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治疗方法，但由于神经胶质瘤的特殊性、耐药性及血脑                           用）；pH 7.2磷酸盐缓冲液（PBS，美国Thermo Fisher Sci-
        屏障等因素，传统的化疗药物如卡莫司汀、洛莫司汀、尼                          enrific公司）；其余试剂均为国产分析纯，水为去离子水。
        莫司汀等的治疗效果均不理想             [1-2] ，而新型化疗药物如福         1.3 细胞
        莫司汀、替莫唑胺等价格较贵、副作用较大，所以进一步                              人脑胶质细胞瘤细胞株 SHG44 购自上海艾研生物
        寻找新的安全性更好、价格更易于被患者接受的化疗药                           科技有限公司，已传至第52代。
        物迫在眉睫     [1，3] 。                                  1.4 动物
            青蒿素是一种含有过氧基团的倍半萜内酯类化合                              SPF 级 Balb/c 系裸小鼠，6～8 周龄，雌雄兼用，体质
        物，是临床上常用抗疟药物，主要从我国菊科艾属植物                           量为 20～25 g，购自广东省医学实验动物中心，生产许
        黄花蒿（Artemisia annual L.）中提取而来。青蒿素及其                可证号：SCXK（粤）2013-0002。动物在室内温度 20～
        衍生物因具有高效、低毒、强抗疟性等特点，被世界卫生                          26 ℃、湿度 40％～70％条件下饲养，自由饮食（饲料由
                                                  [4]
        组织批准为治疗脑型疟疾和恶性疟疾的首选药物 。既                           广东省医学实验动物中心提供）。
        往研究指出，青蒿素类化合物对脑胶质瘤细胞有较强的                           2 方法
        抑制、杀伤作用，呈现明显的剂量关系，而且对正常细胞                          2.1 ARM-SMEDDS的制备
        的损伤很小     [5-6] 。蒿甲醚（Artemether，ARM）是青蒿素的              按本课题组自主研制方法制备 ARM-SMEDDS ：
                                                                                                        [11]
        一个重要衍生物，是通过青蒿素加氢还原生成双氢青蒿                           以 Lauroglycol 90 为油相、Cremophor RH 40 为乳化剂、
        素后再醚化形成的化合物，目前被作为抗疟疾药物而广                           Gelucire 44/14 为助乳化剂，按质量比为 4 ∶ 4 ∶ 2 制备而
        泛应用于临床；研究发现，ARM 具有抗肿瘤的效果，并                         得。经HPLC法 测得ARM的载药量为 80 mg/g。
                                                                         [11]
        可以通过血脑屏障进入中枢神经系统                [7-8] 。但ARM水溶      2.2  小鼠皮下移植瘤模型的制备
        性差、体内代谢快，其在生物体内生物利用度较低，在大                              取人脑胶质细胞瘤细胞株SHG44，经0.25％胰蛋白
        鼠的口服生物利用度仅约 20％            [9-10] 。因此，本课题组前        酶消化后，用 PBS 洗涤，计数，以无血清的 DMEM 培养
        期自主研制出了ARM的自微乳化系统（Self-microemul-                  基配制成4×10 个/mL的单细胞悬液。取上述细胞悬液
                                                                        6
        sifying drug delivery system，SMEDDS），其口服生物利        0.5 mL，接种于裸小鼠右腋皮下，待肿瘤形成后以组织
        用度为 ARM 混悬液的 16～18 倍，可有效提高 ARM 的                   块移植传代。按照文献方法             [13-14] ，选择传代后 2 周左右
        体内生物利用度，并延长其作用时间                [11-12] 。本研究在此     且肿瘤生长良好的荷瘤裸小鼠处死，取出肿瘤组织并剪
        基 础 上 建 立 皮 下 人 脑 胶 质 瘤 裸 小 鼠 模 型 ，旨 在 对           碎，采用穿刺针将大小为 2 mm 的肿瘤组织植入裸小鼠
                                                                                      3
        ARM-SMEDDS的抑瘤效果进行评价。                               右腋部，以建立裸小鼠皮下移植瘤模型。
        1 材料                                               2.3  皮下移植瘤模型小鼠肿瘤生长曲线的绘制
        1.1  仪器                                                取按“2.2”项下方法建立皮下移植瘤模型的小鼠12
            Quattro Premier XE MircoMass-2695 型液压联用仪       只，按照 SPF 级标准饲养于 NASA1000 级生物净化室
       （美国 Waters 公司）；ST-BE1100 型混旋仪（台湾斯特仪                 内，分别于接种后的第 5、10、15、20、25 天时测量小鼠体
        器设备有限公司）；移液器（北京长风仪器仪表公司）；                          质量及其皮下肿瘤组织的最短径（a）和最长径（b），按公
                                                                                   2
        CPA225D 型电子天平（德国 Sartorius 公司）；NDK200-1            式计算肿瘤组织体积（V＝a ×b/2）。以接种天数为横坐
        型氮吹仪（上海泉岛科贸有限公司）；TGL-12 型台式离                       标、肿瘤组织体积为纵坐标绘制肿瘤生长曲线，以肿瘤
        心 机（ 常 州 市 凯 航 仪 器 有 限 公 司 ）；AIRTECH               生长曲线斜率出现明显增大的时间段作为肿瘤快速增
        SW-CJ-1FD 型超净工作台、NAPCO6500 型 CO2 细胞培               殖初期。
        养箱（意大利Jouan公司）；游标卡尺（天津桂量量具刃具                       2.4 ARM-SMEDDS 对皮下移植瘤模型小鼠的抑瘤效
        有限公司）。                                             果考察
        1.2 药品与试剂                                              根据“2.3”项下建立的肿瘤生长曲线，取小鼠30只，
            ARM 对照品（中国药品生物制品检定所，批号：                        按“2.2”项下方法建立皮下移植瘤模型，并于肿瘤快速增
                                                                                                        [15]
        100271-201003，纯度：99.8％）；ARM 原料药（重庆华立               殖初期时进行分组试验。参考已有文献的给药剂量 ，
        武陵山制药有限公司，批号：20110504，纯度：≥98％）；                    本试验将皮下移植瘤模型小鼠分为对照组（生理盐水）、
        Lauroglycol 90、Gelucire 44/14（法国 Gattefosse 公司）；   ARM 混悬液组[60 mg/（kg·d），生理盐水配制，剂量以
        Cremophor RH 40（德国 BASF公司）；DMEM培养基（美               主药计]和 ARM-SMEDDS 低、中、高剂量组[10、20、30
        国 Gibco 公司）；小牛血清（上海士锋生物科技有限公                       mg/（kg·d），剂量以主药计]，每组6只。各组小鼠分别灌
        司）；胰蛋白酶（上海古朵生物科技有限公司）；0.9％氯化                       胃生理盐水或 ARM 相应剂型药液，灌胃体积约为 0.2
        钠注射液（四川科伦药业股份有限公司，作生理盐水                            mL（按照小鼠体质量微调），每日 1 次，连续给药 30 d。


        中国药房    2020年第31卷第4期                                               China Pharmacy 2020 Vol. 31 No. 4  ·465  ·
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