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p53 protein in knee joint fluid were increased significantly，while the relative expression of BMP-2 in knee joint tissue decreased
significantly （P＜0.05）. Compared with model group， the appearance， histomorphology changes of knee joint cartilage in
administration groups were improved，Mankin scores were significantly decreased （P＜0.05）；the contents of COMP and p53
protein in the knee joint fluid were decreased significantly，and the relative expression of BMP-2 in the knee joint tissue were
increased significantly（P＜0.05），but there was no significant difference between Aconitum group and Sodium hyaluronate group
（P＞0.05）. CONCLUSIONS：Aconitum injection can improve synovitis inflammation，delay articular cartilage degeneration，
promote cartilage repair and protect joints of KOA model rabbits. The mechanism may be related to inhibiting COMP secretion，
decreasing p53 protein expression and promoting BMP-2 release.
KEYWORDS Aconitum injection；Knee osteoarthritis；Cartilage oligomeric matrix protein；p53 protein；Bone morphogenetic
protein 2；Rabbit

骨性关节炎（OA）又称为退行性关节炎，是一种软 号：1803F0109）；10％EDTA 试液（北京中山生物技术有
骨退变损伤、关节边缘和软骨下骨反应性增生的退行性 限公司）；无水乙醇（天津富宇化工厂，批号：20180105）；
病变，多以关节肿胀、疼痛、畸形、活动受限为主要临床 苏木精、伊红试剂（北京索莱宝科技有限公司，批号：
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表现 。现代医学认为，软骨退变主要是由细胞因子表 20180212、20180118）；戊巴比妥钠（北京普博斯生物科
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达异常导致软骨降解造成的 。目前，临床非手术治疗 技有限公司）；0.9％氯化钠注射液（哈尔滨三联药业股份
方案常采用关节腔注射玻璃酸钠注射液，该药具有润滑 有限公司，批号：180726A01，作生理盐水使用）；其余试
关节、缓解疼痛、抑制炎症的作用。但在临床实践中发 剂均为分析纯或实验室常用规格；水为蒸馏水。
现，玻璃酸钠注射液关节腔注射短期疗效不佳，且偶有 1.3 动物
皮疹、一过性疼痛等不良反应。中药乌头具有祛风除 清洁级别新西兰大耳白兔24只，雄性，5月龄，体质
湿、抗炎止痛之功效，乌头注射液是以乌头提取物制备 量（2.50～2.80）kg，购自哈尔滨市松北区翔林养殖场，动
的中药注射剂，本课题组前期研究证实该注射液能抑制 物生产合格证号：SCXK（黑）2016-002。动物均适应性
关节液中炎症因子的分泌，具有抗炎止痛、保护软骨的 饲养1周后进行实验。
[3]
作用 。基于此，本研究通过建立兔膝关节骨性关节炎 2 方法
（KOA）模型，考察乌头注射液对关节液中软骨寡聚基质 2.1 分组、造模与给药
蛋白（COMP）、抑癌基因p53编码蛋白（p53蛋白）以及关 取 24 只兔，随机选取 6 只设为空白组，实验全程均
节软骨组织中骨形成蛋白 2（BMP-2）等表达的影响，进 不作处理；其余 18 只兔参照文献方法 进行造模：分别
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一步从软骨细胞凋亡、软骨细胞修复因子角度探索该注 在第1、4、7天时于兔耳缘静脉注射3％戊巴比妥钠溶液
射液对关节软骨的保护作用以及治疗OA的作用机制。 （30 mg/kg）麻醉后，在其右后膝关节腔一次性注射造模
1 材料 药液[由2％木瓜蛋白酶溶液和0.03 mol/L L-半胱氨酸溶
1.1 仪器 液按体积比2 ∶ 1配制的混合溶液]0.1 mL/kg，共计注射3
2135 型切片机（德国 Leica 公司）；Moticam3000 型 次。造模结束后继续喂养1周，若兔膝关节出现肿胀、活
显微摄影成像系统（美国 Moticam 公司）；H1650R 型高 动障碍即可认为造模成功。
速台式冷冻离心机（长沙湘仪离心机仪器有限公司）； 将造模成功的兔随机分为模型组、玻璃酸钠组、乌
[5]
BWS-5 型电热恒温箱（上海一恒科学仪器有限公司）； 头注射液组，每组6只。参照文献方法 ，分别在造模成
ESJ120-4A 型电子天平（沈阳龙腾电子科量仪器有限公 功后第 1、4、7 天时分别于其关节腔一次性注射生理盐
司）；CH-20 型光学显微镜（日本 Olympus 公司）；M2e 型 水、玻璃酸钠注射液、乌头注射液各0.1 mL/kg，各组兔均
多功能酶标仪（美国Molecular Devices公司）。 给药 3 次。3 组兔继续饲养 3 周后，与空白组兔一同
1.2 药品与试剂 取材。
玻璃酸钠注射液（山东博士伦福瑞达制药有限公 2.2 标本采集及处理
司，批号：20160409，规格：2.5 mL ∶ 25 mg）；乌头注射 各组兔经耳缘静脉注射空气处死，右后膝关节周围
液[上海北杰集团关东药业有限公司，批号：20160401， 脱毛、消毒后将1 mL生理盐水注射入关节腔内冲洗，充
规格：1 mL（含乌头原碱0.62 mg）]；L-半胱氨酸（美国Pu- 分活动膝关节后抽取关节液。将抽取的关节液以
ritans Pride公司，批号：500872-03）；木瓜蛋白酶（河北林 2 000 r/min 离心 15 min，取上层清液，在－20 ℃条件下
康生物科技有限公司，批号：2016022951）；COMP、p53 保存。
酶联免疫吸附法（ELISA）试剂盒（北京成林生物公司， 取完关节液后，切开兔右后膝关节囊，充分暴露软
批号：20180210、20180218）；PV-6001兔二步法检测试剂 骨，取胫骨平台内侧软骨，用10％EDTA试液脱钙，进行
盒（兔聚合物法检测系统）（北京中杉金桥生物公司，批 修块后，脱水、透明、浸蜡、包埋、切片（厚度5 μm），以苏

中国药房 2020年第31卷第6期 China Pharmacy 2020 Vol. 31 No. 6 ·715 ·