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0.240 间（20～60 min）、超声温度（30～70 ℃）等因素 进行单
0.200
0.160 柠檬酚 因素试验。
AU 0.120
0.080
0.040 表1 加样回收率试验结果（n＝6）
0
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 Tab 1 Results of recovery tests（n＝6）
t，min
A.对照品溶液 称样量，g 样品含量，mg 加入量，mg 测得量，mg 加样回收率，％ 平均加样回收率，％ RSD，％
1.021 5 0.586 2 0.60 1.192 9 101.12
0.160
0.120 1.024 1 0.595 6 0.60 1.215 6 103.52
AU 0.080 1.035 4 0.605 4 0.60 1.195 2 98.30
0.040 柠檬酚 1.014 2 0.568 4 0.60 1.184 2 102.63 100.32 2.57％
0
1.024 5 0.587 9 0.60 1.168 7 96.80
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 1.014 7 0.570 2 0.60 1.167 4 99.53
t，min
B.供试品溶液 2.3.1 乙醇体积分数 精密称取小槐花粗提物0.2 g，在
0.050
0.040 固液比为 1 ∶ 40、硫酸铵加入量为 1.5 g、超声温度为
0.030
AU 0.020 30 ℃、超声时间为20 min的条件下，分别用80％、85％、
0.010
0
－0.010 90％、95％、100％乙醇进行提取。取提取液适量，按
0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 20 “2.2.2②”项下方法制备供试品溶液，按“2.2.1”项下色谱
t，min
C.空白溶液 条件进样分析，并按外标法计算样品中柠檬酚的含量。
图2 高效液相色谱图 结果，乙醇的体积分数可影响双水相的分水能力，当乙
Fig 2 HPLC chromatograms 醇体积分数为80％～90％时，柠檬酚含量有随乙醇体积
25、50、100、200 μg/mL 的系列标准溶液，按“2.2.1”项下 分数升高而降低的趋势；当乙醇体积分数＞90％时，柠
色谱条件进样分析，记录色谱图。以待测物质量浓度 檬酚含量有随乙醇体积分数升高而升高的趋势；当乙醇
（c，μg/mL）为横坐标、峰面积（A）为纵坐标进行线性回 体积分数为 100％时，柠檬酚的含量最高，且趋于稳定，
2
归，得回归方程为 A＝48 790c+64 160（R ＝0.999 3），柠 详见图3A。
檬酚检测质量浓度的线性范围为6.25～200 μg/mL。 0.5 0.6
2.2.5 定量限与检测限考察 取“2.2.4”项下线性范围 mg/g 0.4 mg/g 0.5
0.4
下限质量浓度（6.25 μg/mL）的标准溶液，用无水乙醇倍 柠檬酚含量， 0.3 柠檬酚含量， 0.3
0.2
0.2
比稀释，以信噪比 10 ∶ 1、3 ∶ 1 分别计算定量限、检测限。 0.1 0.1
结果，柠檬酚的定量限、检测限分别为293、88 ng/mL。 0 75 85 95 105 0 1∶35 1∶40 1∶45 1∶50 1∶55 1∶601∶65
乙醇体积分数，％ 固液比，g/mL
2.2.6 精密度、重复性与稳定性试验 ①取“2.2.4”项下 A.乙醇体积分数的影响 B.固液比的影响
50 μg/mL柠檬酚标准溶液，按“2.2.1”项下色谱条件连续 0.6 0.7
0.6
进样 6 次，记录色谱图。结果，柠檬酚峰面积的 RSD 为 mg/g 0.5 mg/g 0.5
0.4
0.4
1.35％（n＝6），表明仪器精密度良好。②取同一批粗提 柠檬酚含量， 0.3 柠檬酚含量， 0.3
0.2
0.2
物样品共6份，按“2.2.2②”项下方法制备供试品溶液，再 0.1 0.1
0 0
按“2.2.1”项下色谱条件进样分析，按外标法计算柠檬酚 0.5 1.5 2.5 3.5 4.5 5.5 6.5 10 20 30 40 50 60 70
硫酸铵加入量，g 超声时间，min
的含量（mg/g）。结果，样品中柠檬酚的平均含量为 C.硫酸铵加入量的影响 D.超声时间的影响
0.587 2 mg/g，RSD 为 1.01％（n＝6），表明本方法的重复 mg/g 0.7
0.6
性较好。③取同一份供试品溶液，在室温下分别放置0、 0.5
0.4
2、4、6、12、24 h 时按“2.2.1”项下色谱条件进样分析，得 柠檬酚含量， 0.3
0.2
柠檬酚峰面积的RSD为0.98％（n＝6），表明供试品溶液 0.1 0
20 30 40 50 60 70 80
在室温下放置24 h内的稳定性良好。 超声温度，℃
2.2.7 加样回收率试验 精密称取已知柠檬酚含量的 E.超声温度的影响
图 3 乙醇体积分数、固液比、硫酸铵加入量、超声时间
小槐花粗提物约 1.0 g，共 6 份，分别加入一定量的对照
及温度对柠檬酚含量的影响
品贮备液，按“2.2.2②”项下方法制备供试品溶液，再按
Fig 3 Effects of ethanol volume fraction，solid-liquid
“2.2.1”项下色谱条件进样分析，记录峰面积，计算柠檬
ratio，（NH4） 2SO4 addition amount，ultrasonic
酚的加样回收率，结果见表1。
2.3 单因素试验 time and temperature on the content of cit-
rusinol
精密称取小槐花粗提物适量，以柠檬酚含量为评价
指标，对乙醇体积分数（80％～100％）、固液比[1 ∶ 40～ 2.3.2 固液比 精密称取小槐花粗提物0.2 g，在乙醇体
1 ∶ 60（g/mL，下同）]、硫酸铵加入量（1.5～5.5 g）、超声时 积分数为 80％、硫酸铵加入量为 1.5 g、超声温度为

中国药房 2020年第31卷第9期 China Pharmacy 2020 Vol. 31 No. 9 ·1087 ·