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technology is stable and feasible，which is suitable for purifieation of total flavonoids from A. tsao-ko.
KEYWORDS Amomum tsao-ko；Total flavonoids；Content determination；Macroporous absorption resin；Purification technology

草果为姜科豆蔻属多年生常绿丛生草本植物草果 定量的草果粉末，按照文献报道的提取工艺条件 ：乙醇
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（Amomum tsao-ko Crevost et Lemaire）的干燥成熟果实， 体积分数 60％、料液比 1 ∶ 50（g/mL，下同）、提取温度
主产于我国云南、广西、贵州等地，越南亦有分布。该药 60 ℃、超声（功率：160 W，频率：60 kHz）提取 60 min，趁
性温、味辛，归脾、胃经，具有燥湿温中、截疟除痰的功 热抽滤；重复上述操作2次，合并滤液，浓缩蒸干，即得草
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效 。草果作为一种重要的药食两用植物，常被作为调 果总黄酮粗品（每1 g粗品相当于生药73.10 g）。
味香料用于菜肴烹饪 ；临床将其用于治疗寒湿内阻、脘 2.2 总黄酮含量测定
[2]
腹胀痛、痞满呕吐、胃功能紊乱、消化不良等症 。现代 采用HPLC法测定草果总黄酮的含量。
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药理研究证实，草果具有调节胃肠道功能紊乱、抗氧化、 2.2.1 芦丁对照品溶液的制备 精密称取芦丁对照品
抗菌、抗肿瘤、降脂和降糖等多种药理作用 [3-8] 。草果总 7.02 mg，置于 5 mL 量瓶中，加适量甲醇超声（功率：160
黄酮作为草果的有效成分群，具有抗氧化、清除自由基 W，频率：60 kHz）使溶解，放冷，再用甲醇定容，摇匀，即
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的作用 。目前，草果总黄酮的提取多采用溶剂提取法， 得质量浓度为1.404 mg/mL的芦丁对照品溶液。
但该法溶剂用量大，所得总黄酮含量不高，还需进一步
2.2.2 供试品溶液的制备 取“2.1”项下所得的草果总
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纯化 。此外，草果总黄酮的纯化主要采用聚酰胺树脂
黄酮粗品适量，用甲醇溶解，置于 5 mL 量瓶中，再用甲
和大孔吸附树脂法 [11-12] 。其中，聚酰胺树脂纯化存在耗
醇定容，摇匀，即得供试品溶液。
时长以及处理、使用过程中容易堵塞等缺点；而大孔吸
2.2.3 阴性对照溶液的制备 按“2.1”项下方法制得不
附树脂可最大限度地对中药有效部位去粗取精，具有选
含草果药材的阴性样品，再用适量甲醇溶解并定容于 5
择性好、吸附容量大、再生处理简便等优点，在黄酮类化
mL量瓶中，即得阴性对照溶液。
合物的分离纯化中应用广泛 [13-14] 。为此，本研究在现有
2.2.4 色谱条件 色谱柱：Eclipse Plus C18 （150 mm×3.0
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提取工艺 的基础上，以含量（以芦丁计）为指标，采用大
mm，2.7 μm）；流动相：乙腈-1％醋酸水溶液（15 ∶ 85，
孔吸附树脂法纯化草果总黄酮，并对其纯化工艺进行优
V/V）；柱温：40 ℃；流速：0.8 mL/min；检测波长：256 nm；
化，以期为草果总黄酮提取物的纯化和制备提供参考。
进样量：10 μL。
1 材料
2.2.5 专属性 取“2.2.1”项下对照品溶液以甲醇稀释
1.1 仪器
至质量浓度为 0.158 mg/mL，另取“2.2.2”“2.2.3”项下供
LC-1260 型高效液相色谱（HPLC）仪（美国 Agilent
试品溶液和阴性对照溶液各适量，按“2.2.4”项下色谱条
公司）；ME204 型分析天平（梅特勒-托利多仪器上海有
件进样测定，记录色谱图。结果，在该色谱条件下，芦丁
限公司）；BJ-750A 型功能粉碎机（德清拜杰电器有限公
的分离度良好，保留时间约为5.95 min，阴性对照对测定
司）；PHS-320型酸度计（成都世纪方舟科技有限公司）；
无干扰，色谱图详见图1。
THZ-320型台式恒温振荡器（上海精宏实验设备有限公
2.2.6 标准曲线的绘制 分别精密吸取“2.2.1”项下芦
司）。
丁对照品溶液0.1、0.2、0.4、0.6、0.8、1 mL，分别置于不同
1.2 药材与试剂
草果药材（批号：20180705）购自四川新绿色药业科 的 5 mL 棕色量瓶中，加甲醇定容，摇匀，得质量浓度分
技发展有限公司，经成都中医药大学药学院李敏教授鉴 别为 0.028、0.056、0.112、0.168、0.225、0.281 mg/mL 的系
定为姜科豆蔻属草本植物草果（A. tsao-ko Crevost et Le- 列标准溶液，经 0.45 μm 微孔滤膜滤过后，取续滤液 10
maire）的干燥成熟果实。 μL，按“2.2.4”项下色谱条件进样分析，记录色谱图。以
芦丁对照品（成都曼斯特生物科技有限公司，批号： 芦丁质量浓度（x，mg/mL）为横坐标、峰面积（y）为纵坐标
MUST-19010210，纯 度 ：99.47％）；HPD100、HPD300、 进行线性回归，得回归方程 y＝7 468.1x－60.438（r＝
HPD450、AB-8、X-5、D101型大孔吸附树脂（中山东鸿化 0.999 9）。结果表明，芦丁检测质量浓度的线性范围为
工有限公司，批号分别为20180618、20181126、20180626、 0.028～0.281 mg/mL。
20181005、20180716、20190111，粒径：0.3～1.25 mm）； 2.2.7 定量限与检测限 精密吸取“2.2.6”项下质量浓
甲醇、乙腈均为色谱纯，其余试剂均为市售分析纯，水为 度为 0.112 mg/mL 的芦丁对照品标准溶液适量，以甲醇
蒸馏水。 倍比稀释，按“2.2.4”项下色谱条件进样分析，分别以信
2 方法与结果 噪比 10 ∶ 1、3 ∶ 1 计算定量限与检测限。结果，定量限和
2.1 草果总黄酮的提取 检测限分别为437.5、109.4 ng/mL。
称取草果药材适量，粉碎，过二号筛。精密称取一 2.2.8 精密度试验 精密吸取“2.2.6”项下质量浓度为

·832 · China Pharmacy 2020 Vol. 31 No. 7 中国药房 2020年第31卷第7期