗脱体系时所
Tab 5 Similarity evaluation results of 10 batches of E.
hyemale 得色谱图的分离度和峰形较好，故选择其作为本研究的
洗脱系统。笔者还对比了 Inertsil C18 （250 mm×4.6 mm，
样品编号 S1 S2 S3 S4 S5 S6 S7 S8 S9 S10 R
S1 1.000 0.891 0.854 0.902 0.943 0.951 0.875 0.858 0.922 0.862 0.964 5 μm）、YMC Pack ODS（250 mm×4.6 mm，5 μm）、Agi-
S2 0.891 1.000 0.968 0.932 0.824 0.858 0.938 0.964 0.835 0.966 0.932 lent Zorbax SB-C18 （250 mm×4.6 mm，5 μm）等 3 种不同
S3 0.854 0.968 1.000 0.951 0.831 0.874 0.945 0.954 0.837 0.956 0.925 色谱柱的色谱分离效果，结果发现 Inertsil C18柱的柱效
S4 0.902 0.932 0.951 1.000 0.845 0.887 0.978 0.942 0.874 0.942 0.954
S5 0.943 0.824 0.831 0.845 1.000 0.927 0.845 0.833 0.941 0.871 0.911 较好。此外，通过全波长扫描发现，265 nm 为山柰
S6 0.951 0.858 0.874 0.887 0.927 1.000 0.866 0.872 0.929 0.838 0.972 酚-3-O-β-D-槐糖苷的最大吸收波长，且在该波长下所得
S7 0.875 0.938 0.945 0.978 0.845 0.866 1.000 0.939 0.872 0.963 0.932 图谱的信息丰富、分离度好，因此选择265 nm作为本研
S8 0.858 0.964 0.954 0.942 0.833 0.872 0.939 1.000 0.861 0.925 0.941
S9 0.922 0.835 0.837 0.874 0.941 0.929 0.872 0.861 1.000 0.862 0.962 究的检测波长。
S10 0.862 0.966 0.956 0.942 0.871 0.838 0.963 0.925 0.862 1.000 0.950 综上所述，本研究建立了以山柰酚-3-O-β-D-槐糖苷
R 0.964 0.932 0.925 0.954 0.911 0.972 0.932 0.941 0.962 0.950 1.000 为指标成分的TLC鉴别和HPLC含量测定方法，新增了
3 讨论 木贼水溶性成分的HPLC指纹图谱鉴别方法，同时新拟
3.1 TLC鉴别条件的选择 定了杂质、灰分、水溶性浸出物的检测限度。所建立的
前期笔者分别考察了不同展开剂[乙酸乙酯-丙酮- 方法操作简单、准确、重复性好，可用于木贼的质量控

甲酸-水（8 ∶ 1 ∶ 0.5 ∶ 0.5，V/V/V/V）、正丁醇-乙酸-水（14 ∶ 1 ∶ 制。但本研究尚未成功鉴定出木贼水溶性成分HPLC指
0.5，V/V/V）和乙酸乙酯-甲酸-水（8 ∶ 2 ∶ 0.2，V/V/V）]、不同 纹图谱中各共有峰所代表的化学成分，在后期研究中还
观察方法（紫外光254 nm、紫外光366 nm、白光）、不同展 需结合液质联用和核磁等手段对各主要成分进行鉴定。
距（4、5、6 cm）对TLC鉴别结果的影响。结果显示，以正 参考文献
丁醇-乙酸-水（14 ∶ 1 ∶ 0.5，V/V/V）为展开剂、展距为4 cm、 [ 1 ] 国家药典委员会.中华人民共和国药典：一部[S]. 2015年
在紫外光 254 nm 条件下观察时，主要斑点的分离度良 版.北京：中国医药科技出版社，2015：63.
好，且斑点清晰。2015年版《中国药典》（一部）和文献报 [ 2 ] 张承忠，赵磊，李冲，等.木贼化学成分研究[J].中草药，
道的木贼TLC鉴别均以山柰素为指标成分，且需加热酸 2002，33（11）：978-979.
水解、乙酸乙酯萃取前处理，然后以甲醇溶解制备供试 [ 3 ] 李淑惠，李德坤，靳丹虹，等.木贼科植物研究概况Ⅰ：化

·1084 · China Pharmacy 2020 Vol. 31 No. 9 中国药房 2020年第31卷第9期