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急性肺栓塞是指由于体循环的各种栓子脱落阻塞                           吸附（ELISA）检测试剂盒（上海博麦德生物技术有限公
        肺动脉及其分支引起肺循环障碍的临床病理生理综合                             司 ，批 号 ：201853062、201847218）；生 长 分 化 因 子 15
        征，其发病率仅次于冠心病及高血压，目前临床上主要                           （GDF-15）、N 端 B 型利钠肽（NT-proBNP） ELISA 检测
        采用低分子肝素进行治疗           [1-3] 。Notch信号通路广泛存在          试剂盒（上海蓝基生物科技有限公司，批号：20352614、
        于脊椎动物和无脊椎动物的多个物种之中，主要通过调                            19263357）；Notch2、Notch3、DLL1、JAG2、β-肌动蛋白
        控细胞分化、增殖和凋亡来影响细胞的正常生长，在调                           （β-actin）的特异性引物均由上海生物工程股份有限公司
        节机体内稳态中起重要作用             [4-5] 。据相关文献报道，该信          合成。
        号通路及其相关蛋白的水平异常与肺组织的发育和损                             1.3 动物
        伤修复密切相关         [6-7] 。黄芩素是从唇形科植物高黄芩                    清洁级健康成年 SD 大鼠 36 只，雄性，6 周龄，体质
        （Scutellaria altissima L.）中提取分离得到的单体化合              量（180±20）g，购自辽宁长生生物技术有限公司，实验
        物。研究表明，黄芩素具有抗炎、抗免疫、抗氧化应激、                           动物生产许可证号：SCXK（辽）2015-0003。大鼠于温度
        抗肿瘤、修复肺组织损伤及保护肺功能等药理作用                      [8-10] 。  （22±2）℃、湿度（50±10）％的动物房中适应性喂养 1
        随着研究的深入，还有学者发现黄芩素与地塞米松、长                            周后进行实验。
        春新碱、来那度胺等药物联合使用后，能够通过调节                             2 方法
        Notch信号通路，进而发挥对白血病、骨髓瘤等疾病的治
                                                            2.1 急性肺栓塞大鼠模型的建立
        疗作用 。但有关黄芩素对急性肺栓塞模型大鼠Notch
              [11]
                                                                将36只SD大鼠随机分为正常对照组（n＝6）和造模
        信号通路的调节作用，目前尚无文献明确报道。因此，
                                                            组（n＝30）。参照文献方法 ，造模组大鼠采用自体血
                                                                                    [12]
        本研究通过考察黄芩素对急性肺栓塞模型大鼠血小板
                                                            栓法复制急性肺栓塞模型：先从大鼠自身眼眶静脉取
        聚集的抑制及对肺组织的保护作用，并从 Notch 信号通
                                                            血，制成直径为0.5 mm大小的颗粒状血栓混悬液；然后
        路角度探讨其作用机制，为黄芩素的药理作用研究提供
                                                            腹腔注射 7％水合氯醛对大鼠进行麻醉，钝性分离右颈
        新的思路和参考。
                                                            静脉，迅速从右颈总静脉注入 0.5 mL 血栓混悬液（约
        1 材料
                                                            15～20 个血栓）。当大鼠出现明显发绀和呼吸加快、加
        1.1  仪器                                             深时，则视为造模成功。正常对照组大鼠行假手术（除
            AD340型酶标仪（美国Beckman Coulter公司）；DY-
                                                            不注入血栓混悬液外，其余与造模组同法操作）。将造
        CZ-24DN 型双垂直电泳仪、DYCZ-40G 型转印电泳仪
                                                            模成功的大鼠采用随机数字表法分为模型对照组、阳性
        （北京海天友诚科技有限公司）；T-100 型聚合酶链反应
                                                            药物组和黄芩素低、中、高剂量组，每组6只。黄芩素低、
        （PCR）仪、Gel Doc XR 型凝胶成像仪[伯乐生命医学产
                                                            中、高剂量组大鼠分别腹腔注射 25、50、100 mg/kg 黄芩
        品（上海）有限公司]；DFC360 FX 型荧光显微镜（德国
                                                              [13]
                                                            素 （以生理盐水为溶剂），阳性药物组大鼠皮下注射0.01
        Leica 公司）。
                                                                              [14]
                                                            mL/kg 低分子肝素钙 ，正常对照组和模型对照组大鼠
        1.2  药品与试剂
                                                            腹腔注射等体积生理盐水，每天 1 次，连续给药 7 d 。
                                                                                                         [14]
            黄芩素对照品（武汉远启医药化工有限公司，批号：
                                                            末次给药24 h后进行各项指标检测。
        20180623，纯度：＞98％）；低分子肝素钙注射液[葛兰素
                                                            2.2  大鼠血浆血小板聚集率和血小板活化指数（RPI）
        史克（中国）投资有限公司，批号：20180726，规格：0.5
                                                            测定
        mL]；肝 素（上 海 甄 准 生 物 科 技 有 限 公 司 ，批 号 ：
        20190622，纯度：＞98％）；Notch2、Notch3兔单克隆抗体                   自大鼠眼眶后静脉丛取血，置于含有肝素的抗凝管
        以及RIPA蛋白裂解液、超敏ECL化学发光试剂盒、RNA                        中，一部分血液样本以800 r/min离心10 min，取上清液，
        提取试剂盒、cDNA 反转录试剂盒 2X PCR Master Mix                 即得富血小板血浆（PRP）；剩余部分血浆以 3 000 r/min
        （碧云天生物科技有限公司，批号：AF7590、AF7592、                      离心10 min，取上清液，即得贫血小板血浆（PPP）。对血
        P0013B、P0018S、R0011、D7170M、D7228）；Notch 信号          浆中的血小板进行计数后，用 PPP 调 PRP 中血小板数
                                                                            －1
                                                                   9
                                                                          9
        配体 DLL1 兔单克隆抗体、Notch 信号配体 JAG2 兔单克                  至 3×10 ～4×10 L ，然后取调节后血浆 250 μL，置于
        隆抗体、甘油醛-3-磷酸脱氢酶（GAPDH）兔单克隆抗体、                       37 ℃恒温培养箱中温育5 min，分别加入诱导剂ADP溶
        辣根过氧化物酶标记山羊抗兔免疫球蛋白G（lgG）二抗                          液（5 μmol/L）和AA溶液（5 mmol/L）各10 μL，用血小板
        （武汉三鹰生物技术有限公司，批号：20230-1-AP 、                       聚集仪测量血小板最大聚集率。另一部分血液样本分
        19696-1-AP 、10494-1-AP、SA00001-2）；血浆二磷酸腺苷           别用乙二胺四乙酸（EDTA）及含 4％甲醛的 EDTA 溶液
        （ADP）溶 液（上 海 榕 柏 生 物 技 术 有 限 公 司 ，批 号 ：             稀释，并通过全自动血细胞分析仪对血液样本中红细
        RBX-82154）；花生四烯酸（AA）溶液（上海沪峥生物科                      胞和血小板进行计数，然后计算 PRI：PRI＝[血小板计
        技有限公司，批号：HZD-2312）；血小板颗粒膜蛋白                         数 （EDTA） /血小板计数 （EDTA-4％甲醛） ]×K。式中 K 为校正系数，
        （CD62P）、血小板溶酶体颗粒膜蛋白（CD63）酶联免疫                       K＝红细胞计数 （EDTA） /红细胞计数 （EDTA-4％甲醛） 。


        ·1092  ·  China Pharmacy 2020 Vol. 31 No. 9                                  中国药房    2020年第31卷第9期
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