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than those of cisplatin group（P＜0.05 or P＜0.01）. After combined with apigenin，proliferation inhibition rate of A549/DDP cells
was increased significantly，compared with cisplatin alone group with the same concentration（P＜0.05）. The IC50 in the apigenin
combination group was（5.81±0.47）μg/mL，significantly lower than（14.44±0.52）μg/mL in cisplatin alone group（P＜0.05），and
reversal index of apigenin was 2.49. The results of nude mice tumor inhibition experiment showed that after combined with
apigenin，tumor inhibition rate of A549/DDP bearing nude mice was 68.72％，significantly lower than 33.82％ in cisplatin alone
group. Compared with A549 cells of normal group，relative expression of RAD51 mRNA and protein were increased significantly in
A549/DDP cells of control group （P＜0.05）. Compared with A549/DDP cells of control group，relative expression of RAD51
mRNA and protein in A549/DDP cells were decreased significantly in apigenin low-dose and high-dose groups （P＜0.05）.
Compared with cisplatin group，relative expression of RAD51 mRNA and protein in A549/DDP cells of apigenin low-dose and
high-dose group were decreased significantly （P＜0.05）. CONCLUSIONS：Apigenin can effectively reverse drug resistance of
cisplatin-resistant A549/DDP cells in human lung cancer. The mechanism may be related to the reduction of RAD51 gene
transcription and protein expression.
KEYWORDS Apigenin；RAD51；Non-small cell lung cancer；Cisplatin；Drug resistance；Sensitivity

目前，化疗是非小细胞肺癌（NSCLC）的主要治疗手 培养基（上海明丰生物科技有限公司）；胰蛋白酶消化
段之一，其标准化疗方案是以铂类为基础的联合化疗， 液、细胞裂解液（美国 R&D Systems 公司）；RAD51 质粒
但NSCLC患者在治疗过程中经常会出现对顺铂耐受的 中量抽提试剂盒、RAD51 兔单克隆抗体、GAPDH 兔单
现象，这对化疗效果造成了严重影响，导致患者生存率 克隆抗体（美国 Santa Cruz 公司）；辣根过氧化物酶标记
低、预后不良 。由于NSCLC细胞对顺铂耐药的机制十 羊抗兔 IgG 二抗（英国 Abcam 公司）；青霉素-链霉素双
[1]
分复杂，涉及多个基因和多条通路，因此阐明顺铂耐药 抗、二甲基亚砜（DMSO）、四甲基偶氮唑盐（MTT）试剂
机制及寻找逆转顺铂耐药的有效途径已成为临床研究 （美国 Sigma 公司）；Annexin Ⅴ-FITC/PI 凋亡检测试剂
关注的重点。随着分子生物学研究的不断深入和“精准 盒、RNA 提取 Trizol 试剂盒、TaqMan miRNA 反转录试
TM
医学”概念的提出，越来越多的研究者开始从基因层面 剂盒、SYBR Prellix Ex Taq 实时 PCR 试剂盒（日本 Ta-
[2]
去探讨疾病的发生进展以及潜在的诊疗措施 。RAD51 KaRa 公司）；PCR 引物（美国 Genewiz 公司中国总部）；
是一种新发现的蛋白基因，与细胞的生长密切相关，在 TBST 缓冲液（北京索莱宝科技有限公司）；PVDF 膜（美
细胞的增殖、分化、DNA修复和周期转换中发挥了重要 国 Bio-Rad 公司）；ECL 试剂盒、BCA 蛋白定量试剂盒、
[3]
的作用 。相关研究报道，在多种肿瘤（如肺癌、食管癌、 台盼蓝试剂盒（上海碧云天生物技术有限公司）；0.9％氯
乳腺癌等）组织中，RAD51蛋白呈异常高表达，提示其异 化钠注射液（天津百特医疗用品有限公司，作生理盐水
[4]
常表达与肿瘤的分化、侵袭和转移密切相关 。芹菜素 使用）；pH 7.4 磷酸盐缓冲液（PBS）为本实验室自制；其
（Apigenin）是一种生物类黄酮化合物，广泛存在于自然 余试剂均为分析纯或实验室常用规格；水为超纯水。
界的绿色植物中，能够促进癌细胞凋亡、抑制癌细胞增 1.3 细胞
殖和周期转换，具有较好的抗肿瘤作用，其在乳腺癌细 人肺癌细胞A549、顺铂耐药细胞A549/DDP均购自
胞中改善顺铂耐药的作用也已经得到证实 。基于此， 中国科学院上海细胞库。
[5]
本研究针对芹菜素调控 RAD51 基因表达途径考察了其 1.4 动物
对人肺癌 A549 细胞顺铂敏感性的影响及机制，以期为 BALB/c Nude 裸鼠，SPF级，雄性，8～10周龄，体质
芹菜素用于NSCLC等癌症的治疗提供实验基础。 量 20～25 g，购于上海西普尔-必凯实验动物有限公司，
1 材料 生产许可证号：SCXK（沪）2018-0006。裸鼠在SPF级实
1.1 仪器 验动物中心通风饲养，室内温度（21±2）℃，相对湿度
JY2000型精密电子天平（上海精密科学仪器有限公 40％～50％，空气更换频率15次/h，12 h光照明暗交替，
司）；680型酶标仪（美国Bio-Rad公司）；HERAcell BB15 实验场所及相关器材均严格清洗、消毒。裸鼠均适应饲
型 CO2细胞培养箱（德国 Heraeus 公司）；EPS300 型电泳 养1周后进行实验，期间统一标准喂食、饮水。
仪（上海天能科技有限公司）；UnioⅡ型聚合酶链式反应 2 方法
（PCR）仪（德国 Biometra 公司）；FACSCaliber 型流式细 2.1 细胞培养
胞仪（美国 BD 公司）；GDS8000 型凝胶成像仪（英国 将 A549 细胞和 A549/DDP 细胞常规培养于含 10％
UVP公司）；5804R型台式离心机（德国Eppendorf公司）。 胎牛血清的 RPM1640 培养基中，于 37 ℃、5％CO2条件
1.2 药品与试剂 下培养，然后以胰蛋白酶（1 g/L）消化传代，每3天传代1
顺 铂 原 料 药（山 东 齐 鲁 制 药 有 限 公 司 ，批 号 ： 次。其中，A549/DDP细胞培养液中添加顺铂（2 μg/mL）
H20183460，纯度：99.8％）；芹菜素原料药（美国Sigma公 以稳定耐药细胞株的耐药表型。取对数生长期细胞，以
司，批号：180623，纯度：≥98％）；胎牛血清、RPMI 1640 0.1％DMSO的RPMI 1640培养基稀释（下同），制成相应

中国药房 2020年第31卷第6期 China Pharmacy 2020 Vol. 31 No. 6 ·709 ·