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度 。 使 用 10％ 十 二 烷 基 磺 酸 钠 - 聚 丙 烯 酰 胺 凝 胶 10 6 10 6
（SDS-PAGE）电泳，以 PVDF 膜进行转膜；室温下以 5％ 10 5 10 5
脱脂牛奶封闭 2 h，TBST 缓冲液漂洗 3 次；先后加入
PI 10 4 PI 10 4
RAD51 抗体、GAPDH 抗体（稀释度均为 1 ∶ 500）于 4 ℃
孵育 12 h，再加入二抗（稀释度 1 ∶ 5 000）于室温下孵育 10 3 10 3
60 min，然后采用 ECL 试剂进行化学发光检测。以 0 0
GAPDH 作为内参，采用凝胶成像仪分析，并以 Quantity 0 10 3 10 4 10 5 10 6 0 10 3 10 4 10 5 10 6
Annexin FITC Annexin FITC
One 4.6.6 图像处理软件分析目标蛋白条带的相对灰度 A.对照组 B.顺铂组
值，用来表示其相对表达量。试验均重复3次。 10 6 10 6
2.8 统计学方法 10 5 10 5
使用SPSS 20.0软件对实验数据进行统计分析。实 4
PI 10 4 PI 10
验数据均以 x±s 表示。多组间比较采用单因素方差分
10 3 10 3
析，组间两两比较采用LSD-t检验，同一指标不同时间点
的比较采用重复测量方差分析。P＜0.05为差异有统计 0 0
学意义。 0 10 3 10 4 10 5 10 6 0 10 3 10 4 10 5 10 6
Annexin FITC Annexin FITC
3 结果 C.芹菜素低剂量组 D.芹菜素高剂量组
3.1 芹菜素对A549/DDP细胞增殖的影响 图1 各组A549/DDP细胞凋亡流式细胞图
与对照组比较，在药物作用48、72 h后，各给药组细 Fig 1 Flow cytometries of A549/DDP cells apoptosis
胞增长数均显著降低（P＜0.05），而在作用 24 h 时各组 in each group
间细胞增长数差异均无统计学意义（P ＞ 0.05），详见表 表3 各组A549/DDP细胞凋亡率（x±±s，n＝3，％％）
2。为排除芹菜素本身可能存在的细胞毒性作用而造成 Tab 3 Apoptotic rate of A549/DDP cells in each group
对增敏试验结果的干扰，故选择以 10 μmol/L 芹菜素作 （x±±s，n＝3，％％）
用24 h来考察其对A549/DDP细胞顺铂敏感性的影响。 组别 48 h凋亡率
对照组 3.03±0.42
表2 各组A549/DDP细胞增殖情况（x±±s，n＝3）
顺铂组 13.75±1.32 #
Tab 2 Viability of A549/DDP cells in each group（x±± 芹菜素低剂量组 22.69±1.27 ##ΔΔ
s，n＝3） 芹菜素高剂量组 32.98±3.18 ##ΔΔ
ΔΔ
##
#
OD值（450 nm） 注：与对照组比较，P＜0.05，P＜0.01；与顺铂组比较，P＜0.01
组别 # ##
24 h 48 h 72 h Note：vs. control group，P＜0.05，P＜0.01；vs. cisplatin group，
对照组 0.42±0.07 0.81±0.09 1.35±0.10 ΔΔ P＜0.01
顺铂组 0.39±0.05 0.72±0.07 # 1.18±0.12 # 表4 顺铂单用或联用芹菜素时各组A549/DDP细胞的
芹菜素低剂量组 0.37±0.08 0.60±0.06 ## 1.03±0.01 ## 增殖抑制率（x±±s，n＝3，％％）
芹菜素高剂量组 0.30±0.05 0.42±0.05 ## 0.81±0.09 ##
Tab 4 Inhibitory rate of A549/DDP cells treated by
#
##
注：与对照组比较，P＜0.05，P＜0.01
cisplatin alone or combined with apigenin in
#
Note：vs. control group，P＜0.05， P＜0.01
##
each group（x±±s，n＝3，％％）
3.2 芹菜素对A549/DDP细胞凋亡的影响
顺铂质量浓度，μg/mL 顺铂单用组 芹菜素联用组
与对照组比较，各给药组 A549/DDP 细胞凋亡率均
1 9.62±0.38 17.63±0.37
显著升高（P＜0.05 或 P＜0.01）；与顺铂组比较，芹菜素 2 12.87±0.78 24.05±1.14 ▲
低 、高 剂 量 组 A549/DDP 细 胞 凋 亡 率 显 著 升 高（P＜ 4 20.89±1.21 39.39±1.81 ▲
8 36.06±1.23 59.57±1.84 ▲
0.01）。各组细胞凋亡流式细胞图见图1，凋亡率检测结
16 60.47±0.50 82.28±0.43 ▲
果见表3。
注：与顺铂单用组比较，P＜0.05
▲
3.3 芹菜素联用对A549/DDP细胞顺铂敏感性的影响 Note：vs. cisplatin alone group， P＜0.05
▲
随着顺铂质量浓度增加，顺铂单用组 A549/DDP 细 3.4 芹菜素联用对顺铂作用后 A549/DDP 荷瘤裸鼠抑
胞的增殖抑制率逐渐升高；在联用 10 μmol/L 芹菜素 瘤情况的影响
后，A549/DDP 细胞的增殖抑制率（除顺铂质量浓度为1 建模结束后，与对照组比较，各给药组裸鼠体质量
μg/mL时）较相应质量浓度的顺铂单用组显著升高（P＜ 和移植瘤体积差异均无统计学意义（P＞0.05）；给药结
0.05），详见表 4。芹菜素联用组的 IC50为（5.81±0.47） 束后，与对照组比较，各给药组裸鼠体质量、移植瘤体积
μg/mL，较顺铂单用组的IC50 （14.44±0.52）μg/mL显著降 和瘤组织质量均显著降低，且芹菜素联用组显著低于顺
低（P＜0.05）；芹菜素的逆转指数为2.49。 铂单用组（P＜0.05）；芹菜素联用组的抑瘤率为68.72％，
中国药房 2020年第31卷第6期 China Pharmacy 2020 Vol. 31 No. 6 ·711 ·