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0.3 g对羟基苯甲酸甲酯、0.2 g对羟基苯甲酸丙酯、0.5 g 黄绵马酸BB
0.06
2，6-二叔丁基对甲酚，加热至 80 ℃溶解，搅匀，降温至
0.04
65 ℃，加入 1 g 黄绵马酸 BB 原料药搅拌，超声（功率： AU
0.02
500 W，频率：40 kHz）使其完全溶解，再加入 1 g 透皮吸
0
收促进剂搅拌均匀，作为油相，备用；称取 12 g 甘油、
0 5 10
0.02 g 乙二胺四乙酸二钠、纯化水适量（乳膏总量 100 t，min
A.对照品溶液
g），加热至65 ℃溶解，作为水相。将油相缓缓倒入水相
黄绵马酸BB
中，边加边搅拌至室温，即得。用不同的透皮吸收促进 0.06
剂分别制成含有 1％氮酮、2％氮酮、3％氮酮、4％氮酮、 0.04
AU
1％薄荷醇、1％丙二醇、1％油酸、1％氮酮+1％薄荷醇、 0.02
1％氮酮+1％丙二醇、1％氮酮+1％油酸、1％薄荷醇+1％ 0
0 5 10
丙二醇的黄绵马酸BB乳膏。同法制备不含透皮吸收促 t，min
进剂的黄绵马酸 BB 乳膏和不含黄绵马酸 BB 的阴性对 B.供试品溶液（含1％氮酮样品）
照乳膏。
0.04
2.2 黄绵马酸BB含量测定方法的建立
AU 0.02
采用UPLC法测定黄棉马酸BB的含量。
2.2.1 对照品溶液的制备 精密称取黄绵马酸BB对照 0
品约10 mg，置于10 mL量瓶中，加甲醇溶解、定容，制成 0 5 10
t，min
质量浓度为1 mg/mL的对照品溶液。 C.阴性对照溶液
2.2.2 供试品溶液的制备 精密称取黄绵马酸BB乳膏 图1 超高效液相色谱图
约 0.5 g，置于具塞锥形瓶中，加甲醇 50 mL，称质量，置 Fig 1 UPLC chromatograms
于65 ℃水浴中加热2 min，振摇使溶解，取出后，40 ℃下
2.2.7 重复性试验 精密称取黄绵马酸BB乳膏（含1％
超声（功率：500 W，频率：40 kHz）处理 10 min，放冷，用
氮酮样品）0.5 g，共 6 份，按“2.2.2”项下方法平行制备供
甲醇补足减失的质量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
试品溶液，再按“2.2.4”项下色谱条件进样测定，计算峰
2.2.3 阴性对照溶液的制备 精密称取阴性对照乳膏
面积，代入回归方程计算含量。结果，黄绵马酸BB乳膏
约 0.5 g，置于具塞锥形瓶中，按“2.2.2”项下方法制备成
中黄绵马酸 BB 的含量为 9.71 mg/g，RSD 为 1.14％（n＝
阴性对照溶液。
6），表明该方法重复性良好。
2.2.4 色谱条件 色谱柱：Cosmosil Cosmocore C18 （150
2.2.8 稳定性试验 取同一供试品（含1％氮酮样品）溶
mm×4.6 mm，2.6 μm）；流动相：甲醇-0.1％三氟乙酸溶液
液，于制备后室温下放置0、2、4、6、8、10、12 h时，分别按
（90 ∶ 10，V/V）；流速：1.0 mL/min；柱温：30 ℃；检测波长：
“2.2.4”项下色谱条件进样测定，记录峰面积。结果，黄
296 nm；进样量：10 μL（供试品溶液或阴性对照溶液）、5
绵马酸 BB 峰面积的 RSD 为 1.21％（n＝7），表明供试品
μL（对照品溶液）。对照品溶液、供试品溶液（含1％氮酮
溶液在室温下放置12 h内稳定性良好。
样品）和阴性对照溶液的UPLC图见图1。
2.2.9 加样回收率试验 精密称取黄绵马酸 BB 乳膏
2.2.5 线性关系考察 精密吸取“2.2.1”项下对照品溶
液适量，稀释制成黄绵马酸 BB 质量浓度为 0.996 7、 （含 1％氮酮样品）9 份，每份 0.25 g，分别加入高、中、低
9.997、39.87、79.74、199.3 μg/mL 的系列对照品溶液，按 质量浓度的对照品溶液（加入量与所取样品中待测成分
“2.2.4”项下色谱条件进样测定，记录峰面积。以黄绵马 的质量比为 1.2 ∶ 1、1 ∶ 1、0.8 ∶ 1），按“2.2.2”项下方法制备
酸 BB 峰面积为纵坐标（y）、质量浓度为横坐标（x）进行 成供试品溶液，再按“2.2.4”项下色谱条件进样测定，记
回 归 分 析 ，得 回 归 方 程 为 y＝2 650x － 2 374（R ＝ 录峰面积，代入回归方程计算含量和加样回收率。结
2
0.999 9）。结果表明，黄绵马酸BB质量浓度在0.996 7～ 果，黄绵马酸 BB 的平均加样回收率为 96.96％，RSD 为
199.3 μg/mL范围内与峰面积呈良好的线性关系。 1.05％（n＝9），表明该方法的准确度良好。
2.2.6 精密度试验 精密吸取“2.2.1”项下对照品溶液， 2.3 体外透皮试验
按“2.2.4”项下色谱条件，连续进样6次，记录峰面积。结 2.3.1 离体皮肤的制备 将大鼠颈椎脱臼处死，将腹部
果黄绵马酸 BB 峰面积的 RSD 为 0.60％（n＝6），表明仪 毛剃尽，剪下腹部皮肤，小心剥离皮下脂肪及黏膜组织，
器精密度良好。 用生理盐水洗净，滤纸吸干，用锡箔纸包好，－20 ℃ 冰

·592 · China Pharmacy 2020 Vol. 31 No. 5 中国药房 2020年第31卷第5期