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为参比制剂，比较其与国产硝酸甘油片仿制制剂中硝酸                           究所采用的溶出方法为桨法，转速为50 r/min。
        甘油的含量及有关物质，同时通过考察溶出曲线相似性                           2.2.2  溶出介质和溶出体积的选择               硝酸甘油属于酯
                                                                  [6]
        对两者的体外溶出行为进行一致性评价，从而为硝酸甘                           类药物 ，通过测定其酸度系数（pKa ），结果为 9.13（当
                                                                                       [5]
        油片的仿制药质量与疗效一致性评价工作提供技术支                            pKa＞3.0 时可看作为碱性药物） 。依据硝酸甘油的基
        持，为该品种质量标准的提高提供参考。                                 本特性，结合日本《仿制药生物等效性试验指导原则
        1 材料                                               （2012 版）》中的溶出度研究内容 ，筛选出 4 种溶出介
                                                                                        [7]
        1.1 仪器                                             质，分别为 pH 1.2 盐酸溶液、pH 4.0 醋酸盐缓冲液、pH
            Aglient 1260 型高效液相色谱仪（美国 Aglient 公             6.8 磷酸盐缓冲液、水。溶出体积依据硝酸甘油片进口
        司）；UDT-812 型智能溶出度试验仪（美国 Logan 公司）；                 药品注册标准JX20010267 ，选择常用体积中的500 mL。
                                                                                  [4]
        EDT-14Lx 型智能试验溶出仪（上海仪真分析仪器有限                       2.2.3 取样时间的选择 硝酸甘油片为舌下含服的快速
        公司）；PB-10 型酸度计、XS205 型电子分析天平[梅特                    起效降压药，其取样时间的选择与普通口服固体制剂的取
        勒-托利多国际贸易（上海）有限公司]；FAVD-25型真空                      样时间的选择存在一定差异。根据美国FDA溶出曲线库
        脱气仪（上海富科思分析仪器有限公司）。                                中的方法和硝酸甘油片进口药品注册标准JX20010267                   [4]
        1.2 药品与试剂                                          中溶出度、崩解时限检验方法，选择硝酸甘油片溶出度
            硝酸甘油溶液标准物质[中国食品药品检定研究                          试验的取样时间分别为1、2、3、5、8、10 min。
        院，批号：100236-201702，标示量：0.963％（m/m）]；硝酸             2.3 溶出曲线测定的方法学考察
        甘油片（参比制剂厂家 A，批号：N30287，规格：0.6 mg；                  2.3.1  对照品溶液的制备          精密称取硝酸甘油溶液标
        仿制制剂厂家 B、C、D、E，批号分别为：B0701、C0702、                  准物质适量，置于 10 mL 量瓶中，加无水乙醇溶解并稀
        D0703、E0704，规格：均为 0.6 mg）；盐酸、冰醋酸、醋酸                释至刻度，摇匀，即得质量浓度为0.1 mg/mL的对照品贮
        钠、磷酸二氢钾、氢氧化钠（国药集团化学试剂有限公                           备液。精密量取上述贮备液1 mL，置于100 mL量瓶中，
        司 ，批 号 分 别 为 ：20180102、20160118、20170521、          加溶出介质溶解并稀释至刻度，摇匀，即得对照品溶液。
        20170822、20170323，分析纯）；甲醇为色谱纯；水为纯                  2.3.2  供试品溶液的制备          取样品 1 片，分别以 pH 1.2
        化水。                                                盐酸溶液、pH 4.0 醋酸盐缓冲液、pH 6.8 磷酸盐缓冲液、
        2 方法与结果                                            水为溶出介质，按桨法、转速为 50 r/min、溶出介质体积
        2.1  含量测定与有关物质检查                                   为500 mL进行溶出度试验。分别于1、2、3、5、8、10 min
            按照硝酸甘油片进口药品注册标准 JX20010267                [4]  时，吸取溶出液 1 mL（每次取液后均补加相同温度的溶
        对收集到的1批参比制剂和4个厂家的各1批仿制制剂                           出介质 1 mL），用 0.45 μm 微孔滤膜过滤后，作为供试品
        进行含量测定和有关物质检查，结果见表1。                               溶液。平行操作12片。
        表1   参比制剂和仿制制剂中硝酸甘油及有关物质含量                         2.3.3  色谱条件       色谱柱：Waters Symmetry C18 （250
             测定结果（n＝2，％％）                                  mm×4.6 mm，5 μm）；流动相：甲醇-水（40 ∶ 60，V/V）；检测
        Tab 1  Determination results of nitroglycerin and re-  波长：220 nm；柱温：30 ℃；流速：1.0 mL/min；进样量：
               lated substances of reference preparation and  100 μL。
               imitative preparation（n＝2，％％）               2.3.4  线性关系考察        精密量取“2.3.1”项下对照品贮
                 硝酸甘油               有关物质含量                 备液0.1、0.2、0.5、1.0、2.0、5.0 mL，分别置于不同100 mL
        厂家  批号
                  含量   1，2-二硝酸甘油  1，3-二硝酸甘油  其他最大单个杂质 总杂质
        A   N30287  99.8  0.13     0.21      0.03   0.46   量瓶中，再分别以 pH 1.2 盐酸溶液、pH 4.0 醋酸盐缓冲
        B   B0701  98.3   0.11     0.15      0.09   0.55   液、pH 6.8磷酸盐缓冲液、水稀释至刻度后，按“2.3.3”项
        C   C0702  94.0   0.16     0.23      0.11   0.63   下色谱条件进样测定，记录峰面积。以硝酸甘油质量浓
        D   D0703  93.3   0.18     0.26      0.15   0.72
        E   E0704  96.7   0.17     0.22      0.13   0.49   度（x，ng/mL）为横坐标、峰面积（y）为纵坐标进行线性回
        2.2 溶出度试验条件的确定                                     归分析，结果见表2。
        2.2.1  溶出方法和转速的选择            经查阅美国 FDA 溶出           表2 硝酸甘油在不同溶出介质中的线性关系考察结果
        曲线库中的方法（https：//www.accessdata.fda.gov/scripts/    Tab 2 Results of linear relationship of nitroglycerin
        cder/daf/#apphist）和 硝 酸 甘 油 片 进 口 药 品 注 册 标 准              in different dissolution medias
                  [4]
        JX20010267 ，其中溶出方法均选择桨法，转速均为 50                    溶出介质            回归方程             r     线性范围，ng/mL
                                                                              5
                                                           pH 1.2盐酸溶液  y＝1.099 9×10 x－1.113×10 3  0.999 9  100～5 000
        r/min。另有文献研究表明，对于片剂，建议采用桨法、转
                                                                              5
                                                           pH 4.0醋酸盐缓冲液  y＝1.205 1×10 x－5.081×10 3  0.999 8  100～5 000
        速为 50 r/min 进行溶出试验，因为通常认为 50 r/min 与               pH 6.8磷酸盐缓冲液  y＝1.210 6×10 x－5.446×10 2  0.999 7  100～5 000
                                                                              5
                                                                              5
        中老年人体内胃肠道蠕动强度基本一致 。因此，本研                           水           y＝1.307 2×10 x－2.741×10 3  0.999 7  100～5 000
                                           [5]
        中国药房    2020年第31卷第5期                                               China Pharmacy 2020 Vol. 31 No. 5  ·587  ·
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